Биологический каталог




Клетки иммунной системы

Автор А.А.Тотолян, И.С.Фрейдлин

о высокой информативности. Необходимость нарушения целостности кожи (деэпителизации небольшого участка кожи) для создания «кожного окна» рассматривается в настоящее время как фактор риска заражения гепатитом В, что заставило отказаться от использования этого метода.

В настоящее время используются лабораторные тесты оценки миграционной и хемотаксической активности моноцитов крови. Для этого используются различные технические модификации: миграции клеток в капиллярах, из капилляров, под агарозой. Помещенные в лунку, вырезанную в слое агарозы, моноциты проявляют способность к спонтанной миграции, образуя вокруг лунки равномерную кольцевую зону. По величине этой зоны оценивают степень миграционной активности моноцитов. Уменьшение зоны миграции моноцитов в присутствии лимфоцитов или их продуктов оценивается как «ингибиция миграции» и может использоваться в качестве косвенного критерия активности цитокина — MIF. Если в центральную лунку поместить стандартный хемоаттрактант, а в периферические лунки поместить исследуемые моноциты крови, формирование асимметричной зоны миграции, вытянутой в сторону лунки с хемоаттрактантом, позволяет оценить активность хемотаксиса моноцитов.

При изучении миграции клеток в капиллярах оценивают длину пробега клеток от стартовой черты — уровня крови в капилляре. При изучении миграции клеток из капилляров оценивают площадь зоны миграции на выходе из капилляра.

Для оценки хемотаксиса моноцитов широкое распространение, в том числе и в диагностической практике, получил метод с использованием камеры Бойдена. Конструкция этой камеры такова, что исследуемые клетки отделены от стандартного хемоаттрактан-та пористым нитроцеллюлозным или поликарбонатным фильтром с диаметром пор 8 мкм, внутри которого создается концентрационный градиент хемоаттрактанта. Моноциты из своей камеры мигрируют вдоль градиента и собираются на нижней поверхности фильтра, где их количество подсчитывается микроскопически.

В качестве стандартных хемоаттрактантов для оценки хемотаксиса моноцитов часто используют синтетический N-формил мети-онил пептид — f-Met-Leu-Phe (f-MLP).

8.4. Методы оценки фагоцитарной активности моноцитов

Для оценки поглотительной активности моноцитов крови используют биологически инертные, стандартизированные по размеру частицы монодисперсного латекса с диаметром 1.3—1.5 мкм. Моноциты инкубируют в присутствии частиц латекса в течение 1 ч, затем их отмывают и при микроскопии окрашенных по Рома-новскому-Гимза мазков подсчитывают: процент фагоцитирующих клеток (фагоцитарный показатель) и количество частиц латекса, поглощенных 100 моноцитами (фагоцитарное число). Интегральный фагоцитарный индекс рассчитывают как частное от деления на 100 произведения этих двух величин. Как правило, у здорового человека фагоцитарной активностью обладают 60—80 % свежевы-деленных моноцитов крови (к числу фагоцитирующих относят только моноциты, захватившие не менее трех частиц латекса).

В отдельных случаях при оценке фагоцитарной активности моноцитов крови в качестве объектов фагоцитоза используют микроорганизмы: бактерии или дрожжевые клетки (дрожжеподобные грибы рода Candida). Основная методическая сложность оценки фагоцитоза связана с необходимостью надежной дифференцировки между захваченными (внутриклеточными) и прикрепленными к поверхности клеток (внеклеточными) объектами фагоцитоза (например, бактериями). Такая дифференцировка достигается разными путями: применением фермента лизостафина, который растворяет внеклеточные бактерии, а внутрь клеток не проникает, или применением красителей, которые окрашивают только внеклеточные бактерии или по-разному окрашивают вне- и внутриклеточные бактерии, в том числе с применением флюоресцентных красителей для окраски захваченных микроорганизмов с последующим цитофлюориметрическим учетом активности фагоцитоза [91].

Оценка микробицидности моноцитов крови является трудоемким и громоздким тестом. Принцип его состоит в том, что выделенные из крови моноциты инкубируют совместно с интересующими бактериями (чаще всего это Staphylococcus aureus) в присутствии опсонинов (например, сыворотки крови) в течение 2—6 ч, после чего делают количественные бактериологические высевы и подсчитывают количество выросших колоний. Параллельно делают высевы из контрольной взвеси бактерий, инкубированной без моноцитов. В результате определяют долю (%) убитых бактерий. Проточная цитофлюориметрия позволяет оценить микробицид-ность моноцитов при условии использования двойной окраски: одного красителя для живых бактерий, другого — для моноцитов. При этом клетки с двойной меткой учитывают как фагоцитирующие, а при параллельном использовании неокрашенных моноцитов и окрашенных бактерий микробицидность оценивают по снижению флюоресценции смеси.

Для оценки кислородзависимых механизмов внутриклеточной микробицидности моноцитов крови широкое распространение получили косвенные методы, позволяющие оценить продукцию супероксидных радикалов: метод учета хемилюминесценции и тест восстановл

страница 97
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104

Скачать книгу "Клетки иммунной системы" (1.72Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.04.2017)