Биологический каталог




Иммунология. Том 3

Автор У.Пол

иных В-лимфоцитов в присутствии липополисахарида (ЛПС) в течение 1—4 недель с последующим поддержанием в кондиционированной среде, содержащей ростовой фактор из культуральной жидкости, стимулированных ФМА клеток EL-4. Такие В-клеточные линии ведут, добавляя каждые три дня свежую кондиционированную среду, и поддерживают в культуре до 10 мес. Клетки растут довольно медленно, и в культуре отмечается значительная их гибель.

Секрецию иммуноглобулинов можно индуцировать как у человеческих В-клеточных линий, полученных из колоний в мягком агаре, так и у мышиных В-клеточных линий, полученных из стимулированных ЛПС исходных культур, в присутствии супернатантов, содержащих факторы, замещающие Т-клетки (ТЗФ, TRF) или факторы дифференцировки [90, 91].

Описанный выше метод получения В-клеточных линий не годится для получения гомогенных В-клеток с целью детального функционального анализа. По-видимому, дальнейший прогресс в этой области будет зависеть от более точного знания ростовых и дифференцировочных факторов, действующих на В-лимфоциты, а также от возможности получить такие факторы для рутинного использования. В настоящее время установлено, что BCGF — это какой-то фактор, отличный от IL-2; кроме того, достигнуты значительные успехи в изучении свойств дифференцировочных факторов [93]. С. Г. Фэтмен, Ф. В. Фитч

30.11. Длительное культивирование и клонирование других иммунокомпетентных клеток

Недавние работы показали, что использование методов, подобных тем, которые успешно применялись для культивирования Т-клеток, позволяет получить долгосрочные линии природных киллеров (ПК, NK). Так были получены клоны мышиных [94—96] и человеческих [97, 98] клеток, обладающих ПК-подобной активностью. Природные киллеры представляют собой популяцию цитотоксических клеток, которые не нуждаются в антигенной стимуляции для проявления цитолитической активности. Эти клетки были выявлены по их способности лизировать различные опухолевые клетки, при том что они представлены у нормальных неиммунных животных. Одним из ервых свидетельств, которое указывало на возможность культивирования и клонирования природных киллеров, были данные о способности супернатантов стимулированных Кон А клеток селезенки крыс поддерживать в культуре клетки селезенки бес-тимусных мышей BALB/c nu/nu. При этом у клеток сохраняется цитотоксиче-ская активность по отношению к ПК-чувствительным клеткам-мишеням YAC-1 на уровне, одинаковом с активностью свежевыделенных клеток селезенки BALB/c nu/nu. ПК-активность значительно повышалась в течение первых 2—4 недель культивирования в кондиционированной среде, что указывает на преимущественную пролиферацию и селекцию ПК-клеток из суммарной популяции селезеночных клеток BALB/c nu/nu. Характерно, что гетерогенная популяция ПК-клеток вызывает лизис широкой панели ПК-чувствительных мишеней. Один из самых давних вопросов, изучавшихся с помощью гомогенных клонированных популяций ПК-подобных клеток, касался клонального распределения рецепторов к ПК-мишеням. Исходные исследования показали, что линии ПК-клеток, полученные при клонировании методом лимитирующих разведений, обладают специфичностью, не отличающейся принципиально от специфичности родительских линий или свежевыделенных клеток селезенки. Из этих результатов неясно, распознают ли ПК-клетки структуру, общую для всех ПК-чувствительных мишеней, или они обладают множественными рецепторами с разной специфичностью. Поскольку пролиферация ПК-клеток зависит от лимфокинов, по всей вероятности, на клеточной поверхности ПК должны быть представлены рецепторы к лимфокинам. Пока до конца неясно, какой (какие) из лимфокинов, присутствующих в препаратах культуральной жидкости активированных митогеном клеток селезенки, определяет пролиферацию ПК-клеток. Тем не менее в настоящее время можно поддерживать долгосрочные линии ПК-клеток и выделять функциональные гомогенные популяции ПК-«клонов», исследования которых позволят ответить на ранее поставленные вопросы о функции и специфичности ПК-клеток.

30.12. Исключительная роль исследований Т-клеточных клонОв в формировании иммунологических концепций

Один из основных постулатов клонально-селекционной теории состоит в том, что антиген-специфические клетки-предшественники несут распознающие структуры, направленные против одной антигенной детерминанты. Доказательства клонально-селекционной теории были получены на уровне В-кле-точного ответа. В настоящее время во многих лабораториях получены Т-клеточные клоны со специфической функциональной активностью. Такие клониро-

30. Длительные культуры иммунокомпетентных клеток ванные Т-клетки позволили окончательно решить ряд иммунологических проблем, которые не могли быть адекватно исследованы другими способами. Среди них проблемы разнообразия Т-клеточного репертуара, механизмов Т-кле-точной активации, выявления взаимодействий Т-лимфоцитов и других иммунокомпетентных клеток, специфичности Т-хелперных клеток, необходимых для переключения синтеза Ig разных изотипов при дифференцировке различных субпопуляций В-лимфоцитов в антителообразующие клетки, а также вопрос о существовании антиген-специфических иммунорегуляторных молекул, продуцируемых клонированными Т-клетками. К сожалению, до сих пор нет удовлетворительного ответа на наиболее важный вопрос о клональной селекции антиген-распознающих структур на поверхности Т-лимфоцитов, специфичных к одной антигенной детерминанте.

