Биологический каталог




Молекулярные основы действия ферментов

Автор С.Е.Северин, Г.А.Кочетов

бстратов, а также у инактивированной ФФК st°c = 13,5S. Авторы считают, что и 12 S- и 13,5 5-формы являются тетрамерами, но, очевидно, активная форма менее симметрична или каким-то образом разрыхлена.

В заключение упомянем о работе, выполненной в нашей лаборатории [9].

При исследовании растворимой митохондриальной Н+АТФазы из сердца быка (фактор Fi) как в сопряженной регенерирующей системе, содержащей пируваткиназу с ее субстратом фосфоенол-пируватом +лактатдегидрогеназа (рис. 2 А, В), так и в системе с рН-индикатором «нейтральный красный» (рис. 2 Б, Г) (уд. активность соответственно 50 ед./мг и 20 ед./мг) было установлено, что коэффициент седиментации активного фермента (12,4+0,4 S) с точностью до ошибки измерений совпадает с данными, которые получаются при обычной скоростной седиментации в отсутствие субстрата Mg-АТФ. По-видимому, этот фермент не изменяет своей общей конфигурации при гидролизе АТФ. В ходе этой работы было обнаружено, что гидростатическое давление в ячейке ультрацентрифуги инактивирует Fi, причем тем скорее, чем выше скорость вращения ротора (измерения проводили при 48000, 60 000 и 68 000 об/мин). Инактивация приводила к искривлению графиков In г (г), из наклона которых вычисляется s, и это вынудило искать пути к стабилизации фермента. Измерения удалось произвести в двух вариантах. /. Фактор Fi был обработан бифункциональным сшивающим агентом — диметилсуберимидатом — в условиях, когда в среднем на молекулу фермента приходилась одна сшивка; при этом сохранялось около 40% активности и исчезала чувствительность к давлению (по крайней мере до 300 атм). 2. Как оказалось, чувствительность F\ к давлению быстро снижалась с уменьшением скорости реакции. Это позволило осуществить опыты нужной продолжительности при высокой концентрации АТФ, но низкой концентрации Mg2+.

Инактивация Fi под гидростатическим давлением объясняется

186

диссоциацией фермента на субъединицы, что свидетельствует об отличии от нуля парциального мольного объема реакции диссоциации [10].

• Приведенные примеры иллюстрируют некоторые возможности метода САФ, хотя далеко не исчерпывают их. В частности, из-за ограниченности места и сложности проблемы оставлены в стороне теория и ее приложение к обратимо-взаимодействующим фер-Вентным системам.

Подводя итоги всему изложенному в этой статье, следует отметить, что при известной настойчивости метод САФ в сочетании с другими методами может дать такую информацию о физико-химических и каталитических свойствах ферментов, которую затруднительно или вовсе невозможно получить другими методами.

Вместе с тем необходимо помнить об опасности появления артефактов, если пренебречь теми многочисленными контрольными опытами, о которых мы здесь кратко упоминали.

ЛИТЕРАТУРА

1. Боуэн Т. (1973) Введение в ультрацеитрифугирование, Мир, М.

2. Черняк В. Я. (1978) в сб. Физико-химические методы в молекулярной биологии, Изд-во Моск. ун-та, М., 65—95.

3. Cohen R. (1963) С. R. Acad. Sci. (Paris), 256, 3513—3515.

4. Vinograd J., Bruner R., Kent R., Weigle J. (1963) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 49 902_910.

5. Luther'M. a!, Gilbert H. F., Lee J. C. (1983) Biophys. J. 41, 272a.

6. Vinograd J., Bruner R. (1966) Fractions N 1. 2—9.

7. Cohen R., Mire M. (1971) Eur. J. Biochem. 23, 267—275.

8. Kemper D. L., Everse J. (1973) Methods Enzymol. 27, 67—82.

9. Chernyak V. Ya., Kozhanova Z. E., Chernyak В. V., Kozlov I. a. (1979) Eur. J. Biochem. 98, 585—589.

10. Черняк В. Я. (1984) здесь, 161—175.

11. Cohen R., Giraud В., Messiach A. (1967) Biopolymers 5, 203—225.

12. Wei G. J., Deal W. C. (1979) Biochemistry 18, 1129—1137.

13. Cohen R., С la verie J.-M. (1975) Biopolymers 14, 1701—1716.

14. Taylor B. L., Barden R. E., Utter M. F. (1972) J. Biol. Chem. 247, 7383—7390.

15. Cohen R., Mire M. (1971) Eur. J. Biochem. 23, 276—281.

16. H a r ringt оn -W. F., Kegeles G. (1973) Methods Enzymol. 27.

306—345.

