Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

ины Е1 и Е2 оказались мощными стимуляторами аденилат-циклазы и активными ингибиторами клеточного лизиса. Простагландины Fla и F2a, напроК. С. Хэнни, С. Джиллис

тив, практически не вызывали повышения содержания с AMP в суспензии клеток селезенки и лишь в незначительной степени препятствовали лизису [6, 21].

Очевидно, трудно непосредственно применить эти наблюдения к описанию механизма Т-клеточного лизиса— главным образом потому, что биохимические исследования проводились на всей популяции лимфоцитов, из которых лишь небольшая часть цитотоксична. Недавно, однако, сходные наблюдения были получены при исследовании клонированных цитотоксичных Т-клеток.

25.1.1.2.3. Летальный удар

После специфического присоединения киллерной клетки к клетке-мишени и последующих событий, называемых программированием лизиса, эффекторная клетка оказывает токсическое воздействие на клетку-мишень. Этот процесс, обычно называемый летальным ударом,— наиболее интересное и одновременно наиболее загадочное событие в литическом цикле.

Среди предположений, объясняющих природу токсического воздействия, значительное внимание привлекла гипотеза о том, что разрушение клетки-мишени происходит под действием растворимого медиатора, секретируемого лимфоцитом в ответ на взаимодействие с антигеном. В основе этой гипотезы, впервые предложенной Грэнджером и сотр. [22], лежало наблюдение, что культуры лимфоидных клеток, стимулированные антигеном или некоторыми мито-генами, продуцируют фактор, названный лимфотоксином. Этот фактор оказался способным убивать некоторые типы клеток-мишеней in vitro. Определяющая роль лимфотоксина как медиатора Т-клеточного лизиса подвергалась, однако, сомнению, так как многие наблюдения с трудом согласовывались с концепцией свободно проникающего токсического медиатора (эти наблюдения подробно описаны в работе [23]). Важнейшие соображения касаются специфичности Т-клеточного лизиса. Когда несущие антиген клетки-мишени смешивают с цито-токсическими лимфоцитами и другими клетками-мишенями, у которых нет данного антигена, наблюдается специфический лизис (т. е. не происходит лизиса клеток-«невинных свидетелей»). Более того, гипотеза лимфотоксина не дает удовлетворительного объяснения тому, почему киллерная клетка сама не погибает после взаимодействия с клеткой-мишенью. Как описывалось выше, кил-лерные клетки сами по себе не обладают врожденной резистентностью к лизису и вполне подвержены действию эффекторных клеток, специфичных к аллоанти-генам их клеточной поверхности.

Серия экспериментов, в которых определялась зависимость между продукцией лимфотоксина и цитолитической активностью лимфоцитов, породила дополнительные сомнения в роли лимфотоксина в Т-клеточном лизисе. Было показано, что цитолитическую активность популяции лимфоцитов и ее способность продуцировать растворимые медиаторы можно легко разобщить экспериментальными воздействиями. Так, обработка лимфоцитов многими агентами (например, холерным энтеротоксином, колхицином и винбластином) подавляла прямую цитотоксическую активность этой клеточной популяции, но не оказывала влияния на способность клеток продуцировать некоторые лимфокины, в том числе лимфотоксин. Наконец, сильные антисыворотки против лимфотоксина не препятствовали Т-клеточному лизису.

Кроме концепции растворимого медиатора были предложены еще две весьма интересные гипотезы. В одной из них постулируется образование цитоплазматических мостиков между киллерной клеткой и клеткой-мишенью; другая предполагает наличие специальных ферментных систем на мембране эффекторной клетки.

25. Клеточная цитотоксичность Было высказано предположение, что ключевым событием индуцированного лимфоцитом лизиса является образование цитоплазматических мостиков между киллерной клеткой и клеткой-мишенью, которые обеспечат возможность межклеточного взаимодействия без контакта с окружающей средой. Это с самого начала кажется маловероятным, так как, хотя цитоплазматические связи часто возникают между клетками растущей in vitro ткани, имеется лишь небольшое число сообщений о существовании таких связей между лимфоцитами и клетками других типов. Большинство исследователей не смогли обнаружить в месте контакта цитотоксичного лимфоцита с клеткой-мишенью никаких локальных изменений мембраны: ни слияния мембран, ни специализированных контактных структур. Более того, акт лизиса происходит слишком быстро (видимо, за 40—60 с) для того, чтобы успели образоваться цитоплазматические мостики между взаимодействующими клетками.

