|
|
Транскрипция и трансляция. Методылков, определение включившейся радиоактивности 225— 229, 283—285 — РНК, количественное определение 121—123, 169—173 Сплайсинг 68, 85, 105, 156 Тимидинкиназа (ТК), определение активности 34 — отбор tt-трансформантов 12—16, 33—35 — тест на наличие мРНК 35, 37 — транскрипция гена 10—24 Тионуклеозидтрифосфаты, исследование РНК-транскриптов 126—131, 138, 150—151 Транскрипция в бесклеточных экстрактах при участии РНК-полимеразы I 89—90, 108—109 .------- РНК-полимеразы II 89—99, 101—105 ------РНК-полимеразы III 89—90, 109 -- ооцитах Xenopus при участии РНК-полимеразы I 67—68, 84— 85 ------РНК-полимеразы II 65—67, 77—85 --· трансфицированных клетках при участии РНК-полимеразы II 10—61 --хроматине при участии РНК-полимеразы II 118, 161, 164 --ядрах при участии РНК-полимеразы I 119, 121, 123 -----РНК-полимеразы II 119—123 — идентификация РНК-полимераз 84—85, 97—98, 119, 121—123 — инициация синтеза РНК 127—136 — количественное определение 37, 121—123, 138—142, 169—173 --— РНК-транскриптов 37, 121, 123, 138—142, 171—173 — определение концов РНК-транск- риптов см. Картирование --размеров РНК-транскриптов 79—81, 95—96, 101, 124—125, 142, 144, 270 --сайтов инициации 60—61, 79, 81, 83-84, 94—101, 144—147, 173—180. См. Картирование — прерванная 94—99 — регуляторные последовательности 52 --факторы 87, 157 — сайты терминации 85 — системы см. Бесклеточные про- кариотические системы, Транс-фекция, Хроматин, Экспрессия генов in vivo, Ядра — скорость элонгации 96, 125—127, 147—149 Транскрипция—трансляция в ооцитах Xenopus 86—87 -- достоинства и недостатки системы in vitro-250, 251—252 390 Предметный указатель --сравнение систем in vitro с системами in vivo 251 --у прокариот 216—252. См. также Бесклеточные прокариотиче-ские системы Трансляция эукариотической мРНК в бесклеточных фракционированных системах 299 ----лизате ретикулоцитов, включение аминокислот 283—285, 287 — —----достоинства и недостатки системы 288—290 ------ обработка микрококковой нуклеазой 285—287 ------оптимизация бе- локсинтезирующей активности 280— 281 --- — — — приготовление и хранение лизата 277—280 -----— регуляция, ингибиторы белкового синтеза 318— 320 ----—--механизм действия ингибиторов 318—320 ------- образование комплексов инициации 314—318 ------ трансляция экзогенных мРНК 281—283, 287— 288, 301—302 ----¦---эндогенных мРНК 281, 287, 302 ----- — условия инкубации 281— 285, 287—288 ---- ооцитах Xenopus см. Матричная РНК (мРНК), микроинъекции в ооциты Xenopus ¦---- - экстрактах зародышей пшеницы, обработка микрококковой нуклеазой 293 ---¦----преимущества и недостатки системы 293—294 ------- приготовление и хранение экстрактов 290—291 ------- условия инкубации 291—293 -----культур клеток, достоинства и недостатки системы 299—301 ------- обработка микрококковой нуклеазой 299 ---¦----оптимизация условий инкубации 297—298 -------предынкубация клеточных экстрактов 296 ------- приготовление экстрактов 295—296 -------и тканей, образование комплексов инициации 320—322 —--продукты трансляции, анализ с помощью электрофореза в ПААГ—ДСН 302—303 ------ триптических пептидов 305—308 ----— биологическая активность в бесклеточных экстрактах 308 --------ооцитах Xenopus 331 -----включение аминокислот 301—302 --¦---иммунопреципитация 303, 305 — — ¦---расшифровка амино- кислотных последовательностей 308 ---процессинг, протеолиз первичных продуктов 313—314 ----сигнальные последовательности см. Сигнальные последовательности Транспортные РНК (тРНК), использование 1Ч-формил-Р55]-метио-нил-TPHKf для изучения процессинга продуктов трансляции 313, 316 — — получение [35S]-Met-TPHK 315—316. См. также Процессинг посттранскрипционный Трансфекция клеток млекопитающих, векторы на основе вирусов 43— 48 Предметный указатель 391 ---выбор метода переноса генов 32—33 —--ДЭАЭ-декстрановый метод 24—26 ---индуцибельные гены 55—61 -- — использование электростимуляции 32 ---кальцийфосфатная методика см. Кальцийфосфатная методика трансфекции клеток млекопитающих ---липосомы как переносчики генов 29—31 --- метод отбора колоний на метоцеле 15 ---микроинъекция ДНК см. ДНК ---перенос генов с помощью хромосом 32 ---последовательности ДНК, регулирующие транскрипцию 52—55 --— селектируемые маркеры, аминогликозид —¦ фосфотрансфе- раза (???) 38 -----гипоксантин-гуанин— фосфорибозилтрансфераза (HGPRT) 38 -----дигидрофолатредук- таза (DHFR) 41—42 — —---· — доминантные трансформирующие гены 42—43 ----·— ксантин-гуанин— фосфорибозилтрансфераза (XGPRT) 40—41 -----онкогены 43 -------тимидинкиназа 33—34 -----хлорамфеникол- ацетилтрансфераза (CAT) 39—40 --- слияние протопластов с эукариотическими клетками в культуре 31 ---стабильная трансформация 50—52 ---упаковка in vitro ДНК вирусов эукариот 32 ---фаза временной экспрессии перенесенных генов 48—50 ---экспрессия генов, чувствительных к глюкокортикоидам 57 ----глобиновых генов 59— 61 ----металлотионеиновых генов 56—57 ----гй-гена HSV 48—55 Трансформация см. Трансфекция Трикаин (MS 222) 333. См. также Этил-ж-аминобензоат «Триптиказный» агар 189 Трихлоруксусная кислота (ТХУ), применение при изучении синтеза белков 225—228, 284—285 ----- транскрипции 120— 121 Фаг, использование в системе мини-клеток 208 — — — —¦ УФ-облученных клеток- хозяев 186—187, 192 — — при трансфекции клеток мле- копитающих 18 — концентрирование препаратов 194 •— осаждение в полиэтиленгликоле (ПЭГ) 194. 