Рассмотрим вкратце* что дало получение и использование клонов антиген-реактивных Т-клеток. Во-первых, это данные о широком репертуаре цитолитических Т-лимфоцитов. В основе ранних оценок репертуара лежал анализ распределения цитолитической активности клонов ЦТЛ, селектированных по их ¦способности лизировать Н-2<*-положительные клетки-мишени [50]. При анализе цитолитического ответа 9 разных клонов ЦТЛ на 11 различных видах клеток-мишеней было выявлено по крайней мере 8 различных типов реактивности. Это указывает на то, что репертуар специфичности Т-лимфоцитов действительно велик.

Наиболее четкие результаты получил Шерман [99], исследовавший ответ мышей B10.D2 (H-2d) на аллоантигены Н-2КЬ [99]. В этих опытах клетки селезенки мышей B10.D2 культивировали с клетками-стимуляторами В10.А (5R), чтобы ответ был направлен только против молекулы Н-2КЬ. Клоны были получены методом предельных разведений, а их цитолитическую активность оценивали с помощью клеток-мишеней мышей семи линий, несущих различные мутации молекулы Н-2КЬ [99]. Исходя из числа антиген-специфических клонов, полученных от семи индивидуальных животных, количество уникальных рецепторных специфичностей было оценено равным минимум 50. В дальнейших опытах Шерман показал, что две конгенные линии мышей, различающиеся только по МНС, значительно различаются репертуаром ЦТЛ, специфичных к молекуле Н-2КЬ [100]. Каждая линия обладает определенным набором специфичностей, который встречается у индивидуальных животных с большей частотой по сравнению с частотой, ожидаемой при случайном распределении. Немалый интерес представляет тот факт, что гибриды Yt этих линий характеризуются несколькими часто встречающимися типами специфичности, не выявляемыми у мышей родительских линий [100].

Чужеродные антигенные детерминанты, в формировании которых участвуют гаптены или вирусы, распознаются ЦТЛ в сочетании с собственными антигенами главного комплекса гистосовместимости клеток-стимуляторов. Некоторые свойства такого МНС-рестриктированного распознавания антигенов ¦были выяснены в исследованиях с использованием клонированных ЦТЛ. Первоначальное сообщение о длительном культивировании ЦТЛ казалось бы указывало на то, что распознавание ассоциированных с вирусом опухолевых антигенов может быть не рестриктировано по МНС [27], поскольку две линии Т-клеток лизировали как сингенные, так и аллогенные лейкемические клетки-мишени, индуцированные вирусом лейкемии Френд (ВЛФ). Однако при клонировании, проведенном через 14 мес после начала культивирования, обнару-7килось несколько типов специфичности цитотоксического действия полученных клонов ЦТЛ. Оказалось, что некоторые клоны лизируют только аллогенные клетки-мишени, которые не экспрессируют ВЛФ-ассоциированные антигены, С. Г. фэтмеп, ф. В. Фитч

другие лизируют преимущественно сингенные опухолевые клетки-мишени, а часть клонов лизирует с равной эффективностью как сингенные опухолевые клетки-мишени, так и аллогенные мишени, не экспрессирующие ВЛФ-ассоции-рованных антигенов, а часть клонов вообще не обладает литической активностью. Эти результаты свидетельствуют скорее всего не о вырожденности МНС-рестриктированного распознавания антигенов, а о том, что одной и той же клонированной клеткой могут распознаваться антигенные специфичности, аллоантиген и вирусные антигены, экспрессированные на сингенных клетках.

Частота Т-клеток, распознающих и отвечающих на антигены главного комплекса гистосовместимости других представителей данного вида, необычайно высока [103]. Взаимоотношения Т-клеток, отвечающих на аллоантигены, и Т-клеток, отвечающих на «обычные» или растворимые антигены, неясны. Ранее многие исследователи предполагали, что поскольку частота аллореактивных клеток так высока, а разнообразие антигенов, которые должны распознавать Т-лимфоциты, огромно, то эти субпопуляции должны перекрываться [104]. Другими словами, все Т-клетки, распознающие «обычные» антигены, должны распознавать по меньшей мере один аллоантиген. Как указывалось выше, при исследовании клонов ЦТЛ было показано, что одна и та же Т-клетка может быть специфична к аллоантигену и к другому чужеродному антигену [105]. Недавние работы Средни и Шварца [106] свидетельствуют о том, что антиген-специфические пролиферирующие Т-клетки также характеризуются аллореак-тивностью. Из высокой частоты Т-клеточных клонов, которые обладают антигенной специфичностью в сочетании с аллореактивностью, следует, что пролиферирующие Т-клетки, распознающие «обычный» антиген, должны распознавать также и аллоантиген. Можно надеяться, что исследования Т-клеточных клонов помогут решить возникающий в связи с эти

страница 100
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121

Скачать книгу "Иммунология. Том 3" (4.83Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.09.2017)