Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

).

6. Horan P. A'., Wheeless L. L., Jr. Quantitative single cell analysis and sorting. Rapid analysis and sorting of cells is emerging as an important new technology in research and medicine, Science, 198, 149—157 (1977).

7. Herzenberg L. A., Sweet R. G., Herzenberg L. A. Fluorescence-activated cell sorting, Sci. Am., 234, 108—117 (1976).

8. Mage M. G., McHugh L. L., Rothstein T. L. Mouse lymphocytes with and without surface immunoglobulin: Preparative scale separation in polystyrene tissue culture dishes coated with specifically purified anti-immunoglobulin, J. Immunol. Methods, 15, 47—56 (1977).

9. Kamentsky L. A., Melamed M. R., Derman II. Spectrophotometer: New instrument for ultrarapid cell analysis, Science, 150, 630—631 (1965).

10. Fulwyler M. J. Electronic separation of biological cells by volume, Science, 150, 910—911 (1965).

11. Sweet R. G. High frequency recording with electrostatically deflected ink jets, Rev. Sci. Instrum., 36, 131 (1965).

12. Van Dilla M. A., Trujillo Т. Т., Mullaney P. F. et al. Cell microfluorometry: A method for rapid fluorescence measurement, Science, 163, 1213—1214 (1969).

13. Hulett H. R., Bonner W. A., Barrett J. et al. Cell sorting: Automated separation of mammalian cells as a function of intracellular fluorescence, Science, 166, 747—749 (1969).

14. Loken M. A., Herzenberg L. A. Analysis of cell populations with a fluorescence-activated sorter, Ann. N.Y. Acad. Sci., 254, 163—171 (1975).

15. Kennedy J., Axelrod M. An improved assay for haemolytic plaque-forming cells, Immunology, 20, 253 (1971).

29. Разделение и идентификация клеток 16. Broadz В. D. Lymphocyte receptors and mechanisms ol in vitro cell-mediated immunity, Transplant. Uev., 10, 112—151 (1972).

17. Mage M. G., Mcllugh L. L., Rothstein T. L. Separation of graft-vs-host antigen reactive cells in vitro. Transplant. Proc, 8, 399—401 (1976).

18. Barker C. R., Worman C. P., Smith J. L. Purification and quantification of T and В lymphocytes by an affinity method, Immunology, 29, 765—777 (1975).

19. Nash A. A., Ling N. R., Cell P. G. H. Investigation into the separation and characterization of rabbit lymphocyte-sub-populations, Abstracts II, p. 70, 10th Leucocyte Culture Conference, 1975.

20. Evans W. H., Mage M. Development of surface antigen during maturation of bone marrow neutrophil granulocytes, Exp. Hematol., 6, 37—42 (1978).

21. Rothstein T. L., Mage M. G., Jones G., Mcllugh L. L. Cytotoxic T lymphocyte killing of immobilized allogeneic tumor target cells measured by time-lapse microcinematography, J. Immunol., 121, 1652—1656 (1978).

22. Mage M. G., Mathieson B. /., Sharrow S. O., McHugh L. L., Hammerling U'., Kannalopou-los-Langevin C, Brideau D., Jr., Thomas C. A. Preparative non-lytic separation of Lyt2* and Lyt2- T lymphocytes, functional analyses of the separated cells, and demonstration of synergy in graft versus host reaction of Lyt2+ and Lyt2~ cells, Eur. J. Immunol., 11, 228— 235 (1981).

23. Mage M., Mathieson В., McHugh L. L., Sharrow S., Farrar J. Highly purified positively selected Lyt2+ T cells from normal mouse spleen have an obligatory requirement for Lyt2_ helper cells or IL2 for CTL generation in vitro, J. Cell. Biochem., Abstracts, Supplement, 6, 54 (1982).

24. Wysocki L. J., Sato V. L. «Panning» for lymmphocytes: A method for cell selection, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 2844—2848 (1978).

25. Payne S. M., Sharrow S. O., Shearer G. M., Biddison W. E. Preparative separation of human T cells reactive with the OKT4 monoclonal antibody, Int. J. Immunopharmacol., 3, 227 — 232 (1981).

26. Von Boehmer II., Shortman K. The separation of different cell classes from lymphoid organs. IX. A simple and rapid method for removal of damaged cells from lymphoid cell suspensions, J. Immunol. Methods, 2, 293 (1973).

27. MondJ. J., Mage M. G.. Rothstein T. L., Mosier D. E., Asofsky R., Paul W. E. High an TNP plaque forming cell potential of residual В cells in a T cell population, J. Immunol., 125, 1526-1529 (1980).

10*

Глава 30

Длительные культуры иммунокомпетентных клеток

С. Гаррисон Фэтмен, Френк В. Фитч

(С. Garrison Fathman, Frank W. Fitch)

30.1. История вопроса

Разработка методов получения гомогенных популяций клеток значительно ускорила анализ молекулярных основ клеточных взаимодействий и регуляторных, и эффекторных функций лимфоцитов. Опухолевые миеломные клетки и В-клеточные гибридомы, сыграли особенно большую роль в определении структуры молекул антител и генетических основ образования иммуноглобулинов. Разработано три подхода для получения моноклональных функциональных Т-клеток. Неопластические лимфомы были использованы, например, как продуценты лимфокинов [1, 2]. Однако существует относительно мало разных типов функциональных Т-лимфом, и возможность получения таких клеток зависит главным образом от спонтанного появления опухолей. Имеется несколько сообщений об успешных попытках индуцировать Т-лимфомы со специфической функциональной активностью [3, 4].