195 — получение 193—195 — титрование 193, 194 Фенол, использование при выделении РНК 123, 257—260 — перегонка 256—257 Флюорография геля 197, 198 Хлорамфеникол-ацетилтрансфераза (CAT) 39—40, 234—236 Хроматин, анализ специфических РНК-транскриптов гибридизацией с ДНК-зондами 169—173 ---- картирование с помощью нуклеазы S1 173—180 — выделение гистонов методом соле- вой экстракции 181 392 Предметный указатель ¦----хроматографии на гидр- оксиапатите 181 -- негистоновых белков методом дифференциального экстрагирования 181 •-----хроматографии на гидроксиапатите 181 --РНК-полимеразы Е. coli 162— 165 — обоснованность применения РНК- полимеразы Е. coli 164, 180— 181 — принципы методов выделения 160—161 — проблемы, связанные с наличием эндогенной РНК 165—167 — реконструкция 182—184 — сохранение эндогенной РНК-по- лимеразной активности 118 — транскрипция ДНК-зависимая РНК-полимеразой Е. coli 167— 169 --РНК-зависимая РНК-полимеразой Е. coli 180 — — эндогенной РНК-полимеразой 118—121 — фракционирование 181—182 Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы гомогенизированных ооцитов 350—352 -----комплексов инициации трансляции 321—322 —----метод «подушки» 352 '-------«ступенчатый» 352 <-----микросомных мембран 310 ¦-----мини-клеток 201— 204 -----РНК 124, 270—271 — —--CsCl, метод самофор- мирующегося градиента 194 Штаммы Е. coli с низкой РНКазной активностью или без нее 240 Экзонуклеаза V в клетках Е, coli 241—242 Экспрессия генов в бесклеточных прокариотических системах транскрипции—трансляции 240 --in vivo в прокариотических системах, соответствие между генами и их продуктами 213— 214 —-------макси-клеток, введение радиоактивной метки в кодируемые плазмидой белки 209, 212 --------возможные проблемы 212—213 -----·----выбор бактериального штамма 208—210 — —----. _ _ подходящие плазмиды 210 -------- — получение макси-клеток 210—211 --------принцип метода 186, 208 -----·---сравнение с другими системами in vivo и in vitro 187 -------мини-клеток, введение радиоактивной метки 205 ---¦-----возможные проблемы 206—207 —--------заражение мини-клеток бактериофагами 208 --·------подходящие плазмиды 200 -------- полипептиды — предшественники белков 207—208 -------- получение и очистка мини-клеток 201—204 --------принцип метода 186, 199—200 -------- сравнение с другими системами in vivo и in vitro 187 Предметный указатель 393 --------трансформация хозяина — продуцента мини-клеток 200—202 ---------фракционирование мини-клеток 207 --------штамм-хозяин Е. coli 410, 200 -------УФ-облученных клеток-хозяев, введение радиоактивной метки в кодируемые фагом белки 195—197 --------- возможные проблемы 197—198 ---------использование фагов с гибридным иммунитетом 199 ---------концентрирование препаратов фага 194 --------- необходимые материалы и штаммы 192 ---------получение фага 193—195 --------- принцип метода 186, 190, 192 ----------сравнение с другими системами in vivo и in vitro 187 — эукариотических генов в клетках Е. coli 249—250 ----системах in vitro 250 Электрофорез в агарозном геле 55, 59, 79, 95—97, 101, 125, 270—271 --полиакриламидном геле в присутствии ДСН (ПААГ —ДСН) 197,209, 214, 227—229, 234, 238, 248, 301—303, 313, 353—354 Элонгация при транскрипции 96, 125—127, 147—149. См. также Транскрипция Энуклеация ооцитов 356—358 Энхансеры 52—55 Этил-ж-аминобензоат 333. См. также Трикаин Ядра, анализ суммарных РНК-продуктов 124—125 — выделение без использования де- тергентов 117—118 --из клеток культуры ткани 112—115 ---целых тканей 115 — — и изучение первичных РНК- транскриптов 149—151 ¦--с помощью неводных методов 118 — защита от нуклеаз и протеаз при выделении 115—117 — инициация синтеза РНК, исполь- зование [7-32Р]-нуклеозидтрифос- фатов 127—129 -----?-тионуклеозидтри- фосфатов 130—131 ----— у-тионуклеозидтри- фосфатов 128—130 ----кэпирование 131—136, 155—156 ?— как система для изучения транскрипции, преимущества и недостатки 111—112 — количественная оценка специфиче- ских РНК-транскриптов 138—142 — определение активности РНК-по- лимераз 121—123 --концов РНК-транскриптов 144—147 --размеров РНК-транскриптов 124, 142—14 |
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 |
Скачать книгу "Транскрипция и трансляция. Методы" (6.57Mb) |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [обратная связь] |