Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

рации белка. Данный участок можно отщепить от белка (или синтезированного пептида) [57], что приведет к изменению

антигенных свойств. С помощью антисыворотки, полученной к гемоглобину (или только к его 6-цепи) можно обнаружить иммунологический перекрест со структурами, изображенными на рис. Б и В, при этом молекулярные механизмы перекреста в двух данных случаях будут различны. Атомы полипептидного «скелета» имеют белый цвет, а в боковых группах атомы кислорода показаны штрихом, углерода — сеткой, а азота закрашены в черный цвет (по [54, 58]).

23. Взаимодействие антиген—антитело Пусть антисыворотка против него содержит как антитела против X, так и антитела против Y. Тогда для мутантного белка, в котором детерминанта Y изменена настолько, что уже не может узнаваться антителами против Y, а детерминанта X осталась неизменной, будет иметь место иммунологический перекрест второго типа. Такой мутантный белок сможет конкурировать с белком дикого типа только за антитела против X (возможно, даже с той же аффинностью), но не за антитела против Y.

Если для определения концентрации комплексов антиген—антитело используются вторичные реакции, то правило, согласно которому иммунологический перекрест второго типа может иметь место, лишь когда антисыворотка гетерогенна, иногда нарушается. В случае, когда при изучении реакции антиген—антитело участвуют вторичные реакции, например в опытах Шарона и др. [59] и Цизара и др. [60], в реакции гомогенных миеломных или гибри-домных антител с декстранами плато появлялось на уровне, меньшем чем 100%-ное связывание. Следует, однако, заметить, что в данных случаях использовался метод количественной преципитации, в котором наличие такого плато может объясняться, например, неодинаковой растворимостью различных комплексов. Если бы было возможно наблюдать взаимодействие антиген— антитело прямо в растворе, не прибегая к помощи какой-либо вторичной реакции, способной искажать конечные результаты, то в случае гомогенного антигена и гомогенных антител плато реакции или ее торможения теоретически не могло бы появиться на уровне, меньшем чем 100%. Поэтому, когда подобное плато возникает, оно, по-видимому, должно быть обусловлено вторичными реакциями конкуренции.

Конечно, оба типа иммунологического перекреста могут наблюдаться одновременно. Проанализируем возможность этого на примере все того же пептидного фрагмента, который мы использовали при обсуждении иммунологического перекреста первого типа. Пусть в состав фрагмента, хотя бы и не в нативной конформации, входят остатки, формирующие детерминанту X, и не входят остатки, относящиеся ко второй детерминанте Y, также присутствующей на поверхности нативного белка. Если в антисыворотке к натив-ному белку содержатся антитела к каждой из детерминант, то пептид будет конкурировать лишь за связывание с антителами против X (иммунологический перекрест второго типа), обладая даже по отношению к ним меньшей аффинностью, чем нативный белок. Вследствие этого кривая конкуренции сдвинется вправо и выйдет на плато до того, как будет достигнуто полное вытеснение *.

В случае гомогенных (например, моноклональных) антител, у которых возможен лишь иммунологический перекрест первого типа (или «истинный» перекрест), с помощью графика, аналогичного обсуждавшемуся выше графику зависимости B/F от F, можно количественно определить различие в аффинности по отношению к разным перекрестно реагирующим лигандам. Предположим, что лиганды X и Y способны взаимодействовать с некими монокло-нальными антителами, полученными к лиганду (т. е. X и Y перекрестно реаги-

1 Реально могут наблюдаться неоднозначные случаи, в которых различие между двумя типами иммунологического перекреста выражено довольно нечетко. Например, пусть все антитела реагируют с детерминантой X, но при этом оказываются сильно гетерогенными по аффинности. Некоторые из таких антител могут иметь настолько низкую аффинность по отношению к перекрестно реагирующей детерминанте X', что будет создаваться впечатление, что они вообще с ней не связываются. В этом случае кривая конкуренции при добавлении лиганда X' могла бы, по-видимому, выходить на плато на уровне меньшем, чем 100%, даже несмотря на то, что все антитела являются специфичными к X, а единственным отличием X' от X оказывается величина аффинности. Дж. А. Берзофски, А. Дж. Берковер

руют с L). Если построить графики зависимости отношения концентраций связанного и свободного радиоактивно меченного лиганда L (B/F = R) от логарифма концентрации конкурирующего лиганда (соответственно X или Y), то при определенных условиях (см. ниже) две кривые конкуренции окажутся параллельными (рис. 23.13). Условие заключается в том, чтобы концентрация

Рис. 23.13. Схематическое изображение кривых, получаемых с помощью РИА. Кривые иллюстрируют влияние аффинности на положение срединной точки и на угол наклона в этой точке, а также демонстрируют удобство использования концентрации свободного лиганда по сравнению с общей концентрацией лиганда. По оси ординат отложено отношение концентраций связанных и свободных радиоактивно меченных молекул лиганда. Л0 — это предельное значение величины R, когда все концентрации лиганда стремятся к нулю. Если хну — это концентрации лигандов X и Y, при которых R = Л0/2, то в том случае, когда по оси абсцисс отложена общая концентрация лиганда, будут справедливы равенства: х = 1/Кх + [S],/2 и у = i/Ky + [S]f/2, где [S]{ — это концентрация антителосвя-

