|
|
Методы общей бактериологии. Том 3фокус объектива попадает новое поле. Примечание: следует всегда пользоваться свежеприготовленным рабочим раствором флуоресцирующей антисыворотки. Неразведенная исходная сыворотка стабильна при хранении в холодильнике при температуре ниже + 8°С. 20.3. СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ 20.3Л. Среда А [51] Пептон 20,0 г Агар (сухой) 13,6 г Глицерин 10,0 мл Дистиллированная 1000 мл K2SOt (безводный) 10,0 г вода MgCl2 (безводный) 1,4 г Компоненты смешивают и доводят рН до 7,2. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием при 121° С в течение 15 мин. Охлаждают в наклонном положении. 20.3.2. Аргининовый бульон Нивена и др. [67] Дрожжевой экстракт 5,0 г Глюкоза (декстроза) 0,5 г Триптон 5,0 г Ь-аргинин-НС1 3,0 г К2НРО4 2,0 г Дистиллированная 1000 мл вода (Примечание: хотя в оригинальной методике используется D-аргинин, можно также добавлять L-форму [3].) Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 7,0, кипятят, фильтруют и стерилизуют автоклавированием. 20.3.3. Аргининовый бульон Эванса и Нивена [33] Триптон 10,0 г 1,-аргинин-НС1 3,0 г Дрожжевой экстракт 5,0 г Дистиллированная 1000 мл NaCl 5,0 г вода Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 7,0, кипятят, фильтруют и стерилизуют автоклавированием. Компоненты смешивают и доводят рН до 6,8 с помощью КОН. Стерилизуют автоклавированием. Примечание: некоторые штаммы Azospirillum нуждаются в добавлении дрожжевого экстракта (0,005%) в качестве источника витаминов. 20.3.5. Среда Б [51] Панкреатический гид- 10,0 г ролизат казеина Пептический гидроли- 10,0 г зат животных тканей USP К2НР04 MgS04-7H20 Агар (сухой) Дистиллированная вода 1,5 г 1,5 г 14,0 г 1000 мл Компоненты смешивают и доводят рН до 7,2, Кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин. Охлаждают в наклонном положении. 20.3.6. Агар с желчью [3] Экстракт из говяжьего мяса 10,0 г Пептон 10,0 г NaCI 5,0 г Дистиллированная вода 1000 мл Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 8,0—8,4 добавлением 10 н. NaOH. Кипятят 10 мин, фильтруют, доводят рН до 7,2—7,4 и добавляют 10,0 г дегидратированной бычьей желчи. При необходимости вновь доводят рНдо7,2—7,4. Добавляют 15,0 г агара, кипятят и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до 55 °С и добавляют с соблюдением правил асептики 50 мл стерильной сыворотки крови. Перемешивают и разливают в чашки. Примечание: 1 % дегидратированной бычьей желчи = 10% (по объему) жидкой желчи; для получения 40%-ного агара с желчью берут 4% дегидратированной бычьей желчи. 20.3.7. Кровяной агар К стерильной расплавленной и охлажденной до 45— 50°С основе кровяной агаровой среды (разд. 20.3.31) добавляют 5% (по объему) стерильной дефибринированной крови, хорошо перемешивают и разливают в чашки. Чашки с пузырьками воздуха или пеной на 'поверхности не используют. Обычно предпочитают овечью или кроличью кровь. Лошадиная кровь может давать искаженные гемолитические реакции. Донорская кровь человека, хранящаяся в банках крови, содержит цитрат и глюкозу; цитрат может быть ингибитором роста некоторых бактерий, а глюкоза может давать ложную реакцию с появлением зеленой окраски в отсутствие истинного а-гемолиза. Кровь, используемая для приготовления кровяного