Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

е инфильтраты. При достаточно сильной реакции могут повреждаться также крупные кровеносные сосуды, в результате их содержимое может попадать в очаг воспаления.

У человека и морских свинок интенсивность ГЗТ определяют по диаметру уплотненного участка ткани на поверхности тела, лишенной волос. У мышей антиген можно наносить на ушную раковину или на подошвы лапок, размер отека измеряют кронциркулем или микрометром. В качестве контроля для определения неспецифического отека использовали животных, исходно иммунизированных другим антигеном после введения им в подошву лапки основного антигена.

Оценить степень воспаления можно также, используя радиоактивное лечение in vivo. Вскоре после иммунизации антигеном животным вводят различные радиоактивные нуклеотиды, например 1251-5'-иодо-2-дезоксиуридин (125I-UdR) [9]. Активно делящиеся клетки накапливают метку; появление меченых клеток в подошве лапок и ушной раковине обычно коррелирует с воспалительной реакцией ГЗТ. Неиммунные клетки, или клетки, иммунизированные другим антигеном, размножаются в месте введения данного антигена довольно слабо и метку не поглощают. Этот метод, хотя и коррелирует с появлением воспалительной реакцией in vivo, обладает более низкой чувствительностью, чем простое определение размера отека. Большинство исследователей, использующих реакцию ГЗТ в качестве системы для определения активности Т-клеток, предпочитают прямое определение степени воспалительного процесса по размеру очага.

С ГЗТ коррелирует синтез активного лимфокина, известного под названием фактора, ингибирующего миграцию [10]. Этот фактор образуется при стимуляции in vitro иммунных ТГзт-клеток соответствующим антигеном. Содержащую ФИМ культуральную среду отбирают из культуры Тгзт-клеток и определяют ее способность ингибировать или ограничивать миграцию клеток перитонеаль-ного экссудата морской свинки из вертикальных капилляров. Контрольные клетки перитонеального экссудата мигрируют из таких капилляров, а клетки, обработанные культуральной средой Тгзт-клеток, мигрируют существенно слабее. Расстояние, на которое перемещаются те и другие клетки, можно измерить довольно точно. Таким образом, индекс активности в этом тесте определяется как степень ингибирования миграции.

Мышиные клетки того же фенотипа, что и ТГзт (клетки Lyt 1+2"), выделяют ФИМ. Как оказалось, эти клетки способны выделять молекулы, сходные с ФИМ и в смешанной культуре лимфоцитов. Пока неясно, идентичны ди молекулы ФИМ, выделяемые клетками Lyt 1+ и Lyt 2+. При анализе ФИМ человека, полученного обычным способом, были обнаружены молекулы трех различных типов, различающиеся по молекулярной массе, чувствительности к трипсину и химотрипсину, а также по изоэлектрической точке. Возможно, что разные популяции Т-клеток могут продуцировать различные молекулы, обладающие сходным эффектом in vitro. В настоящее время считается, что большая часть М. И. Грин, С. Шаттен, Д. С. Бромберг

биологически важных молекул типа ФИМ продуцируется клетками Lyt 1+2-[10].

Среди лимфокинов, отвечающих in vivo за наличие в воспалительном инфильтрате моноцитов и макрофагов, ФИМ, по-видимому, принадлежит наиболее важная роль (рис. 26.2). Об этом свидетельствует ряд данных. Было показано, что введение ФИМ in vivo приводит к значительному снижению количест-

Примирование « антигеном

5 дней \ jrC^?4_-----

Механизм воспалительного процесса. вызванного Т-клетнами_ '

, Введение того же антигена в подошву лапки

Л1ерез 24 ч появляется воспаление и развивается отек

Т-клетки Lyt 1+, активированные антигеном

V Лимсрокины

.Активированные макрофаги

Рис. 26.2. Упрощенная схема классической реакции замедленного типа. Мышей иммунизируют туберкулином. Через 5—7 дней (это время для разных антигенов различно) мышам в подошву лапок вводят тот же антиген. Наступает отек лапки, размеры которого через 24—48 ч можно измерить. На рисунке в прямоугольнике показан клеточный и молекулярный процессы при

воспалении. Иммунные Т-клетки с фенотипом Lyt-1+ синтезируют и секретируют лимфокины, например фактор, ингибирую-щий миграцию (ФИМ), и другие молекулы, вызывающие накопление макрофагов в пораженном участке и их активацию. Уплотнение ткани при реакции ГЗТ возникает в результате таких межклеточных взаимодействий.

ва циркулирующих в крови моноцитов. Кроме того, культуральная среда, содержащая ФИМ при локальном введении, вызывает воспалительные явления. И наконец, при местном введении антитела против ФИМ подавляют воспаление [10].

Со способностью к реакции ГЗТ корелирует также тест на пролиферацию Т-клеток. В этом тесте измеряется способность сенсибилизированных in vivo мышиных Т-клеток (обычно клеток Lyt-l+2~) размножаться и включать меченый тимидин in vitro в ответ на соответствующим образом добавленный антиген. Результаты многих работ убедительно свидетельствуют о том, что наблюдаемая в этом случае пролиферация относится не только к клеткам Lyt-1+. Другие типы клеток (В-клетки, неиммунные Т-клетки) вовлекаются в пролиферативный процесс клетками Lyt-1+, чувствительными к данному антигену [11, 12]. Хотя этот тест имеет важное значение для выяснения механизма активации Т-клеток, не следует, по-видимому, думать, что он полностью коррелирует со способностью к ГЗТ.