зывающих участков, а Кх и Ку — аффинность антител к соответствующим лиган-дам. Однако если по оси абсцисс отложена концентрация свободного лиганда, то х = 1/Кх и у = i/Ky, так что отношение х/у (или разность log х — log у, если концентрация отложена в логарифмическом масштабе) соответствует отношению величин сродства Ку/Кх. Отметим, что если концентрации отложены в логарифмическом масштабе, то наклоны обеих кривых в срединных точках будут одинаковы, а если в линейном масштабе, то наклон кривой Y будет составлять лишь Ку /Кх от наклона кривой X. По оси абсцисс отложен логарифм общей концентрации лиганда или концентрации свободного лиганда ([54]; печатается с разрешения).

свободной метки была меньше, чем ИК^(КЬ — аффинность радиоактивноме-ченного лиганда L). В этом случае можно показать [54], что в срединной точке графика, т. е. когда R = RJ2, будет справедливо следующее приближенное равенство:

к-"тхЬ-- (41)

где Кх — аффинность антител к X. Данное равенство аналогично уравнению (21), если в качестве немеченого иммуногена взять конкурирующий лиганд. Кроме того, по аналогии с уравнением (23) можно показать, что если вместо концентрации свободного лиганда [Х]своб взять общую концентрацию конкурента [X]t, то в уравнении (41) появится дополнительный член:

[X], (при R = Д„/2) = JU + 1^-. (42)

Таким образом, если концентрация конкурирующего лиганда отложена в линейном масштабе, то разность концентраций, соответствующих срединным

23. Взаимодействие антиген—антитело точкам двух кривых, будет равна 1/Кх — 1/Ky безотносительно к тому, что отложено по оси абсцисс — общая концентрация лиганда или концентрация свободного лиганда. В то же время лишь во втором случае отношение концентраций, соответствующих срединным точкам, будет равно Kx/Ky-Данное замечание оказывается существенным, если по оси абсцисс отложен логарифм концентрации конкурента (а именно так обычно и строят этот график), поскольку в данном случае величина горизонтального смещения двух кривых соответствует отношению концентраций [X]/[Y], а не разности между ними [54].

Если выполнено и второе условие, а именно что концентрация связанной метки должна быть малой по сравнению с концентрацией антигенсвязываю-щих участков [S]t, то наклон в срединной точке (т. е. когда R = RJ2) графика, в котором концентрация отложена в линейном масштабе, будет пропорционален аффинности данного конкурента Кх или Ку [54]. (Оба условия выполняются одновременно, когда концентрация меченого L мала относительно как ATL, так и [S]t.) Если [Х]своб и [Y]CB06 отложены в логарифмическом масштабе, то наклоны кривых окажутся равными (т. е. кривые будут казаться параллельными), поскольку линия, сдвинутая на графике с логарифмической шкалой параллельным переносом на т единиц вправо, будучи построенной в линейном масштабе, во всех точках пойдет в 1/т раз круче.

Если антитела гетерогенны по аффинности, то кривые будут уширяться и в общем случае они окажутся непараллельными. Следует подчеркнуть, что в том случае, когда антитела обладают гетерогенностью по специфичности и имеется иммунологический перекрест второго типа, частичное вытеснение метки, достигаемое при выходе на плато графика зависимости B/F от концентрации свободного конкурирующего лиганда, не будет пропорционально доле антител, взаимодействующих с конкурентом, но окажется пропорциональным их взвешенной доле, в которой концентрации антител взвешены по их аффинности к меченому антигену [54].

Существование двух типов иммунологического перекреста приводит к необходимости введения двух соответствующих определений специфичности [54]. Количественной мерой специфичности первого типа служит относительная аффинность данных гомогенных антител к иммуногену и к любому из перекрестно реагирующих лигандов. Если аффинность антител к иммуногену оказывается значительно выше, чем к любому из тестируемых перекрестно реагирующих лигандов, то про такие антитела говорят как об высокоспецифических, т. е. хорошо отличающих данный лиганд от других. Если аффинность антител к перекрестно реагирующим лигандам оказывается ниже чувствительности метода, то, как уже обсуждалось [28], специфичность первого типа проявляется как избирательность. Специфичность можно даже определить как отношение величин аффинности антител к иммуногену и к перекрестно реагирующему лиганду 161]. Именно специфичность первого типа большинство иммунохимиков называет истинной специфичностью, точно так же как иммунологический перекрест первого типа — истинным перекрестом.

Общепринятое использование понятия «иммунологический перекр

страница 12
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(22.09.2017)