Биологический каталог




Структура и функции мембран

Автор В.К.Рыбальченко, М.М.Коганов

ые доли микрограмма в 1 мл) разработана интерференционная система. При прохождении света через оба сектора ячейки (один заполнен растворителем, другой — раствором) получается интерференционная картина. Каждая интерференционная полоса — это кривая зависимости показателя преломления света по длине ячейки. 3. Адсорбционная система. Через центрифужную пробирку пропускается свет (обычно ультрафиолетовый), который и преобразуется с помощью сканирующего устройства. В результате можно получить зависимость концентрации вещества от расстояния.

Зональное центрифугирование. Если необходимо отцентрифугировать раствор, в котором молекулы растворенного вещества имеют любое, но одно значение 5, то раствор просто наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют. Но если компонентов с разными величинами S два и больше, то таким способом мы не достигнем выделения чистых компонентов. Загрязнения быстро-осаждающегося компонента медленноосаждающимся будет оттого, что частицы первого движутся через раствор второго. Тогда необходимо применять зональное центрифугирование в градиенте плотности. Исследуемый раствор наносят на предварительно приготовленный в центрифужной пробирке градиент плотности и центрифугируют. Нужно обязательно запомнить, что плотность верхнего слоя градиента должна быть всегда выше плотности исследуемого раствора. (В противном случае исследуемый раствор будет «проваливаться» в градиент.) Если в исследуемом растворе было несколько компонентов, то в ходе седиментации они будут разделяться в виде серии зон (каждый в своей зоне плотности), то есть седиментация каждого компонента происходит только через растворитель. Важно также и то, что созданный градиент плотности предотвращает перемешивание в результате механических воздействий — система стремится к положению, при котором область с низкой плотностью расположена над областью с высшей плотностью.

Для градиента плотности необходимо выбирать такие вещества, которые доступны в чистом состоянии и не взаимодействуют с веществами и реагентами исследуемых растворов и суспензий. На практике часто используют сахарозу, фиколл и глицерин.

В отдельных исследованиях, когда необходимо определить коэффициент седиментации, используют .изокинети-ческие градиенты, в которых молекулы движутся с одной и той же скоростью в любой части пробирки. Таким свойством, например, обладает 5—20 %-е растворы сахарозы. Так, как изотонические свойства градиента зависят от изменения концентрации как функции расстояния вдоль пробирки, для центрифужных пробирок различной длины изокине-тические градиенты подбираются индивидуально.

Хроматография. Это один из наиболее эффективных методов разделения и идентификации химических веществ. В настоящее время существует много видов и способов применения хроматографии. Поэтому кратко охарактеризуем основные из них.

Распределительная хроматография. Система, в которую помещается вещество, имеет подвижную (растворитель) и неподвижную (сорбент) фазу. Разделение веществ в такой системе происходит за счет различий в распределении между этими двумя фазами. Коэффициент распределения —это соотношение концентраций вещества в обеих фазах.

Распределительная хроматография применяется в виде хроматографии на бумаге, тонкослойной, колоночной и газожидкостной хроматографии.

1. Хроматография на бумаге. Небольшое количество исследуемой смеси наносят на лист бумаги, высушивают (образуется стартовое пятно), помещают лист в герметическую камеру и один конец погружают, например, в воду.. Вода движется к противоположному краю листа бумаги и увлекает за собой компоненты стартового пятна. Затем лист высушивают и отмечают положение пятен, которые-обнаруживаются по цвету, флуоресценции, радиоактивности. Идентифицируют пятна путем сравнения с образцом, а затем элюируют. В данном приеме распределительной хроматографии носителем служит целлюлоза, сорбентом — связанная целлюлозой вода, а растворителем—чаще тоже вода.

2. Тонкослойная хроматография сохраняет все положительные черты хроматографии на бумаге, но позволяет разделять и неполярные вещества. Слой сорбента (до 0,5 мм толщиной) готовится из разнообразных материалов (диаметр частиц до 0,1 мм)—силикагеля, окиси алюминия, силиката магния, целлюлозы, полиамидов, полиэтилена (порошка) и др. Большую разрешающую способность этого метода (в 50—100 раз чувствительнее предыдущего) обеспечивает низкое отношение массы растворенного вещества к массе сорбента (до 1 : 108) и большое отношение поверхности к объему. Этим методом можно обнаружить 1 нмоль вещества.

3. Колоночная хроматография. В трубку вносится носитель (цилит, силикагель, порошок целлюлозы, сефадексы), на котором адсорбируется (либо удерживается капиллярными силами) соответствующий сорбент: гидрофобные растворители для разделения неполярных и гидрофильные растворители — для полярных соединений. Подвижными фазами служат соответственно спирты (или амиды) и вода. Разрешающая способность этого метода значительно ниже тонкослойной хроматографии хотя бы потому, что отношение массы растворенных веществ к массе сорбента равно 1 : 50, т. е. на 7 порядков ниже.

4. Газожидкостная хроматография. Как и прежде, неподвижной фазой является жидкость, а подвижной — газ. Образец (способный испаряться) вводят в жидком состоянии с инертным газом и нагревают. Газовая смесь проходит через колонку (капиллярные колонки достигают 2 м в длину) и перераспределяется между подвижной и неподвижной фазами. Изменения в составе газа регистрируются специальными детекторами. Этим методом можно определять. Ю-12 г вещества за считанные минуты.

Адсорбционная хроматография. Если смесь веществ, для молекул которых характерны неодинаковые адсорбционные свойства, нанесена на поверхность неподвижной фазы, через которую пропускается растворитель, то большая часть молекул будет двигаться вместе с растворителем. По мере движения вещества будут связываться (адсорбироваться), т. е. разделяться. В этом методе носители используются разные: силикагель, окись алюминия, активи

страница 37
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109

Скачать книгу "Структура и функции мембран" (2.22Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(24.08.2019)