ователями (Tominaga et al., 1990). По мнению канадских авторов (Bateman et al., 1989), биологическая роль рассматриваемого феномена может заключаться в модуляции дефенсинами нейроэндо-кринно-иммунных взаимодействий, опосредованных функционированием надпочечников. Экспериментальные данные в подтверждение этой гипотезы были получены нашим научным коллективом в НИИ экспериментальной медицины РАМН.

Нами было исследовано влияние экзогенных дефенсинов на некоторые показатели эндокринного и иммунологического статуса организма экспериментальных животных в условиях стресс- и АКТГ-ин-дуцированной активности гипоталамо-гипофизарно-адренокортика-льной системы (ГТАКС). Поскольку при данных воздействиях имеет место интенсификация продукции глюкокортикоидных гормонов надпочечниками, эти модели можно рассматривать как адекватные для изучения кортикостатической активности дефенсинов in vivo (Шамова и др., 1993).

На модели ротационного стресса (10 мин при 78 об/мин) нами было установлено, что дефенсины кролика, вводимые внутрибрюшинно за 10 мин до начала стрессорного воздействия, вызывают у мышей заметное снижение кортикостерона в крови (табл. 9). Подавляющее глюкокортикоидную реакцию действие дефенсинов было наиболее выражено через 30 мин после окончания стрессорного воздействия. Введение дефенсинов за 1 ч или через 30 мин после стресса оказалось неэффективным.

Сходные изменения в уровне кортикостерона в крови были получены при введении дефенсинов кролика крысам в период, предшествующий острому холодовому воздействию (-20 °С, 20 мин). Содержание гормона у таких животных было почти в 2 раза ниже по сравнению с группой, подвергнутой только стрессу (62—72 против 128—145 нг/мл).

Стереотипность гормональных сдвигов у исследованных животных под воздействием парентерально вводимых дефенсинов может свидетельствовать об единообразии морфобиохимических механизмов, вовлекаемых в формирование и модуляцию стрессобусловленных состояний. Вслед за канадскими исследователями можно допустить, что Таблица 9

Влияние дефенсинов на изменение концентрации кортикостерона в крови мышей, подвергнутых ротационному стрессу

Группа животных и условия эксперимента Концентрация кортикостерона, нг/мл через 30 мин через 60 мин через 120 мин

1. За 10 мин до стресса введен физра- 290±27 316±41 295±46

створ л = 6 п = 6 /1 = 5

2. За 10 мин до стресса введен дефен- 164±18* 213±32* 178±37

син кролика в дозе 20 нг/г л = 6 л = 5 л = 5

3. За 10 мин до стресса введен дефен- 52±26* 114±12* 168±8*

син кролика в дозе 2 мкг/г п = 6 /2 = 6 л = 6

Примечание. Здесь и в табл. 10—12 л — количество животных в группе. * — р < 0.05 в сравнении с 1 -й группой. Обработано по t-критерию Стьюдента.

одной из возможных мишеней воздействия дефенсинов могут быть рецепторы АКТГ-клеток коркового слоя надпочечников, конкурентное связывание полипептидов с которыми подавляет синтез и секрецию кортикостерона (Zhu et al., 1989).

В пользу этих представлений свидетельствуют данные нашей лаборатории о влиянии индивидуальных фракций дефенсинов кролика на характер АКТГ-индуцированной глюкокортикоидной реакции у мышей (табл. 10). Из шести использованных фракций дефенсинов наибольшее кортикостатическое действие проявили компоненты NP-За и NP-Зв, которые и в культуральных условиях были наиболее активны в рассматриваемом отношении (Zhu et al., 1989; Zhu, Solomon, 1992).

Специальный интерес представляло изучение кортикостатических свойств открытых нами полипептидов из лейкоцитов свиньи — протегринов, первичная структура которых характеризуется заметным сходством с таковой фракции NP-За дефенсинов кролика. На той же экспериментальной модели было установлено кортикостатическое действие фракции PG-3 протегринов свиньи, тогда как PG-1 и PG-2 в использованных дозах оказались неэффективными (табл. 11). Интересно, что в структурном отношении именно фракция PG-3 наиболее схожа с NP-За. Есть основания предполагать, что для конкурентного связывания дефенсинов и протегринов с рецептором кортикотропина определенную роль играет не только последовательность из трех остатков аргинина (RRR), но и аминокислота глицин, которая является N-концевой у NP-За, занимает 4-ю позицию в полипептиде PG-3 и отсутствует у компонентов PG-1 и PG-2. На значимость глицина в реализации кортикостатического действия дефенсинов указывают данные японских исследователей (Fuse et al., 1993), которые из селезенки кроликов выделили новую фракцию. По своей первичной структуре она оказалась очень близкой к таковой фракции NP-За (три замены в положении 11, 13 и 15), но без N-концевого глицина. Этот новый компонент дефенсинов не обладал кортикостатической активностью в культуральных условиях.

юз

Таблица 10

Влияние индивидуальных фракций дефенсинов кролика на вызванное АКТТ повышение уровня кортикостерона (КС) в сыворотке крови мышей

Группа животных и условна эксперимента Доза вводимого препарата Концентрация КС в сыворотке, нг/мг п

1. Интактные _ 28.7±11.4 12

2. Введен физраствор — 52.7±2.2 5

3. Введен ЛФ 0.5 мкг/г 31±4.5 . 4

4. Введен NP-2 0.5 мкг/г 42.5±3.2 5

5. Введен АКТГ — - 73.2±9.6 5

6. Введен физраствор за — 75.3±11.5 5

30 мин до АКТГ

7. Введен NP-1 за 30 мин до 50 нг/г 73.4±13.5 5

АКТГ 0.5 мкг/г 64.8±10.8 5

8. Введен NP-2 за 30 мин до 50 нг/г 73.6±14.6 5

АКТГ 0.5 мкг/г 70±6.2 5

9. Введен NP-За за 30 мин до 50 нг/г 60.6±9.1 5

АКТГ 0.5 мкг/г 45.8±8.1* 5

10. Введен NP-Зв за 30 мин до 50 нг/г 44.6±5.7* 5

АКТГ 0.5 мкг/г 45.8*6.4* 5

11. Введен NP-4 за 30 мин до 50 нг/г 80.3±6.7 5

АКТГ 0.5 мкг/г 65.3±13.8 5

12. Введен NP-5 за 30 мин до 50 нг/г 64.4±1.9 5

АКТГ 0.5 мкг/г 75.4±5.4 5

13. Введен ЛФ за 30 мин до 50 нг/г 65.5±9.3 5

АКТГ

14. Введен протамин-сульфат 0.5 мкг/г 74.3±13