Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

вают, что ПК возникают из предшественников, расположенных в костном мозге [40].

Таким образом, мышиные ПК легко отличить от цитотоксических Т-клеток по их поверхностным маркерам. Мышиные ПК не только не имеют некоторых характерных маркеров ЦТЛ (Lyt 2, 3), но у них имеются собственные поверхностные маркеры, не обнаруживаемые на эффекторных Т-клетках. Аналогичные различия выявляются также между ЦТЛ и ПК человека.

Природные киллеры и ЦТЛ объединяет способность непосредственно лизи-ровать определенные клетки-мишени. Но и здесь заметны различия между двумя типами эффекторных клеток. Как указывалось ранее, для ЦТЛ характерна исключительная иммунологическая специфичность. Они могут, например, различать тринитрофенильный и динитрофенильный гаптены. ПК, напротив, полностью лишены классической иммунологической специфичности и могут убивать клетки вне зависимости от их органного, генетического и видового происхождения [40]. Следовательно, в отличие от классических ЦТЛ, цитотоксичес-кая активность ПК не рестриктирована продуктами генов главного комплекса гистосовместимости. Независимо от своего видового происхождения ПК обладают способностью лизировать широкий набор типов клеток, в особенности лим-фомы и клетки других опухолевых линий. Нормальные ткани, в частности фибробласты, тимоциты и часть клеток костного мозга также могут лизироваться ими, но в целом нормальные клетки гораздо менее подвержены лизису под действием ПК, чем опухолевые клетки.

Чтобы объяснить, почему ПК способны лизировать клетки такого широкого спектра, было предложено две основных теории. Одна возможность состоит в том, что специфичности ПК организованы по клональному принципу. Эта гипотеза предполагает, что способность данной популяции лимфоидных клеток убивать много различных клеток-мишеней отражает большое количество присутствующих в ней клонов ПК и что данный клон ПК лизирует очень небольшое число типов клеток. Эта гипотеза не получила экспериментального подтверждения, хотя последние технологические достижения (см. ниже) позволяют длительно культивировать клоны ПК in vitro [41, 42]. Такие клоны убивают столь же широкий спектр клеток-мишеней, что и исходная популяция, из которой они были получены [42].

Последующие исследования, в которых в качестве источника ПК использовалась вся популяция клеток селезенки, показали, что ПК прикрепляется к монослою чувствительных клеток, но не к монослою клеток, не подверженных литическому действию ПК. Более того, инкубация с монослоем чувствительных клеток приводит к истощению активности ПК не только по отношению к этим клеткам, но и по отношению ко всем типам чувствительных клеток-мишеней [43]. Таким образом, эти работы также не подтвердили предположение о кло-нальной специфичности ПК х.

1 Недавно описано два новых типа антигенных рецепторов Т-клеток. Они представляют собой гетеродимеры, в построении которых участвуют три полипептида ТЗ-комплекса, вариабельная гамма-цепь и еще какой-то, пока неидентифицированный полипептид. РаспозК. С. Хэнни, С. Джиллис

Альтернативная гипотеза, объясняющая широкое разнообразие чувствительных к ПК клеток-мишеней, предполагает, что все эти клетки имеют какой-то общий компонент мембраны. Этот компонент для удобства может быть назван антигеном. Во многих лабораториях сейчас предпринимаются поиски общего мембранного антигена, служащего потенциальным субстратом действия ПК. Ранние наблюдения показывают, что решающее значение могут играть мембранные гликоконъюгаты. Очевидно, успех этих исследований зависит прежде всего от того, какие клеточные популяции используются для анализа. В последнее время проводятся работы по выделению ПК и их поддержания в длительных культурах.

Отчасти из-за успеха, достигнутого в культивировании IL-2-зависимых линий эффекторных Т-клеток, а отчасти из-за того, что лимфокины, как оказалось, способны усиливать активность ПК, основные усилия в первых работах были сконцентрированы на использовании содержащей IL-2 культуральной среды для поддержания длительного роста ПК, активных по отношению к опухолевым клеткам. Наибольший успех был достигнут в том случае, когда популяцию ПК селезенки стимулировали интерфероном, а затем культивировали при низкой плотности (104 клеток/мл) в культуральной среде, содержащей 20—40% среды от стимулированных Кон А спленоцитов. Размножающиеся клетки рас-севали каждые 2—3 дня (или при достижении плотности 105 клеток/мл) в свежей культуральной среде. При этом удавалось получить длительную культуру клеток с активностью ПК [42].

Клонировать ПК удается пока с трудом. В отсутствие питающих (фидерных) клеток большинство полученных клеточных линий не растет, если в лунку диаметром 6 мм пластиковой чашки вносят менее 100 клеток. Из нескольких используемых в настоящее время типов фидерных клеток эффективность клонирования ПК повышают облученные сингенные индуцированные тиогликолятом клетки перитонеального экссудата и клетки ЗТЗ, трансформированные вирусом саркомы Кирстен. Тем не менее эффективность клонирования остается невысокой — обычно около 1 %. Полученные к настоящему времени клонированные линии ПК растут относительно медленно со временем удвоения около 24 ч.