Были изучены свойства клеточной поверхности иммунных лимфоцитов, участвующих в ГЗТ. В ранних работах было обнаружено, что в отличие от сывороточных антител лимфоидные клетки способны переносить реактивность

26. Реакция гиперчувствительности замедленного типа к ГЗТ. Впоследствии выяснилось, что лимфоциты подразделяются на клетки двух основных типов — В-клетки, образующие антитела, и Т-клетки, формирующиеся в тимусе. Оказалось, что за клеточные иммунные реакции отвечают клетки второго типа. Наиболее убедительно это было показано в экспериментах по переносу реактивности. Оказалось, что популяцию клеток можно лишить иммунологической компетентности, обработав ее антителами против Т-клеток (антитела против Thy-1) и комплементом [5]. Действие на иммунные лимфоциты антител против иммуноглобулинов не влияло на способность их переносить иммунитет. Стало возможным также обогащать популяцию Т-клеток, используя такие методы, как пропускание клеток смешанной популяции через колонки с нейлоновой ватой или колонки с антителами против иммуноглобулинов для того, чтобы удалить все остальные виды клеток. Используя такие методы обогащения, удалось показать, что антиген-специфические реакции замедленного типа осуществляются иммунными Т-клетками [5].

С помощью антител к Lyt-антигенам был определен фенотип мышиных Т-клеток, ответственных за классическую реакцию ГЗТ и КЧ. Было показано, что Т-лимфоциты, осуществляющие ГЗТ к растворимым белкам, перенос классической ГЗТ и реакцию КЧ (ТКч), имеют фенотип Lyt-1+2" [10, 13]. Имеются также данные о том, что некоторые Тгзх и Ткч обладают фенотипом Lyt-1~2+ [14]. Возможно, эти фенотипически различные клетки ограничены различными субобластями Н-2 и представляют собой разные типы клеток. Следует отметить, что антиген Lyt 1 экспрессируется на Т-клетках всех типов [14а]. Следовательно, популяция Lyt-1~2+ на самом деле является набором клеток, устойчивых к лизису антителами против Lyt-1 и комплементом.

Во многих опытах было показано, что гены главного комплекса гистосовместимости (МНС) у некоторых видов кодируют продукты, ограничивающие действие клеток Тгзт. В работе Чейза и Ландштейнера [3] впервые указывалось, что иммунные лимфоциты могут переносить способность к ГЗТ неиммунизиро-ванным сингенным морским свинкам. Когда в качестве реципиента использовали нелинейных морских свинок, у многих животных ГЗТ не развивалась. Тогда было не очень понятно, почему клетки не могут переносить реакции животным, несовместимым по антигенам гистосовместимости; предполагалось, что организм хозяина отторгает перенесенные клетки.

В последующем во многих лабораториях была обнаружена способность к рестрикции у различных элементов, кодируемых МНС разных видов. От этих элементов зависит успех взаимодействия размножающихся Т-клеток (Тр) с клетками, представляющими антиген (КПА), хелпериых Т-клеток (Th) с КПА, а также В-клеток и цитотоксических Т-клеток (Тс) с клетками-мишенями. В первых двух случаях для взаимодействия Тр с КПА и Th с КПА и В-клетками элементом рестрикции оказался продукт /-области МНС мышей или морских свинок (антигены МНС класса II). Элементами рестрикции при взаимодействии Т0-клеток с клетками-мишенями являются продукты генов Н-2К или H-2D (антигены МНС класса I).

Регуляторную роль генов МНС в классической реакции ГЗТ у мышей исследовали Миллер и др. [15]. Способность к ГЗТ нельзя было перенести алло-генным реципиентам, однако ее удавалось перенести реципиентам с идентичным МНС, даже если другие гены (не МНС) были различны. Ландштейнер и Чейз предположили, что в данном случае аллогенные клетки отторгаются реципиентом [3]. Для исключения такой возможности иммунные клетки гибрида Fj (линия А X линия В) переносили родительским реципиентам линии В. В этом случае реципиент мог отвечать на аллогенные детерминанты линии А клеток Fx, но иммунитет переносился успешно. Были проведены также эксперименты М. И. Грин, С. Шаттеи, Д. С. Бромберг

обратного типа, когда иммунные клетки одной из родительских линий переносили неиммунизированным реципиентам гибридов ?г. В этом случае могла возникать реакция «трансплантат против хозяина». Однако способность к ГЗТ ^ыла успешно перенесена, так что реакция «трансплантат против хозяина», о-видимому, не оказывает влияния на функцию Тгзт-клеток.

Используя конгенные линии мышей, удалось точно идентифицировать те участки МНС, которые отвечают за взаимодействие клеток, приводящее к ГЗТ. Такие исследования были проведены со многими антигенами. Например, в одном из них иммунные клетки одной из линий переносили реципиентам, различающимся по определенной субобласти Н-2. Удалось показать, что в случае растворимых белковых антигенов, некоторых гаптенов, а также вирусных и микробных антигенов идентич

страница 47
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(22.09.2017)