Т-клеточные гибридомы используются, кроме того, для получения различных лимфокинов, в частности супрессорных факторов [5, 8], а также для изучения условий активации Т-клеток антигеном [9]. Методы получения Т-клеточных гибридом подробно описаны ниже. Следует, однако, иметь в виду, что при интерпретации данных, полученных в опытах с Т-лимфомами и Т-гибридомами, необходимо помнить о возможной роли неизвестных продуктов опухолевых клеток в наблюдаемых эффектах. Например, Т-клеточная гибридома, полученная гибридизацией Т-клеток мышей, иммунных к гаптену /г-азобензоларсонату (АБА), продуцирует белок, специфически связывающий гаптен АБА, а также взаимодействующий с антисывороткой против перекрестного идиотипа анти-арсонатных антител [101J. В дальнейшем было установлено, что такие гаптен-специфические идиотип-положительные молекулы продуцируются родительской линией клеток Т-лимфомы, а также другими линиями лимфоидных клеток, клетками нормальной печени и селезенки [11]. И наконец, последнее предостережение: определение данной линии гибридомных клеток как продукта слияния Т-лимфомной клетки с нормальной может быть затруднено, поскольку, по имеющимся данным, некоторые гибридомы, полученные в результате слияния Т- и В-клеточных лимфом, экспрессируют детерминанты Thy-1 каждой родительской линии [12].

Другой подход к получению большого числа идентичных функциональных клеток связан с получением клонов нормальных Т-клеток. В настоящее время разработаны простые методы получения клонированных Т-клеток, которые можно поддерживать в культуре бесконечно. Это достижение еще более впечатляет, если принять во внимание, что менее 25 лет назад считалось невозможным

30. Длительные культуры иммунокомпетентных клеток культивировать лимфоидные клетки. Действительно, функции лимфоцитов были тогда еще неизвестны [13]. Значительный прогресс в культивировании Т-клеток был достигнут благодаря относительно небольшому числу важных технических усовершенствований.

Представление о том, что малые лимфоциты не размножаются в культуре, было опровергнуто в 1960 г. эвристическим открытием Ноуэллом [14] митоген-ного действия фитогемагглютинина (ФГА) на лимфоциты.

Вскоре после этого для изучения иммунного ответа на аллоантигены был разработан метод получения смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ) [15, 16]. Первоначально бласт-трансформация или клеточная пролиферация, индуцированные при стимуляции антигеном, были единственным критерием, свидетельствующим об иммунной реакции. Однако удалось также получить ответ цитотоксических эффекторных клеток в культуре [17, 18]. Относительно небольшие изменения техники культивирования, включающие использование 2-меркаптоэтанола, привели к значительному усовершенствованию методов регистрации ответа in vitro [19—21]. При повторных стимуляциях соответствующим антигеном оказалось возможным культивировать цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) в течение нескольких недель. Ответ ЦТЛ, генерированных in vitro, длится недолго и цитолитическая активность клеток затем неизбежно исчезает [22, 23]. Нецитолитические клетки, которые пролиферируют в ответ на антигенную стимуляцию, по-видимому, сохраняются в культуре дольше. Однако длительные культуры нецитолитических клеток в этих работах не исследовались, поскольку весь интерес был сосредоточен на изучении ЦТЛ.

Незаменимым компонентом для длительного культивирования Т-лимфоцитов оказался фактор роста Т-клеток (TCGF). В культуры TCGF может быть добавлен из экзогенных источников, а может продуцироваться и эндогенно при активации некоторых Т-лимфоцитов. Собственно данные о том, что культуральная среда, полученная при стимуляции лимфоцитов в смешанной культуре, вызывает пролиферацию других лимфоцитов, были опубликованы за десять лет до появления статьи, в которой описывался TCGF [26]. Значение этих более ранних наблюдений в свое время не было понято. Открытие (или повторное открытие) TCGF, как и открытие активации Т-лимфоцитов митогенами, было делом счастливого случая (К. Gallo, личное сообщение). Галло (Gallo) и сотрудникам требовалось получить большое количество гранулопоэтических клеток человека для биохимических и вирусологических исследований. Ранее при поиске подходящего источника кондиционированной среды (КС), поддерживающей длительный рост таких клеток, они использовали среду, полученную после стимуляции человеческих лимфоцитов ФГА. Как было показано ранее, такая КС содержит колониестимулирующий фактор (CSF), усиливающий краткосрочный рост гранулопоэтических клеток. При этом наблюдался также выраженный рост лимфобластов, но считалось, что эти клетки представляют собой В-лимфоциты, трансформированные в результате инфицирования вирусом Эпштейна—Барр (ВЭБ). Спустя несколько лет, когда, не удовлетворенные полученными результатами, Галло и сотрудники снова стали тестировать КС стимулированных ФГА лимфоцитов, они выявили сходный феномен. Однако на этот раз авторы оценили некоторые свойства получе

страница 95
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(22.09.2017)