Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

еляция между подавлением высвобождения гистамина и включением меченого фосфата в фосфолипиды и фосфатидную кислоту [245]. Наиболее вероятный путь увеличения радиоактивности фосфатидной кислоты таков: стимулируется фермент, зависимый от Са2+ — фосфолипаза С, расщепляющая фосфолипиды до 1,2-диацилглицеро-ла (ДАГ); затем с помощью ДАГ-киназы ДАГ фосфорилируется, образуя фосфатидную кислоту. В подтверждение этой схемы были получены данные о том, что в первую минуту после стимуляции тучных клеток крыс концентрация ДАГ повышается в 4 раза [245]. Этот эффект интересен по нескольким причинам. Прежде всего, ДАГ представляет собой соединение, способствующее слиянию липидных мембран [246]. Кроме того, ДАГ легко разлагается соответствующей липазой (весьма активной в тучных клетках) до моноацилглицерола (МАГ) и свободной жирной кислоты. Цепь реакций, катализируемых фосфолипазой С и ДАГ-липазой, является возможным механизмом секреции жирных кислот активированными тучными клетками; нельзя также исключить участие в этом процессе фосфолипазы А2. Образование МАГ явление, само по себе заслуживающее внимания, поскольку МАГ, даже более активно, чем ДАГ, способствует

7* Ч. В. Паркер

слиянию мембран. Свободные жирные кислоты действуют на мембраны, АК превращается в 5-ГЭТЕ и ее пероксид — вещества, индуцирующие секрецию. Наконец, ДАГ может превращаться также в фосфатидную кислоту, обладающую свойствами кальциевого ионофора, как показано на модельных липидных мембранах [247]; эта реакция, возможно, объясняет усиление обмена Са2+ в процеессе активации тучных клеток. Таким образом, некоторые, если не все, изменения метаболизма тучных клеток, связанные с экзоцитозом, в том числе секреция жирных кислот, изменения проницаемости мембраны для Са2+ и слияние мембран, возможно, объясняются согласованным действием фосфолипазы С, ДАГ-киназы и ДАГ-липазы. Энергетический барьер при слиянии преодолевается благодаря появлению участков мембран, богатых гидрофобными липидами (ДАГ и МАГ) и содержащих мало фосфолипидов с полярными головками [248].

Другое быстро происходящее изменение метаболизма фосфолипидов в секретирующих тучных клетках, базофилах или клетках линии RBL-1 — это повышение уровня метилирования. Фосфатидилэтаноламин (ФЭ), постепенно ме-тилируясь, превращается в монометил-ФЭ, диметил-ФЭ, триметил-ФЭ (идентичный ФХ) и в конечном итоге под действием фосфолипазы А2 может также образовываться лизо-ФХ [249—253]. Последовательность этих реакций легко продемонстрировать, используя в качестве предшественников либо 14С-фосфатидил-серин (ФС), превращающийся в результате декарбоксилирования в ФЭ, либо 3Н-метил-8-аденозилметионин. В тучных клетках метилирование наблюдается ужечерез 10с, быстро достигает максимумаи через 30—60 с возвращается к контрольному уровню. Такие агонисты сАМР, как теофиллин и изопротеренол, как и в случае включения метки в фосфолипиды, угнетают и секрецию гистамина, и накопление 45Са2+, и реакцию метилирования. Метилирование подавляется также такими специфическими ингибиторами, как S-изобутирил-З-деазаадено-зин, взятый в отдельности или же в комбинации с S-аденозилгомоцистеином [250]. При этом уменьшается также секреция арахидоновой кислоты [251]. Данные, полученные в опытах с другими клеточными системами, указывают, что в метилировании участвуют по крайней мере два разных фермента [249]; по предварительным данным некоторые метилированные фосфолипиды очень быстро переносятся с внутренней на наружную сторону плазматической мембраны. В отличие от стимуляции включения 32Р в фосфолипиды метилирование не индуцируется ионофорами А23187 и 48/80, но вызывается Кон А или веществами, перекрестно-сшивающимися с IgE [252]. Отсюда можно предположить, что механизм действия двух первых агентов отличается от такового для двух последних. В пользу этого предположения свидетельствуют, во-первых, неспособность ионофоров повышать содержание сАМР, что обычно происходит в присутствии Кон А или других IgE-зависимых стимулов, и, во-вторых, независимость ответа на ионофоры от экзогенного ФС. Поскольку ФС может метилироваться и превращаться в лизо-ФХ, обладающий способностью сшивать мембраны, это может объяснить зависимость процессов стимуляции IgE и Кон А от ФС. В других исследованиях, однако, было показано, что основную роль в действии ФС играет лизо-ФС, а не лизо-ФХ [184].

Изменения в обороте 32Р-фосфолипидов и их метилировании в активированных тучных клетках весьма впечатляющи, однако нельзя забывать, что они затрагивают лишь небольшую часть всех клеточных фосфолипидов. Если эти реакции играют столь важную роль в активации клеток, очевидно, что фосфолипиды должны располагаться в участках мембраны, наиболее существенных для активации. Выявить эти участки экспериментальным путем — задача, довольно трудная. Один из возможных подходов к решению этой проблемы —

27. Медиаторы: высвобождение и функции это поиск вариантных линий клеток RBL-1, не содержащих метилтрансферазы или некоторых других ферментов, участвующих в обмене мембранных липидов [251]. Однако сколько-нибудь значительное отсутствие метилирования фосфолипидов может привести к таким общим нарушениям структуры плазматической мембраны, что нормальные секреторные реакции станут невозможны. Следовательно, для однозначного вывода в исследованиях подобного рода необходимо доказать, что фосфолипидный состав клеток не изменяется в целом и что не происходит потери других белков.