агара, не должна содержать антибиотики или химиотерапевтические препараты. Дефибринированную кровь готовят следующим образом: в стерильных условиях отбирают кровь шприцем с иглой № 18 (для предотвращения гемолиза, вызываемого механическим разрушением) и немедленно переливают ее в стерильную колбу, в которую помещен слой стерильных стеклянных шариков (диаметром около 3 мм). Колбу встряхивают в горизонтальной плоскости в течение 10 мин. Фибрин, образовавшийся во время свертывания, остается на шариках. Надосадочную жидкость, содержащую клетки крови и сыворотку, сливают в стерильный сосуд и хранят в холодильнике. 20.3.8. Среда Борда и Холдинга [20] NH4H2P04 0,5 г К2НР04 0,5 г Дрожжевой экстракт 0,5 г Бромтимоловый си- 0,03 г ний Раствор минеральных 20 мл элементов (разд. 20.3.18) Агар 5,0 г Дистиллированная 880 мл вода Сначала растворяют первые три компонента в дистиллированной воде, а затем добавляют индикатор и раствор минеральных элементов. Доводят рН до 7,2. Добавляют агар и смесь кипятят до растворения. Разливают по 9,0 мл в пробирки и стерилизуют, поместив на мгновение в автоклав с давлением водяного пара 1,54 * 105 Па. Охлаждают до 45—50°С. Во время авто-клавирования может образоваться осадок, который при охлаждении растворяется. В каждую пробирку добавляют 1,0 мл 5%-ного раствора углевода (обычно глюкозы), заранее простсрилизованного фильтрованием. Среду перемешивают и оставляют охлаждаться. 20.3.9. Модифицированная среда Бёрка [73] Раствор А: MgS04-7H20 0,2 г Na2Mo04-2H20 0,00024 г CaS04-2H20 0,1 г Глюкоза 10,0 г FeS04*7H20 0,005 г Дистиллированная 500 мл вода Раствор Б: Калий-фосфатный буфер, 0,005 М, рН 7,1 500 мл Растворы А я Б автоклавируют отдельно и после охлаждения смешивают их в соотношении 1 : 1. 20.3.10. Предварительно восстановленный бульон с рубленым мясом [7] Рубленая говядина (используют простую говяди- 500 г иу без жира) или конина Дистиллированная вода 1000 мл NaOH, 1 и. 25 мл Мясо измельчают, предварительно удалив жир и пленки, смешивают его с водой и NaOH и доводят смесь до кипения, постоянно перемешивая. Охлаждают до комнатной температуры, снимают с поверхности жир и фильтруют. Отдельно сохраняют осадок и фильтрат. К фильтрату добавляют дистиллированную воду в количестве, необходимом для восстановления первоначального объема (1 л), и затем следующие компоненты: Триптиказу Дрожжевой экстракт K.HPOi Раствор ресазурина (0,025%) 30,0 г 5,0 г 5,0 г 4,0 мл Смесь кипятят в колбе с отводом (для предотвращения перекипания). В 1-л колбу наливают 750 мл бульона, а в 750-мл колбу 500 мл бульона. Кипятят до изменения окраски ресазурина от розовой до бесцветной. 20.3.12. Агар Кристенсена с мочевиной [25] Пептон 1,0 г Феноловый красный 0,012 г Глюкоза 1,0 г Агар 20,0 г NaCl 5,0 г Дистиллированная 1000 мл КН2Р04 2,0 г вода Дрожжевой экстракт (ие во всех случа- (0,1 г) ях) Компоненты смешивают и доводят рН до 6,8—6,9. