Биологический каталог




Основы гистохимии

Автор Х.Луппа

выявляется по красному цвету продукта реакции.

4.6. ПИГМЕНТЫ

Термин «пигмент» охватывает целую группу веществ, главным образом эндогенного происхождения, различающихся по своему отношению к кислотам, щелочам, растворителям, жиров, реакциям на железо, солям серебра и красителям, и имеющих различные микроморфологические признаки. В гистохимическом отношении пигменты обычно проявляют мало различий.

По своему происхождению пигменты делятся на фе-нольные (тирозин—триптофановые), пигменты крови и жировые пигменты, или на гематогенные и негематогенные (аутогенные) пигменты. К гематогенным пигментам относится, Например, гемоглобин и его производные, а к аутогенным—меланин, липофусцины и каротиноиды.

4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов 245

Из экзогенных пигментов следует отметить, в частности, угольную пыль, отложения металлов, а также отложения инородных веществ, связанные с терапевтическими или диагностическими воздействиями на организм.

4.6.1.МЕЛАНИН

Меланин встречается преимущественно в форме гранул (гранулы меланина, или меланосомы) в эктодерме и в тканях, происходящих из эктодермы.

Под электронным микроскопом различимы зерна круглой овальной и палочковидной формы.

Синтез меланина в промеланосомах протекает через окисление тирозина до ДОФА при участии пероксидазы и тирозиназы.

Доля участия каждого из этих ферментов в синтезе ДОФА в клетках разного типа варьирует.

Сведения о гистохимических реакциях с участием пигментов суммированы в табл. 43 и 44. В гистохимическом отношении меланин и липофусцин имеют много общего; так, оба они обладают способностью восстанавливать аммиачный раствор нитрата серебра. Отдифференцировать их можно с помощью нильского синего, а также по способности липофусцина в отличие от меланина давать видимую собственную флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. Меланин образует комплексы с ионами железа, которые легко выявить с помощью феррицианида калия. На этом принципе основан «железный» метод выявления меланина по Лилли (Lillie). Специфическое контрастирование и ультраструктурное выявление премеланосом возможно с помощью реакции на тирозиназу.

От меланина гистохимически отличается его разновидность—так называемый нейромеланин; он встречается

Возникновение меланина Пероксидаза Тирозиназа

Тирозин

5ucmPg Промежуточные

продукты

246 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов_

Таблица 43

Гнстохимичес"кий дифференциальный диагноз различных эндогенных пит-ментов (Bucher)

Гистохимическая Гемоглобин Гематоидин Гемосиде- Меланин Липофусцин

реакция рин

Псевдопероксидаз- + - - - +

ная реакция с бен-

зидином

Реакция Гмелина с + — — —

HN03

Выявление железа — — + —

феррицианидом

калия (турнбуле-

ва синь)

Восстановление —. — — + +

аммиачного нит-

рата серебра

Обесцвечивание с — — — + +

помощью силь- Быстрое Медленное

ных окислителей-

гД202 и КМп04

Окрашивание жира, - - - — +

например Суда-

ном черным

Собственная флуо- — — — — +

ресценция в ульт-

рафиолетовом

свете

в ганглиозньгх клетках нервной системы. В отличие от меланина нейромеланин содержит капли жира и не дает ДОФА-реакции.

4.6.2. ГЕМОСИДЕРИН

Внутриклеточный пигмент в форме гранул, имеющих цвет от желтого до коричневого, содержит железо, что является важным диагностическим признаком. Гемосидерин нерастворим в щелочах, но растворяется в сильных кислотах. Он не обесцвечивается сильными окислителями, не проявляет аргентаффинности, свободен от жира и дает положительную ШИК-реакцию, обусловленную его нахождением в бел-ково-полисахаридном комплексе. Этот комплекс-носитель, кроме того, дает резко положительную реакцию с тетразо-лием после бензоилированйя.

Таблица 44

Сравнительная гистохимия липофусцина, гемосидерина и меланина (Pearse, с изменениями)1

Липофусцин Гемосидерин Меланин

ганглиозные клетки миокард клетки печени Цвет От желтого до Золотисто-ко- Светло-корич- От желтого до От коричневого

темно-коричне- ричневый невый коричневого до черного

вого

Эозинофилия - - - -

Базофилия От слабо + до + Слабо + + От слабо + до - +

Кислотоустойчивость - - + - -

Судан черный + + + -

Масляный красный О - Умеренно - - -

(замороженные

срезы)

Шифф-надмуравьиная + (вар) + (вар) + (вар) - -

кислота

ШИК-реакция ± + + - _

Плазмалевая реакция - - - - _

Щелочной раствор се- Слабо + - От слабо + до - _ +

ребра

Реакция Шморля Сильно + От слабо + до - + - +

Реакция Гмелина - _ _ - _

Н2О2 (обесцвечивание) 48+ 48 + 48 + - -

Диазореакция (щелоч- - - - - -

ная)

Диазореакция (кислая) - - _ - -

Флуоресценция в Золотисто-жел- Красно-корич- Светло-коричне- ' - -

ультрафиолете тая невая вая - -

Хромовый гематокси- + + + - -

лин

') Обозначения: ± преимущественно отрицательная реакция; + (вар) - обычно положительная, но частично отрицательная; 48 + означает более 48 ч.