Роль IL-2 в стимуляции пролиферации клонированных ПК остается неясной. Он, безусловно, необходим для поддержания размножения клеток, так как среда от стимулированных Кон А спленоцитов после удаления IL-2 с помощью моноклональных антител к этому лимфокину неспособна поддерживать рост клонированных ПК. Однако IL-2 крысы или человека, по-видимому, неэффективен для поддержания пролиферации мышиных клеток. Этот результат, возможно, говорит об уникальной видоспецифичности действия IL-2 на ПК; 8 случае Т-лимфоцитов активность IL-2 не имеет видовых ограничений. Однако вполне возможно, что клоны мышиных ПК не размножаются в ответ на среду от митоген-стимулированных спленоцитов крысы по той причине, что им требуется также второй видоспецифичный медиатор. Среди кандидатов на эту роль наиболее подходящим кажется интерферон. Этот лимфокин обладает четко выраженной видоспецифичностью и способен усиливать активность ПК.

Биохимическое изучение клонов ПК только начинается, и пока мы имеем весьма слабое представление о механизме их действия. Клонированные линии

навание Т-клетками, имеющими такие рецепторы, менее специфичное, чем у Т-клеток с обычными рецепторами. Кроме того, распознавание антигена у Т-клеток с «новым» вариантом рецептора не требует белков главного комплекса гистосовместимости. Предполагается, что Т-клетки с таким рецептором обладают активностью природных киллеров и что на их долю приходится примерно 5% от общего числа всех Т-клеток (Reinherz Е. L., Nature 1987, v. 325, № 6106, p. 660-663.).— Прим. ред.

25. Клеточная цитотоксичностъ мышиных ПК имеют необычайно высокую цитотокснческую активность (чуть не в 1000 раз выше, чем нормальные клетки селезенки), и в тесте на выход 51Сг за 4 ч лизис удается обнаружить при наличии в лунке менее чем 100 клонированных киллерных клеток. Цитотоксичность нормальных клеток селезенки удается обнаружить только при наличии в лунке более чем 5-Ю4 таких клеток. Ясно, что за 4 ч каждая клонированная киллерная клетка лизирует несколько клеток-мишеней. У наиболее активных клонов каждая эффекторная клетка лизирует клетку-мишень в среднем каждые 20 мин.

Для лизиса клеток-мишеней ПК, безусловно, необходимы межклеточные контакты, так как при проведении реакции в лунке с плоским дном требуется в 10 раз больше эффекторных клеток, чем в лунке с V-образным дном. Кроме того, среда, кондиционированная большим количеством клонированных киллерных клеток, полностью лишена цитолитической активности. Эти результаты убедительно показывают, что цитотоксичность клонированных клеточных линий не связана с выделением токсического фактора или истощением какого-либо компонента культуральной среды. Кроме того, в отсутствие ионов Са2+ и Mg2+, необходимых для всех форм осуществляемой клетками цитотоксичности, известных к настоящему времени, лизиса клеток-мишеней не происходит [42].

Был проведен ингибиторный анализ, аналогичный тому, который проводился с ЦТЛ, и он дал сходные результаты [44]. Все соединения, ингибирующие Т-кле-точный лизис (цитохалазин В, колхицин, вещества, влияющие на содержание сАМР, ЭДТА), подавляют также цитотоксичность ПК. Более того, их действие проявляется в сходных, если не тех же самых концентрациях. Эти результаты показывают, что механизм клеточного лизиса, осуществляемого ПК и ЦТЛ, может быть одинаковым.

Значительное внимание в последнее время привлекает способность нескольких выделяемых лимфоцитами растворимых медиаторов (лимфокинов) регулировать литическую активность ПК. Открытие того факта, что один из лимфокинов, интерферон, усиливает литическую активность ПК, привело к созданию научной фирмы, недавно начавшей широко разрекламированную кампанию по клиническому применению интерферона в качестве противоопухолевого агента. Интерферон, однако, усиливает также активность ЦТЛ. Другой лимфокин, IL-2, избирательно усиливает активность ПК и, хотя, как мы обсуждали ранее в этой главе, IL-2 играет также важную роль в дифференцировке ЦТЛ, он не активирует уже дифференцировавшиеся ЦТЛ.

До сих пор мы уделяли внимание клеткам, непосредственно осуществляющим цитотоксический эффект. Еще одна популяция клеток обладает цитолити-ческими свойствами только в присутствии антител. К таким клеткам относятся полиморфноядерные лейкоциты, некоторые популяции макрофагов и популяция лимфоидных клеток, названных К-клетками.

25.3. К-клетки: клеточная цитотоксичность, зависящая от антител

Впервые зависящую от антител клеточную цитотоксичность описал Моллер [45] как механизм лизиса in vitro клеток индуцированной метилхолантреном фибросаркомы. С тех пор стало ясно, что этот феномен имеет общее значение и относится к широкому кругу клеток-мишеней и нескольким различным типам эффекторных клеток.

Общее свойство эффекторных клеток — это наличие у них мембранного рецептора для Fc-фрагмента антител класса IgG, хотя и не в

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.05.2017)