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до 50° С. Добавляют с соблюдением правил асептики достаточное количество 20%-ного раствора мочевины (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 2%. Перемешивают и с соблюдением правил асептики разливают по 2— 3 мл в стерильные небольшие пробирки. Охлаждают в наклонном положении, при котором высота столбика равна 1,3 см, а длина скошенной части 2,5 см. 20.3.13. Безазотная среда для Clostridium pasteurianum [28] MgS04-7H2O FeCl3-6H20 MgS04-H20 Na2Mo04-2H20 ZnS04-7H20 CuS04-5H20 CoCI2-6H20 0,0493 г 0,0541 г 0,0034 г 0,0048 г 0,00058 г 0,00050 г 0,00048 г К2НР04 1,132 г Биотии Следы Сахароза 20,0 г СаСОз 3,0 г Дистиллированная 1000 мл вода (Примечание. Для повышения буферности можно увеличить количество СаСОз до 30 г.) Компоненты смешивают и автоклавируют. Перед инокулированием в среде необходимо создать анаэробные условия, пропуская через нее газообразный азот, очищенный от кислорода. 20.3.14. Желточный агар [7] Пептон Na2HP04 NaCl MgS04, 0,5% -ный (вес/объем) раствор 20,0 г 2,5 г 1,0 0,1 Глюкоза Агар Дистиллированная вода 1,0 мл 12,5 г 500 мл Компоненты смешивают, рН смеси доводят до 7,3—7,4. Смесь кипятят для растворения агара, стерилизуют автоклавированием и охлаждают до 60 °С в водяной бане. Скорлупу яйца дезинфицируют спиртом и дают ей обсохнуть. Яйцо разбивают и отделяют желток от белка. Желток с соблюдением правил асептики переносят в расплавленный агар и перемешивают до получения однородной суспензии. Разливают в чашки и оставляют для затвердения. Работая с анаэробными организмами, чашки используют в течение 4 ч после приготовления или хранят их в анаэробном боксе. 20.3.15. Бульон Хейнса [42] Триптон 1,5 г Дрожжевой экстракт 1,0 г К2НРО4 1,0 г Глюконат калия 40,0 г Компоненты смешивают, доводят рН смеси до 7,0 и стерилизуют фильтрованием. 20.3.16. Безазотная среда Хино и Уилсона для Bacillus [43] Раствор А: Сахароза 20,0 г Na2Mo04-2H20 0,005 г 10,0 г 500 мл СаСОз Дистиллированная вода 10,0 мкг 5 мкг К2НРО4—КН2Р04, 0,1 М буфер, рН 7,7 500 мл Растворы А и Б автоклавируют отдельно. После охлаждения смешивают с соблюдением правил асептики равные объемы растворов. 20.3.17. Среда для теста 0/F по Хью и Лейфсону [44] 1че- 2,0 г Бромтимоловый сииий ка- Агар Дистиллированная 5,0 г вода 0,3 г 0,03 г 3,0 г 1000 мл Компоненты смешивают и рН смеси доводят до 7,1. Смесь кипятят для растворения агара и разливают по 3—4 мл в пробирки размером 13x100 мм. Стерилизацию проводят в автоклаве. Пробирки охлаждают до 45—50 °С и в каждую пробирку добавляют 10%-ный раствор углевода (обычно глюкозы), стерилизованного фильтрованием, до конечной концентрации 1,0%. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют для остывания. 20.3.18. Минеральная основа по Хатнеру [27] Минеральный раствор: Нитрилотриуксусная 10,0 г кислота MgS04 14,45 г СаС12-2НаО 3,335 г (NH4) вМо7024 • 4Н20 0,00925 FeS04*7H20 0,099 г Основной солевой 50 мл раствор Дистиллированная 950 мл вода Основной солевой раствор: ЭДТА 2,5 г ZnS04-7H20 10,95 г FeS04*7H20 5,0 г MnS04-H20 1,54 г CuS04-5H20 0,392 г Co(N03)2*6H20 0,248 г Na2B4O7-10H2O L °'177 г Дистиллированная 1000 мл вода К основному солевому раствору добавляют несколько капель H2S04 для предотвращения осаждения. При приготовлении минерального раствора нитрилотриук-сусную кислоту растворяют в дистиллированной воде и нейтрализуют, добавляя приблизительно 7,3 г КОН. Вносят остальные компо |
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 |
Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 3" (2.64Mb) |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [обратная связь] |