248 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов

Гистохимическое выявление гемосидерина основано в первую очередь на присутствии железа, которое выявляется самыми разнообразными методами, например с помощью метода Перлса (Perls). Родственный липофусцину гемосидерин может быть выявлен в серийных срезах путем последовательного выявления липофусцина и железа (метод Перлса).

4.6.3. ЛИПИДНЫЕ ПИГМЕНТЫ

Принадлежащие к этой группе пигменты (липофусцин, гемофусцин, цероид, псевдомеланин, железосодержащие липопигменты, каротиноиды), как правило, имеют собственную окраску от светло-желтой до темно-коричневой и встречаются в виде мелких зерен и глыбок. Они содержат в качестве строительных блоков, в частности, труднорастворимые продукты окисления и полимеризации ненасыщенных карбоновых кислот или их эфиры, а также белки.

В отношении важнейших физических и.гистохимических свойств, а также по способности окрашиваться различные липидные пигменты имеют много общего. Поэтому их не удается однозначно дифференцировать друг от друга с помощью гистохимических методов. Различия в первую очередь следует искать в количестве и качественном составе белкового компонента. Из группы гистохими-чески выявляемых липидных пигментов наиболее тщательно был изучен имеющий важное биологическое значение липофусцин. Сравнение гистохимических свойств этого пигмента с гистохимическими свойствами гемосидерина и меланина проведено в табл. 44.

Отмечена определенная связь между липофусцином (в частности, его образованием) и лизосомами; важную роль при этом играют кислые гидролазы—например, кислая фосфатаза и неспецифическая эстераза (рис. 6). Липофусцин, меланин и гемосидерин накапливаются в остаточных тельцах и вместе с ними идентифицируются.

Для гистохимического выявления липофусцина были разработаны различные методы. Надежные результаты дает реакция Шморля и метод Циля—Нильсена. Реакция Шморля основана на выявлении восстанавливающих веществ; метод Циля—Нильсена использует способность

4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов 249

липофусцина окрашиваться основными, жирорастворимыми красителями. В присутствии фенола растворимость красителей в липидах повышается.

Для дифференцировки меланина и липофусцина можно использовать окраску нильским синим по Хуэку (Hueck).

Лизосона

Рис. 6. Механизм образования липофусцина и меланина в лизосомах (Pearse, 1972).

Химически однородная группа каротиноидов ранее называлась липохромамн или лутеинами. Каротиноиды широко распространены в растительных и животных тканях; они представляют собой безазотистые соединения разного цвета—от светло-желтого до красно-фиолетового. Их углеродный скелет построен из изопреновых единиц.

Отличительным свойством каротиноидов является то, что их спектр поглощения лежит в сине-зеленой области и имеет 3 четко выраженных пика. С помощью спектров поглощения можно легко опознавать различные красители.

Гистохимические методы выявления каротиноидов основаны в первую очередь на легкой окисляемости сопряженных двойных связей в их молекуле. Под действием кислот, например концентрированной серной, соляной, фосфорной, хлорной и других, каротиноиды приобретают интенсивное синее, зеленое или фиолетовое окрашивание.

10-235

250 4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов

С хлоридами сурьмы (III) и мышьяка (III) каротиноиды образуют соли карбония синего цвета. Практическое значение имеют реакции с серной кислотой, а также проба Карра—Прайса с хлоридом сурьмы в хлороформе.

4.6.4. МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ПИГМЕНТОВ

МЕТОД ШМОРЛЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИПОФУСЦИНА МЕТОДИКА

1. Фиксация в формалине; приготовление замороженных или парафиновых срезов.

2. Срезы промыть в дистиллированной воде.

3. Поместить срезы в реакционную смесь на 5—20 мин. Реакционная смесь: 3 части 1%-ного раствора FeCl3 смешивают с 1 частью 1%-ного раствора гексацианоферрата (III) калия (красная кровяная соль). Раствор использовать в течение 30 мин! /

4. Срезы хорошо промыть в проточной воде. В особо важных случаях рекомендуется проводить микроскопию срезов, заключенных в воду.

5. Быстро обезводить в ряду спиртов возрастающей концентрации, ксилол, нейтральный бальзам.

РЕЗУЛЬТАТ

Липофусцин и меланин окрашиваются в темно-синий цвет. Кроме того, положительную реакцию дают арген-таффинные гранулы, а также ткани, содержащие активные SH-группы.

ПРИМЕЧАНИЕ

После п. 4 можно провести окрашивание ядер 1%-ным нейтральным красным в течение 3 мин.

«ЖЕЛЕЗНЫЙ» МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ МЕЛАНИНА

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54

Скачать книгу "Основы гистохимии" (3.96Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(21.03.2019)