Биологический каталог




Клетки иммунной системы

Автор А.А.Тотолян, И.С.Фрейдлин

атогенеза заболевания, диагностики, определения типа и активности (стадии) воспаления, оценки эффективности проводимой терапии. Необходимо отметить, что одни и те же тесты могут использоваться с разной целью. Например, оценка локомоторных функций нейтрофилов имеет диагностическое значение при «синдроме ленивых фагоцитов», НСТ-тест и хемилюминесценция — при хроническом гранулематозе, уровень пероксидазы в нейтрофилах — при миелопероксидазной недостаточности и т. д. Эти же тесты необходимы для оценки наличия и уровня развития функциональных дефектов нейтрофилов при вторичных иммунодефицитах и могут отражать активность воспаления. Кроме того, нейтрофильный тип воспаления характеризуется повышенным уровнем специфических для нейтрофилов маркеров: миелопероксидазы, эластазы, липокалина. С другой стороны, есть показатели, имеющие только диагностическое значение: ANCA — при гранулематозе Вегенера, экспрессия CD11/CD18 — при LAD. Часть показателей может быть использована для дифференциальной диагностики бактериальной и вирусной инфекции. Например, у новорожденных лейкоцитоз не может быть использован для дифференцировки типа возбудителя, в то время как только при бактериальной инфекции значительно повышены уровень НСТ-теста, липокалина и экспрессия CD64 на нейтрофилах.

Кроме периферической крови материалом для клинико-имму-нологического изучения и оценки нейтрофильного звена иммунной системы являются различные биологические жидкости организма человека: бронхоальвеолярный лаваж, мокрота, назальный смыв, синовиальная жидкость, цереброспинальная жидкость, эякулят, вагинальный секрет и т. д.

8.1. Выделение фракции гранулоцитов

Все методы выделения нейтрофилов основаны на различной плотности клеток крови, которые различаются между собой следующим образом: эритроциты > нейтрофилы и эозинофилы > лимфоциты и базофилы > тромбоциты. Можно выделить 3 основных метода [216].

1. Выделение нейтрофилов в градиенте плотности декстрана. Гепаринизированную кровь смешивают с 3 %-ным раствором декстрана 500 000, инкубируют вертикально 20 мин при комнатной температуре. Собирают плазму, обогащенную нейтрофилами, и лизируют примесь эритроцитов. В этом методе доля нейтрофилов в полученной лейковзвеси составляет 65—85 %.

2. Выделение нейтрофилов в градиенте плотности фиколл-ве-рографина (1.077). Гепаринизированную кровь наслаивают на раствор фиколл-верографина, центрифугируют, удаляют кольцо моно-нуклеаров. Осадок, содержащий нейтрофилы и эритроциты, используют для дальнейшего выделения нейтрофилов, что достигается или многократным лизированием эритроцитов, или их осаждением в растворе декстрана (см. пункт 1). В полученной лейковзвеси доля нейтрофилов составляет 95 %.

3. Выделение нейтрофилов в градиенте плотности перколла (1,130). На 63 %-ный раствор перколла сначала наслаивают 72 %-ный раствор перколла, а затем гепаринизированную кровь. После центрифугирования кроме кольца мононуклеаров получают кольцо гранулоцитов и осадок эритроцитов. Кольцо, содержащее грануло-циты, переносят в другую пробирку, клетки отмывают. Одним из принципиальных преимуществ этого метода является отсутствие необходимости лизиса эритроцитов, который приводит к существенному повреждению нейтрофилов.

8.2. Измерение агрегации и адгезии нейтрофилов

Одним из наиболее ранних проявлений процесса острого воспаления на микроскопическом уровне является феномен прилипания нейтрофилов к сосудистому эндотелию в области очага воспаления. Основными индукторами этого процесса являются С5а и IL-8. Данный феномен может быть изучен с помощью агрегометра для кровяных пластинок. Такая модификация используется исключительно для экспериментальных исследований [5].

Кроме того, разработан также тест адгезии нейтрофилов к нейлоновым волокнам. В пастеровскую пипетку набивают очищенное нейлоновое волокно. Приготовленные таким образом колонки закрепляют в штативе, который помещают над коллектором фракций с пробирками для сбора несвязавшихся клеток. Цельную кровь или суспензию гранулоцитов осторожно наслаивают на колонку и фильтруют через нее в течение 10 мин. Количество нейтрофилов подсчитывают в вытекающем из колонки материале и сопоставляют с исходным уровнем нейтрофилов в цельной крови или в выделенной суспензии клеток. Процент адгезии нейтрофилов определяют по формуле:

количество нейтрофилов в 1 мл вытекающего материала х 100 9^ количество нейтрофилов в 1 мл исходного материала

Существуют также и другие модификации данного теста, принципиально отличающиеся по объекту, к которому происходит адгезия нейтрофилов: монослой эндотелиальных клеток, стекло, пластик и т. д. Однако в настоящее время не существует стандартизированных методов оценки агрегации и адгезии нейтрофилов.

8.3. Оценка локомоторных функций

Как упоминалось выше (гл. 5), к локомоторным функциям нейтрофилов относят следующие:

• спонтанная миграция — случайная миграция клеток в отсутствие каких-либо хемоаттрактантов;

¦ хемокинез — случайная миграция клеток, стимулированная

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104

Скачать книгу "Клетки иммунной системы" (1.72Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.05.2017)