Согласно многим данным, Т-клеточный лизис может осуществляться целиком на уровне взаимодействия клеточных мембран. Эту точку зрения наиболее лрямым образом подтверждают данные о том, что плазматические мембраны, выделенные из лимфатических узлов мышей, подвергнутых контактной сенсибилизации оксазолоном, могут быть цитотоксичными в отношении опухолевых клеток in vitro [24]. К сожалению, в этих исследованиях не были охарактеризованы плазматические мембраны, а также не ставился контроль на цитотоксич-ность мембран из нормальных лимфоцитов. Следует добавить, что цитотоксиче-<жая активность выделенных мембран — это совершенно неожиданный факт, поскольку во многих экспериментах было показано, что лизис способны осуществлять лишь живые эффекторные клетки. Эффекторные клетки, убитые нагреванием, замораживанием и оттаиванием, обработкой ультразвуком или рентгеновскими лучами, неизбежно теряли литическую активность. Убитые клетки не подавляли литической активности живых эффекторных клеток, что, ло-видимому, указывает на их неспособность связываться с клетками-мишенями. Наконец, недавно было показано, что литическая активность мембранных фрагментов характерна не только для препаратов, полученных из цитотоксичных клеток: даже мембраны эритроцитов в некоторых условиях оказываются токсичными [25]. Очевидно, что эти данные ставят под сомнение биологическое значение результата о цитолитическом действии мембран из лимфатических узлов животных, подвергнутых контактной сенсибилизации.

В одном сообщении указывается на возможную роль в клеточной цитотоксичности фосфолипазы, ассоциированной с мембраной. Фрай и Фриу [26] обнаружили, что лизис куриных эритроцитов клетками мышиной селезенки в присутствии антител к эритроцитам (цитотоксичность в этом случае не связана с Т-клетками) подавляется фосфатидилхолином и известным ингибитором фосфолипазы А ацетатом D, L-2, З-дистеароилоксипропил-диметил-2-гидроксиэтиламмо-ния. К сожалению, в этих экспериментах не контролировалась специфичность ингибиторов и не исключено, что другие липиды и даже гидрофобные пептиды также способны подавлять лизис клеток.

В других исследованиях указывается на участие в цитотоксической реакции иных ферментов. Так, например, предполагается участие метилтрансфераз, поскольку оказалось, что 3-деазоаденозин подавляет лизис. Не исключена также роль ферментов поверхности эффекторных клеток, имеющих трипсиноподоб-ную активность.

Как уже указывалось ранее, такой подход сталкивается с проблемами интерпретации результатов. Трудно определить, а) действует ли ингибирующий агент на эффекторную клетку или на клетку-мишень, б) действительно ли инги-бируемый процесс непосредственно связан с нанесением летального воздействия К. С. Хэнни, С. Джиллис

и в) не связано ли подавление клеточного лизиса просто с нарушением метаболизма эффекторной клетки. Альтернативный подход, который в конце концов может оказаться более полезным для определения природы летального воздействия, сводится к определению компонентов клетки-мишени, необходимых для того, чтобы она была подвергнута такому воздействию. Во многих лабораториях сейчас пытаются использовать в качестве мишеней синтетические мембранные пузырьки (липосомы), поскольку настойчиво высказываются предположения, что объектом иммунологической атаки являются мембранные липиды. К настоящему времени показано, что липосомы, несущие закодированные в МНС гликопротеины, индуцируют дифференцировку цитотоксических лимфоцитов, но вот, могут ли они служить адекватными субстратами для литического воздействия, пока неизвестно.

25.1.1.2.4. Разрыв мембраны

Последние этапы литического цикла изучены, по-видимому, лучше всего. В результате взаимодействия с эффекторным Т-лимфоцитом начинается серия последовательных изменений мембранной проницаемости клетки-мишени, заканчивающаяся разрывом клеточной мембраны. На этом этапе присутствие лимфоцита уже не обязательно. Изменения мембраны клетки-мишени, предшествующие ее лизису, были наиболее прямо продемонстрированы с помощью молекулярных маркеров различного размера, использованных в качестве индикаторов разрушения клетки-мишени [27]. Результаты этих работ показывают, что первичное повреждение мембраны приводит к быстрому обмену между клеткой и средой неорганическими ионами и небольшими молекулами, но не макромолекулами. Обмен макромолекулами становится возможным только после вторичных эффектов, вызванных нарушением осмотической регуляции клетки. Гибель клетки-мишени наступает, видимо, в результате действия сил коллоидного осмоса из-за входа в клетку воды. В основе такого вывода лежит наблюдение, что и выход макромолекул из поврежденной клетки-мишени, и разрушение ее плазматической мембраны может быть предотвращено добавлением в среду высокомолекулярных декстранов [28].

Постепенный характер развития литического повреждения, индуцированного Т-клеткой, и возможность подавления лизиса с помощью растворов с высоким осмотическим давлением, и наблюдаемый размер первичного повреждения указывают на заметное сходство этого процесса с изменениями мембранной проницаемости опухолевых клеток, индуцируемыми комплементом. Хотя, как уже указывалось ранее, кажется наиболее вероятным, что индуцированные Т-клетками повреждения мембраны связаны с действием компонентов комплемента, гипотеза о том, что лизис вызывается встраиванием в мембрану клетки-мишени комплекса, состоящего из гидрофобных белков (как в случае комплемента), остается пока лишь одной из интересных возможностей *.

1 Согласно современн

страница 40
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.07.2017)