ненты и доводят рН до 6,8.

20.3.19. Модифицированная Лейфсоном среда для теста O/F (MOF) [55]

Казитон Difco 1,0 г

Дрожжевой экстракт 0,1 г

(NH4)2S04 0,5 г

Трис 0,5 г

Феноловый красный 0,01 г

Агар 3,0 г

Искусственная мор- 500 мл

екая вода

(разд. 20.3.29) Дистиллированная 500 мл

вода

Компоненты растворяют в дистиллированной воде, доводят рН смеси до 7,5 и стерилизуют автоклавированием. Морскую воду автоклавируют отдельно. Охлаждают оба раствора до 45—50 °С и сливают их с соблюдением правил асептики. Добавляют 10- или 20%-ный раствор подходящего углевода (обычно глюкозы), стерилизованного путем фильтрования, до конечной концентрации 0,5 или 1,0%. Среду разливают с соблюдением правил асептики по 2,5—3,0 мл в пробирки размером 13x100 мм и оставляют для охлаждения.

20.3.20. Лакмусовое молоко [12]

Спиртовой раствор лакмуса. 50 г лакмуса измельчают в ступке с 150 мл 40%-ного этанола. Смесь переливают в колбу и осторожно кипятят 1 мин в паровой бане. Жидкость декантируют и хранят отдельно. К осадку добавляют еще 150 мл 40%-ного этанола и снова кипятят 1 мин. Надосадочную жидкость декантируют и объединяют с предыдущей порцией. Объединенную порцию оставляют на ночь и затем разбавляют 40%-ным этанолом до 300 мл. Доводят рН до 7,0, добавляя по капле 1 н. НС1.

Приготовление среды. В снятое молоко добавляют достаточное количество лакмуса до появления сине-фиолетовой окраски (обычно 40 мл на 1 л). Доводят рН смеси до 7,0, добавляя 1 н. NaOH. Стерилизуют автоклавированием при 115°С в течение 10 мин. Перегревание приводит к карамелизации.

20.3.21. Малонатный бульон [34]

Дрожжевой экстракт 1,0 г Малонат натрия 3,0 г

(NH4)2S04 2,0 г Глюкоза 0,25 г

К2НР04 0,6 г Бромтимоловый си- 0,025 г

КН2РОА 0,4 г ний

NaCI 2,0 г Дистиллированная 1000 мл

вода

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,0. Стерилизуют автоклавированием.

20.3.22. Предварительно восстановленная молочная среда [7]

Свежее снятое молоко 100 мл

Раствор ресазурина, 0,025%-ный 0,4 мл

Раствор гемина (разд. 20.3.28) 1,0 мл

Раствор витамина Ki (разд. 20.3.28) 0,02 мл

В колбу наливают молоко и ресазурин и готовят среду так же, как пеитонно-дрожжевой бульон PY (разд. 20.3.28). После кипячения и остывания добавляют гемин и витамин Кь После пропускания СО2 рН должен быть 7,1. Среду разливают в пробирки, через которые был пропущен газообразный азот, закрывают пробками, помещают в зажимное устройство и автоклави-руют при 121 °С в течение 12 мин.

20.3.23. Бульонная основа Меллера [61]

Пептический гидролизат животной ткаии USP 5,0 г

Экстракт из говяжьего мяса 5,0 г

Бромкрезоловый красный, 1,6%-ный раствор 0,625 мл

Крезоловый красный, 0,2%-ный раствор 2,5 мл

Глюкоза 0,5 г

Пиридоксаль 0,005 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Примечание: По оригинальной методике используют специальный пептон Ортана; однако можно применять тиотон (BBL, пептический гидролизат животной ткани) [10].

Компоненты смешивают, доводят рЫ смеси до 6,0 или 6,5. Смесь разливают в пробирки размером 13х X100 мм и стерилизуют автоклавированием.

