Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

инироваться с различными генами Fl 169]. Аналогичный подход использовали для изучения механизма переключения генов lg в В-клетках, трансформированных вирусом Абельсона, где, по-видимому, происходит спонтанное переключение с синтеза и-цепей на синтез ,у2Ь-цепей [34]. Для этого получали независимые гибридомы из IgM- и из ^С2Ь-секретирующих клеток. Таким образом оказалось возможным стабилизировать геном в обеих произошедших от общего предка клеточных линиях в виде клонов и, сравнивая р> и -у2Ь-секретирующие гибридомы, получить информацию о генных перестройках при переключении изотипа в пределах одной клонированной линии.

Крайне информативным оказалось использование гибридом для анализа разнообразия антител, образующихся в ходе иммунного ответа. От мышей, иммунизированных а 1-3-декстраном или фосфорилхолином, стандартными методами было получено большое количество гибридом со специфичностью именно к этим антигенам. Несмотря на то что ответ на эти антигены считался высоко гомогенным, анализ аминокислотной последовательности секретируемых гиб-ридомами антител показал, что они представляют собой семейство довольно близких друг к другу, но в то же время достаточно гетерогенных антител [70, 71 ]. Аналогично для получения информации об иммуноглобулиновых генах и механизмах, обусловливающих разнообразие антител, была успешно использована панель гибридом, специфичных к гаптенам арсонату и нитрофенилу [72, 73]. Итак, благодаря возможности клонировать клетки иммунной системы было получено большое количество новых данных о механизмах рекомбинации, обусловливающих разнообразие V-районов иммуноглобулинов, и особенно о роли соматических мутаций в возникновении разнообразия антител [74].

К использованию гибридом для изучения генетических механизмов, лежащих в основе разнообразия антител, имеют отношение и попытки создания анД. Ф. Кирней

тиген-специфических гибридом с фенотипами, соответствующими различным стадиям дифференцировки В-клеток. Подобные попытки, однако, не всегда были успешными. Частично это может быть связано с несоответствием фенотипов сливающихся клеток. Некоторые данные по этому вопросу получены в опытах по слиянию пре-В-клеток с клетками миеломы, в которых полученные гибридомы синтезировали главным образом секреторные ц-цепи [75]. Усилия по созданию гибридом, обладающих фенотипом В-клеток, т. е. экспрессирующих специфичные по отношению к антигену поверхностные иммуноглобулины, и остающихся чувствительными к факторам регуляции роста, оказались безуспешными, что объясняется, возможно, доминированием фенотипов окончательно дифференцированных клеток миеломных линий, использованных для слияния.

28.4.2. Моноклональные антитела и лимфогемопоэтические клетки

Клетки лимфогемопоэтической системы весьма разнообразны и включают в себя как стволовые, так и более дифференцированные клетки. К таким дифференцированным клеткам относятся: а) клетки, участвующие в образовании антител; б) большой набор клеток тимусного происхождения (Т-клетки), участвующих в уничтожении чужеродных клеток и в модуляции образования антител; "

в) моноциты или фагоциты, действующие при иммунной защите как антиген-презентирующие клетки, а также как клетки-мусорщики и клетки-киллеры, и

г) природные киллеры (ПК, NK), природа и функция которых постепенно проясняются [76]. Принадлежа к разным рядам и находясь на разных стадиях дифференцировки, эти клетки экспрессируют соответствующие дифференцировоч-ные маркеры. Для изучения изменений таких мембранных маркеров оказываются крайне полезными моноклональные антитела.

На сегодняшний день известно большое количество типов Т-клеток, имеющих различные хелпериые, супрессорные и киллерные функции. В гл. 4 рассматривается, каким образом с помощью моноклональных антител можно анализировать субпопуляции Т-клеток, а также избирательно выделять индивидуальные типы клеток в тех случаях, когда клетки сходных линий, обладающие многими одинаковыми дифференцировочными маркерами, могут быть различны лишь по экспрессии уникальных, узнаваемых моноклональными антителами антигенов.

Такие панели моноклональных антител интенсивно используются для изучения различных этапов нормального развития лейкоцитов. Кроме того, поскольку многие виды лейкоза представляют собой опухолевые заболевания, характеризующиеся трансформацией Т- или В-клеток, а также клеток моноцитарно-го ряда, с помощью моноклональных антител, направленных против поверхностных антигенов этих клеток, можно с определенной степенью достоверности определить тип клеток, характерных для данного конкретного лейкоза [76]. Это поможет разработать стратегию лечения, поскольку различные типы клеток по-разному реагируют на разные способы химиотерапии.

