|
|
Основы гистохимиивыявляется по красному цвету продукта реакции. 4.6. ПИГМЕНТЫ Термин «пигмент» охватывает целую группу веществ, главным образом эндогенного происхождения, различающихся по своему отношению к кислотам, щелочам, растворителям, жиров, реакциям на железо, солям серебра и красителям, и имеющих различные микроморфологические признаки. В гистохимическом отношении пигменты обычно проявляют мало различий. По своему происхождению пигменты делятся на фе-нольные (тирозин—триптофановые), пигменты крови и жировые пигменты, или на гематогенные и негематогенные (аутогенные) пигменты. К гематогенным пигментам относится, Например, гемоглобин и его производные, а к аутогенным—меланин, липофусцины и каротиноиды. 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов 245 Из экзогенных пигментов следует отметить, в частности, угольную пыль, отложения металлов, а также отложения инородных веществ, связанные с терапевтическими или диагностическими воздействиями на организм. 4.6.1.МЕЛАНИН Меланин встречается преимущественно в форме гранул (гранулы меланина, или меланосомы) в эктодерме и в тканях, происходящих из эктодермы. Под электронным микроскопом различимы зерна круглой овальной и палочковидной формы. Синтез меланина в промеланосомах протекает через окисление тирозина до ДОФА при участии пероксидазы и тирозиназы. Доля участия каждого из этих ферментов в синтезе ДОФА в клетках разного типа варьирует. Сведения о гистохимических реакциях с участием пигментов суммированы в табл. 43 и 44. В гистохимическом отношении меланин и липофусцин имеют много общего; так, оба они обладают способностью восстанавливать аммиачный раствор нитрата серебра. Отдифференцировать их можно с помощью нильского синего, а также по способности липофусцина в отличие от меланина давать видимую собственную флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. Меланин образует комплексы с ионами железа, которые легко выявить с помощью феррицианида калия. На этом принципе основан «железный» метод выявления меланина по Лилли (Lillie). Специфическое контрастирование и ультраструктурное выявление премеланосом возможно с помощью реакции на тирозиназу. От меланина гистохимически отличается его разновидность—так называемый нейромеланин; он встречается Возникновение меланина Пероксидаза Тирозиназа Тирозин 5ucmPg Промежуточные продукты 246 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов_ Таблица 43 Гнстохимичес"кий дифференциальный диагноз различных эндогенных пит-ментов (Bucher) Гистохимическая Гемоглобин Гематоидин Гемосиде- Меланин Липофусцин реакция рин Псевдопероксидаз- + - - - + ная реакция с бен- зидином Реакция Гмелина с + — — — HN03 Выявление железа — — + — феррицианидом калия (турнбуле- ва синь) Восстановление —. — — + + аммиачного нит- рата серебра Обесцвечивание с — — — + + помощью силь- Быстрое Медленное ных окислителей- гД202 и КМп04 Окрашивание жира, - - - — + например Суда- ном черным Собственная флуо- — — — — + ресценция в ульт- рафиолетовом свете в ганглиозньгх клетках нервной системы. В отличие от меланина нейромеланин содержит капли жира и не дает ДОФА-реакции. 4.6.2. ГЕМОСИДЕРИН Внутриклеточный пигмент в форме гранул, имеющих цвет от желтого до коричневого, содержит железо, что является важным диагностическим признаком. Гемосидерин нерастворим в щелочах, но растворяется в сильных кислотах. Он не обесцвечивается сильными окислителями, не проявляет аргентаффинности, свободен от жира и дает положительную ШИК-реакцию, обусловленную его нахождением в бел-ково-полисахаридном комплексе. Этот комплекс-носитель, кроме того, дает резко положительную реакцию с тетразо-лием после бензоилированйя. Таблица 44 Сравнительная гистохимия липофусцина, гемосидерина и меланина (Pearse, с изменениями)1 Липофусцин Гемосидерин Меланин ганглиозные клетки миокард клетки печени Цвет От желтого до Золотисто-ко- Светло-корич- От желтого до От коричневого темно-коричне- ричневый невый коричневого до черного вого Эозинофилия - - - - Базофилия От слабо + до + Слабо + + От слабо + до - + Кислотоустойчивость - - + - - Судан черный + + + - Масляный красный О - Умеренно - - - (замороженные срезы) Шифф-надмуравьиная + (вар) + (вар) + (вар) - - кислота ШИК-реакция ± + + - _ Плазмалевая реакция - - - - _ Щелочной раствор се- Слабо + - От слабо + до - _ + ребра Реакция Шморля Сильно + От слабо + до - + - + Реакция Гмелина - _ _ - _ Н2О2 (обесцвечивание) 48+ 48 + 48 + - - Диазореакция (щелоч- - - - - - ная) Диазореакция (кислая) - - _ - - Флуоресценция в Золотисто-жел- Красно-корич- Светло-коричне- ' - - ультрафиолете тая невая вая - - Хромовый гематокси- + + + - - лин ') Обозначения: ± преимущественно отрицательная реакция; + (вар) - обычно положительная, но частично отрицательная; 48 + означает более 48 ч. 248 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов Гистохимическое выявление гемосидерина основано в первую очередь на присутствии железа, которое выявляется самыми разнообразными методами, например с помощью метода Перлса (Perls). Родственный липофусцину гемосидерин может быть выявлен в серийных срезах путем последовательного выявления липофусцина и железа (метод Перлса). 