20.3.24. Бульон MRVP

Полипептон или забуференный пептон 7,0 г

К2НРО4 (см. примечание) 5,0 г

Глюкоза 5,0 г

Дистиллированная вода 1000 мл

(Примечание: При испытании бактерий рода Bacillus в реакции Фогес — Проскауера фосфат заменяют 5,0 г NaCl [2].)

Компоненты смешивают и регулируют рН смеси таким образом, чтобы после автоклавирования и охлаждения он был 6,9. Разливают по 5 мл и стерилизуют 10 мин при 121 °С.

20.3.25. Питательный агар

Экстракт из говяжьего мяса 3,0 г

Пептон 5,0 г

Агар 15,0 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 6,8. Стерилизуют автоклавированием.

20.3.26. Фенилаланиновый агар

Дрожжевой экстракт 3,0 г NaCI 5,0 г

L-фенилалаиии 1,0 г Агар 12,0 г

Na2HP04 1,0 г Дистиллированная 1000 мл

вода

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Кипятят для растворения агара, разливают в пробирки и стерилизуют автоклавированием, Пробирки охлаждают в наклонном положении.

20.3.27. Предварительно восстановленный агар PY [7]

Готовят бульон PY (разд. 20.3.28) и разливают его по 10 мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, через которые одновременно пропускают азот, очищенный от кислорода. Снимают газопроводные трубки, пробирки закрывают пробками и автоклавируют 15 мин в зажимном устройстве в автоклаве с быстрым вытеснением воздуха. После автоклавирования среду перемешивают, несколько раз переворачивая пробирки в зажимном устройстве.

20.3.28. Предварительно восстановленный

бульон PY [7]

Пептон 5,0 г

Триптиказа 5,0 г

Дрожжевой экстракт 10,0 г

Ресазурин, 0,25%-ный раствор 4,0 мл

Солевой раствор (см. ниже) 40,0 мл

Раствор гемина (см. ниже) 10,0 мл

Раствор витамина Ki (см. ниже) 0,2 мл

ЦистеинНС! 0,5 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Солевой раствор: 0,2 г СаС12 (безводный); 0,48 г MgS04-7H20; 1,0 г К2НРО4; I г КН2Р04; 10,0 г NaHC03; 2,0 г NaCI. СаС1а и MgS04 растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Вливают 500 мл дистиллированной воды и, помешивая, добавляют остальные соли. После растворения солей добавляют 200 мл дистиллированной воды.

Раствор гемина: 0,05 г гемина растворяют в 1 мл 1 н. NaOH. Объем доводят дистиллированной водой до 100 мл. Автоклавируют 15 мин при 121°С.

Раствор витамина К\: 0,15 мл витамина Ki растворяют в 30 мл 95%-ного этанола.

Для приготовления бульона PY сухие ингредиенты (кроме цистеина) помещают в колбу с вертикальным отводом, предназначенным для предотвращения пере-кипания. Для приготовления 750 мл среды используют 1-л колбу, а для приготовления 500 мл среды — 750-мл колбу. Добавляют воду, солевой раствор и ресазурин. Кипятят до тех пор, пока розовая окраска ресазурина не станет бесцветной. Снимают колбу с огня и вместо отвода устанавливают форштосс с двумя отводами, в один из которых вставлена газоотводная трубка. Во время охлаждения среды в ледяной бане до комнатной температуры через нее пропускают очищенный от кислорода углекислый газ. Добавляют растворы гемина, витамина Ki и цистеина. Доводят рН смеси до 7,1 с помощью 8 н. NaOH. Пропускание СО2 продолжают до тех пор, пока рН не снизится до 6,9. Затем, пропуская через среду очищенный от кислорода азот, ее разливают в пробирки размером 18X142 мм (Bellco Glass, Inc.), через которые предварительно уже был пропущен азот. После извлечения газоотводной трубки пробирки закрывают черными резиновыми пробками (№ 1). Автоклавируют в течение 15 мин в зажимном устройстве в автоклаве с быстрым вытеснением воздуха и затем охлаждают. Пробирки, в которых среда окрашивается в бледно-розовый цвет, свидетельствующий о ее окислении, выбраковывают.