В активированных тучных клетках изменяется также метаболизм циклических нуклеотидов. При стимуляции перитонеальных тучных клеток крыс кон-канавалином A, IgE, антителами к IgE или смесью IgE с поливалентным антигеном в них быстро возрастает содержание сАМР, достигающее максимума через 15—20 с, а затем быстро падающее [189, 250, 254—257). Иногда пик синтеза сАМР достигается лишь через 3—5 мин, что может объясняться секрецией ПГ-D2, поскольку процесс подавляется индометацином [255]. Повышение содержания сАМР наблюдается также при стимуляции базофилов периферической крови, больных хроническим миелолейкозом [258]. По-видимому, быстрое накопление сАМР обусловлено активацией аденилат-циклазы, хотя точно это не доказано. Повышение концентрации сАМР непосредственно перед высвобождением медиаторов указывает на возможное участие этого нуклеотида в индуцировании секреции в тучных клетках, как это, по-видимому, имеет место в других активно секретирующих клетках [259]. Видимый парадокс заключается в том, что многие фармакологические агонисты сАМР — ПГ-Ег и ПГ-Е2, теофиллин, моно- и дибутирил-сАМР угнетают, а не стимулируют секрецию [260], хотя это не всегда связано с увеличением содержания сАМР [189, 259]; ПГ-Б2 представляет собой исключение, так как он не угнетает синтеза сАМР в базофилах человека, а даже стимулирует. Подавление секреции агонистами сАМР особенно заметно при реакции, стимулированной перекрестно-сшитыми IgE, а не ионо-форами 48/80 или А23187. Более того, оба ионофора, являясь стимуляторами секреции в тучных клетках крыс, значительно понижают содержание сАМР (даже без его транзиторного повышения) [189]. Следовательно, эти ионофоры стимулируют секрецию медиаторов иным способом, чем Кон А или IgE-зависи-мые агенты; возможно, ионофоры действуют в поздней фазе индукции. Подавление секреции агонистами сАМР может свидетельствовать либо о том, что быстрое нарастание сАМР в ответ на Кон А или антитела к IgE не связано с секрецией, либо о том, что угнетающие ферменты действуют на другой внутриклеточный пул сАМР [189].

Поскольку наиболее хорошо изученный эффект сАМР в клетках млекопитающих — это стимуляция соответствующих сАМР-зависимых протеинкиназ, то один из способов выяснения роли сАМР в секреции сводится к изучению фосфорилирования белков [261]. В цитозоле тучных клеток, предварительно стимулированных антителами против крысиных иммуноглобулинов [(ЕаЬ')2-фрагменты], через одну минуту обнаруживается повышенная активность протеинкиназы, комигрирующая при хроматографии вместе со свободной каталитической субъединицей сАМР-зависимой протеинкиназы [255]. Отсюда можно предположить, что сАМР образуется в количествах, достаточных для стимуляции протеинкиназы в интактных клетках. Заманчиво также предположить (хотя прямых доказательств нет), что в клетках при стимуляции активируются Са2+-зависимые протеинкиназы: во-первых, фермент этот широко распространен в различных клетках [262], во-вторых, ионы Са2+ имеют важное значение для секреции в тучных клетках и, наконец, Са2+-зависимая протеинкиназа легко стимулируется ДАГ, количество которого в процессе секреции повышается [246]. Независимо Ч. В. Паркер

от вопроса об участии киназ данные по фосфорилированию показывают, что при стимуляции меченных 32Р04 перитонеальных тучных клеток ионофорами А23187 и 48/80 усиливается включение 32Р04 в белки с кажущейся мол. массой 59 и 42 кДА [263]. При активации тучных клеток крыс наблюдается также быстрое фосфорилирование а-субъединицы рецептора IgE [108, 264]. Такой ответ отмечается при действии как ионофора А23187, так и смеси IgE. и антигена, причем фосфорилирование становится заметным уже через 15 с и является специфичным, так как 6-компонент рецептора при стимуляции не фосфорилируется.

Помимо изменений в высвобождении медиаторов под действием фармакологических агентов, влияющих на метаболизм сАМР, секрецию медиаторов, по крайней мере в базофилах периферической крови человека, могут подавлять глюкокортикостероиды [265]. Действие их проявляется как in vitro, так и in vivo, требует не менее 12 ч обработки и наблюдается при терапевтических концентрациях глюкокортикоидов.

Среди продуктов обмена арахидоновой кислоты в перитонеальных тучных клетках крыс с помощью масс-спектроскопии можно идентифицировать ПГ-Б2, ТкВ2, 6-оксо-ПГ-Р1а, nr-F2aH 12-ГЭТЕ [266]. Наличие ТкВ2, nr-F2a и 6-оксо--nr~Fla может, однако, объясняться присутствием в препарате макрофагов, так как они продуцируют большое количество этих веществ. По данным тонкослойной и жидкостной хроматографии под высоким давлением эти клетки продуцируют также 5-ГЭТЕ и 5,12-

страница 61
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(30.05.2017)