Биологический каталог




Транскрипция и трансляция. Методы

Автор Б.Хеймс, С.Хиггинс

............. „~

Литература...............

Глава 8. Выделение эукариотической матричной РНК (мРНК). М. Кле-

мене................ Л4

254

1. Введение .............. ZZ.

2. Выделение и очистка матричной РНК.......

2.1. Оборудование и растворы........- ^j*?

2.2. Выбор метода выделения РНК........ ibl

2.3. Выделение РНК из целых клеток или цитоплазматических фракций.......·.......

398 Оглавление

2.4. Выделение полисомной РНК......... 262

2.5. Выделение вирусной РНК .... . . . ! . 268

2.6. Фракционирование РНК....... . . . 270

2.7. Ингибиторы рибонуклеаз.......... 274

Благодарности.............. 275

Литература............... 275

Глава 9. Трансляция эукариотических матричных РНК в бесклеточных

экстрактах. М. Клеменс.......... 277

1. Введение............... 277

2. Лизат ретикулоцитов............ 277

2Л. Приготовление и хранение лизата....... 278

2.2. Оптимизация активности.......... 280

2.3. Условия инкубации для синтеза белка...... 281

2.4. Обработка микрококковой нуклеазой....... 285

2.5. Достоинства и недостатки.......... 288

3. Экстракты зародышей пшеницы......... 290

3.1. Приготовлене и хранение экстрактов....... 290

3.2. Условия инкубации для синтеза белка...... 291

3.3. Обработка микрококковой нуклеазой........ 293

3.4. Преимущества и недостатки......... 293

4. Другие эукариотические бесклеточные системы..... 294

4.1. Получение экстрактов клеток асцитной опухоли Эрлиха 295

4.2. Предынкубация клеточных экстрактов...... 296

4.3. Условия инкубации для синтеза белка ..... 296

4.4. Обработка микрококковой нуклеазой....... 299

4.5. Другие бесклеточные системы........ 299

4.6. Достоинства и недостатки бесклеточных систем культивируемых клеток.............. 299

5. Анализ продуктов трансляции.......... 301

5.1. Стимуляция включения аминокислот....... 301

5.2. Электрофорез в ПААГ —ДСН........ 302

5.3. Иммунопреципитация продуктов трансляции .... 303

5.4. Анализ триптических пептидов........ 305

5.5. Расшифровка аминокислотной последовательности . . . 308

5.6. Анализ биологической активности....... 308

6. Процессинг продуктов трансляции......... 309

6.1. Сигнальные последовательности........ 309

6.2. Протеолиз первичных продуктов........ 313

7. Исследование регуляции трансляции с помощью бесклеточных систем................ 3]4

7.1. Лнзат ретикулоцитов........... 314

7.2. Экстракты культур клеток и тканей....... 320

Благодарности .............. 324

Литература............... 325

Глава 10. Трансляция эукариотической матричной РНК в ооцитах Xenopus. А. Колмен............ 327

1. Введение............... 327

2. Получение и подготовка ооцитов для микроинъекций . . . 331

2.1. Покупка и содержание Xenopus laevis...... 331

2.2. Извлечение ткани яичника из Xenopus...... 332

2.3. Подготовка ооцитов к инъекции........ 334

3. .Микроинъекции мРНК в ооциты......... 336

3.1. Необходимое оборудование......... 336

3.2. Изготовление, калибровка и хранение микропипеток . . 340

3.3. Микроинъекции матричной РНК........ 343

Оглавление

399

4. Культивирование ооцитов после инъекции и введение в них радиоактивной метки............. 346

4.1. Среда для культивирования......... 346

4.2. Выбор радиоактивных аминокислот ... ... 346

4.3. Другие радиоактивные предшественники...... 348

4.4. Выбор времени мечения.......... 348

4.5. Процедура мечения ооцитов......... 349

5. Сбор, фракционирование и анализ ооцитов и инкубационной среды после культивирования.......... . 349

5.1. Разделение ооцитов и инкубационной среды после инкубации 350

5.2. Гомогенизация ооцитов.......... 350

5.3. Фракционирование ооцитов с помощью центрифугирования

в градиенте сахарозы..... ...... 350

5.4. Обработка инкубационной среды........ 352

5.5. Иммунопреципитация........... 352

5.6. Алкилирование и анализ белков с помощью электрофореза

в ПААГ — ДСН в восстанавливающих условиях ..... 353

5.7. Частичное алкилирование и анализ в ПААГ —ДСН без восстановления .............. 353

5.8. Двумерный гель-электрофорез........ 354

6. Специальные методы..... ...... 356

6.1. Энуклеация ооцитов........... 356

6.2. Ингибирование трансляции......... 358

6.3. Ингибирование посттрансляционной модификации . . . 358

6.4. Эксперименты по защите от протеаз . . .... 359

7. Использование системы ооцитов......... 360

OKI)

Литература...............

Приложение I. Маркеры молекулярной массы нуклеиновых кислот и по-

липептидов. С. Минтер и П. Сили...... ibt>

1. Маркеры ДНК.............. Ц1

1.1. Плазмида pBR322 ............

1.2. Плазмида рАТ153............ ™а

1.3. Бактериофаг Лямбда (?)..........

1.4. Обезьяний вирус 40 (SV40)......... ™=

1.5. Колифаг М13тр7........ ¦ ·

1.6. Бактериофаг 0X174........... \'\

1.7. Колифаг fd.............. il\

2. Маркеры РНК.............. %'\

3. Маркеры молекулярной массы полипептидов...... ^/1

Литература...............

Приложение II. Фирмы — поставщики оборудования и реактивов . 378

381

Список сокращений . . . ........ ·

382

Список авторов ..... . ..........

383

Предметный указатель..............

УВАЖАЕМЫЙ ЧИТАТЕЛЬ!

Ваши замечания о содержании книги, ее оформлении, качестве перевода и другие просим присылать по адресу:

129820, Москва, И-110, ГСП,

1-й Рижский пер., д. 2,

издательство «Мир»

Практическое руководство

Дж. Гердон, Деметриос Спандидос, Нил Уилки, Алан Колмен, Джеймс Мэнли, Уильям Марзлаф, Ру Чи Хуан, Стюарт Гилмор, Нил Стоукер, Джули Пратт, Барри Холлавд, Майкл Клеменс, Стефан Минтер, Поль Силн

ТРАНСКРИПЦИЯ И ТРАСЛЯЦИЯ. МЕТОДЫ

Пер. с англ. Под ред. Б. Хеймса и С. Хиггинса

Научи, редактор Т. И. Пономарева. Ст. научн. редактор ?. Н. Шафрановская Мл. редактор О. В. Шагинян. Художник А. П. Захаров Художественный редактор А. Я. Мусин. Технический редактор И. М. Кренделева Корректор В. И. Киселева

ИБ № 62458

Сдано в набор 6.04.87. Подписано к печати 27.07.87. Формат 60X90'/ie. Бумага типографская № 1. Печать высокая. Гарнитура латинская. Объем 12,5 бум. л. Усл. печ. л. 25,00. Усл. кр.-отт. 25,00. Уч.-изд. л. 28,10. Изд. № 4/5157. Тираж 4850 экз. Зак. 953. Цена 3 р. 50 к.

Издательство «Мир». 129820, ГСП, Москва, И-110, 1-й Рижский пер., 2

Московская типография № ц Союзполиграфпрома при Государственном комитете СССР по делам нздательств, полиграфии и книжной торговли. 113105, Москва, Нагатинская ул., д. 1.

страница 88
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88

Скачать книгу "Транскрипция и трансляция. Методы" (6.57Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(10.12.2019)