17. Taylor B. L., Frey W. H., Barden R. E., Scrutton M. C, Ut-• ter M. F. (1978) J. Biol. Chem. 253, 3062—3069.

18. Hester berg L. K., Lee J. C. (1979) Arch. Biochem. Biophys. 197, 500—502.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Варфоломеев С. Д., Мевх А. Т., Муратов В. К., Игумнова Н. Д., Чурюканов В. В.

ПРОСТАГЛАНДИН- И ТРОМБОКСАНСИНТЕТАЗЫ. МЕХАНИЗМЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫМИ ПРЕПАРАТАМИ.......

Виноградов А. Д., Васильева Е. А.

О РЕЛАКСАЦИОННЫХ СВОЙСТВАХ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ АТФазы

Вульфсон П. Л.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ СВОЙСТВА И РЕГУЛЯЦИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ КИНАЗЫ ФОСФОРИЛАЗЫ............

Муронец В. И.

АКТИВНЫ ЛИ СУБЪЕДИНИЦЫ НАД-ЗАВИСИМЫХ ДЕГИДРОГЕНАЗ?

Перфильева Е. А., Буларгина Т. В., Северин Е. С.

СТРУКТУРА И РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗНОГО КОМПЛЕКСА .................

Рахманинова А. Б., Ягужинский Л. С.

МОДЕЛЬ РЕЦЕПТОРА ЦИТОКИНИНОВ. II. СВЯЗЫВАНИЕ ЗАМЕСТИТЕЛЯ ПРИ N(6) АДЕНИНА............

Телепнева В. И.

ЧЕТВЕРТИЧНАЯ СТРУКТУРА НАДКИНАЗ И РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА................

Черняк В. Я.

ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИКИ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИИ ПОД ВЫСОКИМ ДАВЛЕНИЕМ............... .

Черняк В. Я-

СЕДИМЕНТАЦИЯ АКТИВНОГО ФЕРМЕНТА........

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТОВ

Зав. редакцией Н. М. Глазкова

Редактор Г. Г. Есакова

Переплет художника В. Б. Гордона

Художественный редактор М. Ф. Евстафиева

Технический редактор Е. Д. Захарова

Корректоры В. П. Кададинская, Л. С. Клочков»

Тематический план 1985 г. № 155 ИБ № 2101

Сдано в набор 29.05.84. Подписано к печати 10.01.85

Л-68020 Формат 60X90/16 Бумага тип. №. 2. Гарнитура литературная. Высокая печать Усл. печ. л. 12,0 Уч.-изд. л. 13,78 Тираж 1260 экз. Заказ 423 Цена 2 р. 10 к. Изд. № 3218

Ордена «Знак Почета» издательство Московского университета. 103009, Москва, ул. Герцена. 5/7. Типография ордена «Знак Почета» изд-ва МГУ.

119899, Москва, Ленинские горы.

ИЗДАТЕЛЬСТВО МОСКОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА

в 1985 году

готовит к выпуску

книгу

ВАРФОЛОМЕЕВ С. Д., МЕВХ А. Т. ПРОСТАГЛАНДИНЫ — МОЛЕКУЛЯРНЫЕ БИОРЕГУЛЯТОРЫ

В монографии обсуждаются проблемы ферментативного синтеза простагландинов, являющихся внутриклеточными регуляторами практически всех жизненно важных функций живых организмов; рассматриваются свойства синтезирующих их ферментов, а также вопросы управления ферментативной активностью с помощью лекарственных препаратов.

Для специалистов химиков, биологов, биотехнологов, медиков, студентов и аспирантов.

ИЗДАТЕЛЬСТВО МОСКОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА

в 1985 году

готовит к выпуску

книгу

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ХИМИЧЕСКОЙ КИНЕТИКИ

Под редакцией Н. М. Эмануэля и М. Г. Кузьмина

В учебном пособии изложены теоретические основы физико-химических методов исследования: электронного парамагнитного и ядерного магнитного резонанса, люминесцентных и фотохимических методов, импульсного фотолиза, газожидкостной хроматографии. Описание методов рассчитано на то, чтобы читатель, имеющий общую физико-химическую подготовку, мог освоить эти методы, не пользуясь дополнительной литературой. Рассмотрено применение м

страница 64
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65

Скачать книгу "Молекулярные основы действия ферментов" (4.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(21.07.2019)