20.3.30. Цитратный агар Симмонса [84]

Цитрат натрия NaCl MgS04 NH4HaP04

5,0 г Бромтимоловый синий 0,2 г Агар 1,0 г Дистиллированная

1,0 г 0,08 г 15,0 г 1000 мл

вода

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 6,9. Кипятят для растворения агара, разливают в пробирки и стерилизуют автоклавированием. Пробирки остывают в наклонном положении.

20.3.31. Агар с соево-казеиновым гидролизатом

Панкреатический гидролизат казеина USP 1 15,0 г

Папаиновый гидролизат соевой муки USP 5,0 г

NaCl ' 5,0 г

Агар 15,0 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием. (Примечание: эта среда известна также под названием триптоно-соевый агар или трипти-казо-соевый агар; его можно использовать в качестве основы для кровяного агара.)

20.3.32. Полужидкая аргининовая среда Торнли [91]

Пептон 1,0 г L-aprHHHH-HCl 10,0 г

NaCl 5,0 г Агар 3,0 г

К2НРО4 0,3 г Дистиллированная 1000 мл

Феноловый красный 0,01 г вода

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,2. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием.

20.3.33. Модифицированный бульон Тодда — Хьюитта [35]

Экстракт из сердца быка Неопетон

1000 мл 20,0 г

Компоненты смешивают, и доводят рН смеси до 7,0 с помощью 1 н. NaOH. Затем добавляют:

NaCl NaHC03

2,0 г 2,0 г

Na2HP04 0,4 г Глюкозу 2,0 г

Доводят рН смеси до 7,8. Смесь кипятят 15 мин, фильтруют через бумагу и разливают в пробирки. Стерилизуют автоклавированием 10 мин при 121 °С.

20.3.34. Агар с тремя углеводами и железом

Панкреатический гидролизат казеина USP 10,0 г

(см. примечание)

Пептический гидролизат животной ткани USP 10,0 г

(см. примечание)

Глюкоза 1,0 г

Лактоза 10,0 г

Сахароза 10,0 г

Сульфат железа(II)- или сульфат железа(III)- 0,2 г

аммония

NaCI

Тиосульфат натрия Феноловый красный Агар

Дистиллированная вода

5,0 г

0,3 г

0,024 г 13,0 г 1000 мл

(Примечание. Первые два компонента можно заменить следующими: экстракт из говяжьего мяса — 3,0 г; дрожжевой экстракт — 3,0 г; пептон — 20,0 г.)

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Смесь кипятят для растворения агара и разливают в пробирки. Стерилизуют автоклавированием 15 мин при 121 °С. Охлаждают, наклонив пробирки так, чтобы высота столбика агара составляла 2,5 см, а длина скошенной части — 3,8 см.

20.3.35. Безазотная среда для Klebsiella Иоча и Пенгры [99]

6,25 г Сахароза 20,0 г

0,04 г NaCI 8,5 г

0,005 г Дистиллированная 500 мл

вода

Растворы Л и Б автоклавируют отдельно и после охлаждения объединяют их равные объемы с соблюдением правил асептики.

20.4. РЕАКТИВЫ

20.4.1. Реактив Бенедикта

Цитрат натрия 17,3 г

Na2C03 10,0 г

CuS04-5H20 1,73 г

Первые два компонента растворяют при нагревании в 80 мл воды. Смесь фильтруют, разбавляют до 85 мл. Растворяют CuS04 в 10 мл воды и, помешивая, переливают в карбонатно-цитратный буфер. Общий объем доводят до 100 мл дистиллированной водой.

20.4.2. Забуференный раствор глицерина для монтирования микроскопических препаратов

Глицерин 90 мл

Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) (разд. 20.4.17) 10 мл

Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 8,0, добавляя NaOH. Сосуд с растворо