28.4.3. Взаимодействия идиотип — антиидиотип

Большое внимание было уделено предполагаемому сетевому взаимодействию между идиотипами вариабельных участков иммуноглобулинов, синтезируемых и экспрессируемых В-клетками и идиотип-подобными структурами клеток, принимающими участие в регуляции иммунного ответа [77]. Использование гибридом позволило провести значительно более тонкий анализ этих

28. Гибридомы и моноклональные антитела 267

взаимодействий. Антиидиотшшческие антитела, полученные традиционным путем, обычно представляют собой гетерогенную популяцию антител с различными изотипами, специфичных к разным идиотинам, находящимся как внутри, так и вне антиген-связывающих участков районов V одной и той же молекулы (см. также гл. 9). Использование моноклональных антиидиотипических антител позволило сравнить биологические активности антиидиотипических антител разных изотипов [78]. Более того, оказалось, что эти моноклональные антитела можно использовать и как тест-реагенты на различные районы связывающих участков иммуноглобулинов [79, 80].

Антиидиотипические антитела, используемые в качестве клональных маркеров, стали важным биологическим инструментом для изучения процессов,

igAik.

Соматические гетеротивриды

Клетки лимфатического узла

Антитела

Антиген 8,653

Соматические гибриды

С1

Скрининг анти-Id (+)-клонов методом ИФА

•Реклонирование Моноклональные анти-М-антитела

Рис. 28.4. Схема получения моноклональ- булинов, секретируемых опухолевыми ных антиидиотипических антител, направ- ALL-клетками. Аг — антиген, ИФА — им-ленных против свободных IgA-иммуногло- муноферментный анализ.

связанных с возникновением и развитием клонов неопластических В-клеток 181, 82]. На рис. 28.4 приведена схема изучения острой лимфоцитарной IgA-лей-кемии человека (ALL — acute lymphocytic leukemia). Поскольку клетки данной лейкемической линии не секретируют иммуноглобулинов, то сперва, используя ранее описанный метод [83], осуществляли их слияние с клетками несекретирующей мышиной миеломы, получая в результате гетерогибридомы, секретирующие человеческие IgA^-иммуноглобулины ALL-природы. Одновременно с этим с помощью уже описанной процедуры мышей иммунизировали интактными ALL-клетками, выделенными из крови больных. Гибридомы, полученные при слиянии клеток лимфатического узла с миеломой, подвергали затем скринингу на очищенных IgA^-иммуноглобулинах, выделенных из гете-рогибридом для идентификации моноклональных антител, имеющих антиидио-типическую специфичность. За три недели были получены моноклональные антиидиотипические антитела, специфичные к slgA, имеющимся на поверхности данных ALL-клеток. Эти антитела были затем использованы для изучения происхождения неопластических В-клеток. Оказалось, что у данного больного в костном мозге до или на стадии пре-В-клетки произошла неопластическая трансформация В-клетки, которая и обусловила появление лейкемических sIgAj-клеток [84].

Наконец, моноклональные антиидиотипические антитела используются для иммунотерапии больных, страдающих В-клеточной неоплазией; при этом Д. Ф. Кирней

имеется сообщение об успешном лечении больного с В-клеточной лимфомой [85]. Тем не менее важно подчеркнуть, что, хотя идиотипические маркеры, по-видимому, являются уникальными и высокоспецифичными маркерами опухолевых клеток В-клеточного ряда, их использование в подобной иммунотерапии не всегда может оказаться успешным. Если трансформация лимфоидной клетки произошла до или на стадии пре-В-клетки, как, например, имело место в случае IgAlx-ALL, то антиидиотипические антитела не будут реагировать с поверхностью опухолевых клеток, поскольку такие клетки не экспрес-сируют функциональных рецепторов [86, 87]. В результате идиотипспецифиче-ские антитела будут связываться только с более зрелыми клетками В-клеточного ряда, не взаимодействуя с той популяцией клеток, из которой данные лейкемические клетки, по всей видимости, и произошли. Подобные проблемы, как будет показано ниже, могут возникать и при попытках использовать опу-холеспецифичные антитела для иммунотерапии.

28.4.4. Опухолевые антигены

С давних пор иммунологи, работавшие с опухолями, мечтали выявить у человека антигены, специфичные для опухолей. Использование моноклональных антител, обладающих точно известной специфичностью, дало возможность идентифицировать целый ряд антигенов, характерных, по-видимому, для определенных опухолей. Были описаны антитела, реагирующие с меланомными антигенами'[88], с клетками колоректальной карциномы [89], нейробластомы [90] и с антигенами, общими для различных видов лимфатической лейкемии [91]. Таков немногочисленный перечень моноклональных антител, выявляющих антигены, экспрессируемые в большей степени или исключительно на поверхности опухолевых клеток.

Таким образом, использование моноклональных антител позволяет избежать проблем, связанных с применением обычных антител, индуцируемых опухолевыми клетками, когда в ответ на антиген у животного появляется множество различных антител, реагирующих не только с опухолевыми антигенами, но также и с антигенами, экспрессируемыми нормальными клетками. Трудности получения гетерогенных антител, не реагирующих с нормальными клетками, ранее ограничивали их использование при постановке диагноза и лечении.

28.4.

страница 86
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.07.2017)