4.6.3. ЛИПИДНЫЕ ПИГМЕНТЫ Принадлежащие к этой группе пигменты (липофусцин, гемофусцин, цероид, псевдомеланин, железосодержащие липопигменты, каротиноиды), как правило, имеют собственную окраску от светло-желтой до темно-коричневой и встречаются в виде мелких зерен и глыбок. Они содержат в качестве строительных блоков, в частности, труднорастворимые продукты окисления и полимеризации ненасыщенных карбоновых кислот или их эфиры, а также белки. В отношении важнейших физических и.гистохимических свойств, а также по способности окрашиваться различные липидные пигменты имеют много общего. Поэтому их не удается однозначно дифференцировать друг от друга с помощью гистохимических методов. Различия в первую очередь следует искать в количестве и качественном составе белкового компонента. Из группы гистохими-чески выявляемых липидных пигментов наиболее тщательно был изучен имеющий важное биологическое значение липофусцин. Сравнение гистохимических свойств этого пигмента с гистохимическими свойствами гемосидерина и меланина проведено в табл. 44. Отмечена определенная связь между липофусцином (в частности, его образованием) и лизосомами; важную роль при этом играют кислые гидролазы—например, кислая фосфатаза и неспецифическая эстераза (рис. 6). Липофусцин, меланин и гемосидерин накапливаются в остаточных тельцах и вместе с ними идентифицируются. Для гистохимического выявления липофусцина были разработаны различные методы. Надежные результаты дает реакция Шморля и метод Циля—Нильсена. Реакция Шморля основана на выявлении восстанавливающих веществ; метод Циля—Нильсена использует способность 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов 249 липофусцина окрашиваться основными, жирорастворимыми красителями. В присутствии фенола растворимость красителей в липидах повышается. Для дифференцировки меланина и липофусцина можно использовать окраску нильским синим по Хуэку (Hueck). Лизосона Рис. 6. Механизм образования липофусцина и меланина в лизосомах (Pearse, 1972). Химически однородная группа каротиноидов ранее называлась липохромамн или лутеинами. Каротиноиды широко распространены в растительных и животных тканях; они представляют собой безазотистые соединения разного цвета—от светло-желтого до красно-фиолетового. Их углеродный скелет построен из изопреновых единиц. Отличительным свойством каротиноидов является то, что их спектр поглощения лежит в сине-зеленой области и имеет 3 четко выраженных пика. С помощью спектров поглощения можно легко опознавать различные красители. Гистохимические методы выявления каротиноидов основаны в первую очередь на легкой окисляемости сопряженных двойных связей в их молекуле. Под действием кислот, например концентрированной серной, соляной, фосфорной, хлорной и других, каротиноиды приобретают интенсивное синее, зеленое или фиолетовое окрашивание. 10-235 250 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов С хлоридами сурьмы (III) и мышьяка (III) каротиноиды образуют соли карбония синего цвета. Практическое значение имеют реакции с серной кислотой, а также проба Карра—Прайса с хлоридом сурьмы в хлороформе. 4.6.4. МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ПИГМЕНТОВ МЕТОД ШМОРЛЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИПОФУСЦИНА МЕТОДИКА 1. Фиксация в формалине; приготовление замороженных или парафиновых срезов. 2. Срезы промыть в дистиллированной воде. 3. Поместить срезы в реакционную смесь на 5—20 мин. Реакционная смесь: 3 части 1%-ного раствора FeCl3 смешивают с 1 частью 1%-ного раствора гексацианоферрата (III) калия (красная кровяная соль). Раствор использовать в течение 30 мин! / 4. Срезы хорошо промыть в проточной воде. В особо важных случаях рекомендуется проводить микроскопию срезов, заключенных в воду. 5. Быстро обезводить в ряду спиртов возрастающей концентрации, ксилол, нейтральный бальзам. РЕЗУЛЬТАТ Липофусцин и меланин окрашиваются в темно-синий цвет. Кроме того, положительную реакцию дают арген-таффинные гранулы, а также ткани, содержащие активные SH-группы. ПРИМЕЧАНИЕ После п. 4 можно провести окрашивание ядер 1%-ным нейтральным красным в течение 3 мин. «ЖЕЛЕЗНЫЙ» МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ МЕЛАНИНА |
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 |
Скачать книгу "Основы гистохимии" (3.96Mb) |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [обратная связь] |