фокус объектива попадает новое поле.

Примечание: следует всегда пользоваться свежеприготовленным рабочим раствором флуоресцирующей антисыворотки. Неразведенная исходная сыворотка стабильна при хранении в холодильнике при температуре ниже + 8°С.

20.3. СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ

20.3Л. Среда А [51]

Пептон 20,0 г Агар (сухой) 13,6 г

Глицерин 10,0 мл Дистиллированная 1000 мл

K2SOt (безводный) 10,0 г вода

MgCl2 (безводный) 1,4 г

Компоненты смешивают и доводят рН до 7,2. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием при 121° С в течение 15 мин. Охлаждают в наклонном положении.

20.3.2. Аргининовый бульон Нивена и др. [67]

Дрожжевой экстракт 5,0 г Глюкоза (декстроза) 0,5 г

Триптон 5,0 г Ь-аргинин-НС1 3,0 г

К2НРО4 2,0 г Дистиллированная 1000 мл

вода

(Примечание: хотя в оригинальной методике используется D-аргинин, можно также добавлять L-форму [3].)

Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 7,0, кипятят, фильтруют и стерилизуют автоклавированием.

20.3.3. Аргининовый бульон Эванса и Нивена [33]

Триптон 10,0 г 1,-аргинин-НС1 3,0 г

Дрожжевой экстракт 5,0 г Дистиллированная 1000 мл

NaCl 5,0 г вода

Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 7,0, кипятят, фильтруют и стерилизуют автоклавированием.

Компоненты смешивают и доводят рН до 6,8 с помощью КОН. Стерилизуют автоклавированием. Примечание: некоторые штаммы Azospirillum нуждаются в добавлении дрожжевого экстракта (0,005%) в качестве источника витаминов.

20.3.5. Среда Б [51]

Панкреатический гид- 10,0 г ролизат казеина

Пептический гидроли- 10,0 г зат животных тканей USP

К2НР04 MgS04-7H20 Агар (сухой) Дистиллированная вода

1,5 г 1,5 г 14,0 г 1000 мл

Компоненты смешивают и доводят рН до 7,2, Кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин. Охлаждают в наклонном положении.

20.3.6. Агар с желчью [3]

Экстракт из говяжьего мяса 10,0 г

Пептон 10,0 г

NaCI 5,0 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Компоненты смешивают и растворяют при нагревании. Доводят рН до 8,0—8,4 добавлением 10 н. NaOH. Кипятят 10 мин, фильтруют, доводят рН до 7,2—7,4 и добавляют 10,0 г дегидратированной бычьей желчи. При необходимости вновь доводят рНдо7,2—7,4. Добавляют 15,0 г агара, кипятят и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до 55 °С и добавляют с соблюдением правил асептики 50 мл стерильной сыворотки крови. Перемешивают и разливают в чашки. Примечание: 1 % дегидратированной бычьей желчи = 10% (по объему) жидкой желчи; для получения 40%-ного агара с желчью берут 4% дегидратированной бычьей желчи.

20.3.7. Кровяной агар

К стерильной расплавленной и охлажденной до 45— 50°С основе кровяной агаровой среды (разд. 20.3.31) добавляют 5% (по объему) стерильной дефибринированной крови, хорошо перемешивают и разливают в чашки. Чашки с пузырьками воздуха или пеной на 'поверхности не используют. Обычно предпочитают овечью или кроличью кровь. Лошадиная кровь может давать искаженные гемолитические реакции. Донорская кровь человека, хранящаяся в банках крови, содержит цитрат и глюкозу; цитрат может быть ингибитором роста некоторых бактерий, а глюкоза может давать ложную реакцию с появлением зеленой окраски в отсутствие истинного а-гемолиза. Кровь, используемая для приготовления кровяного агара, не должна содержать антибиотики или химиотерапевтические препараты.

Дефибринированную кровь готовят следующим образом: в стерильных условиях отбирают кровь шприцем с иглой № 18 (для предотвращения гемолиза, вызываемого механическим разрушением) и немедленно переливают ее в стерильную колбу, в которую помещен слой стерильных стеклянных шариков (диаметром около 3 мм). Колбу встряхивают в горизонтальной плоскости в течение 10 мин. Фибрин, образовавшийся во время свертывания, остается на шариках. Надосадочную жидкость, содержащую клетки крови и сыворотку, сливают в стерильный сосуд и хранят в холодильнике.

20.3.8. Среда Борда и Холдинга [20]

NH4H2P04 0,5 г

К2НР04 0,5 г

Дрожжевой экстракт 0,5 г

Бромтимоловый си- 0,03 г

ний

Раствор минеральных 20 мл

элементов

(разд. 20.3.18)

Агар 5,0 г

Дистиллированная 880 мл

вода

Сначала растворяют первые три компонента в дистиллированной воде, а затем добавляют индикатор и раствор минеральных элементов. Доводят рН до 7,2. Добавляют агар и смесь кипятят до растворения. Разливают по 9,0 мл в пробирки и стерилизуют, поместив на мгновение в автоклав с давлением водяного пара 1,54 * 105 Па. Охлаждают до 45—50°С. Во время авто-клавирования может образоваться осадок, который при охлаждении растворяется. В каждую пробирку добавляют 1,0 мл 5%-ного раствора углевода (обычно глюкозы), заранее простсрилизованного фильтрованием. Среду перемешивают и оставляют охлаждаться.

20.3.9. Модифицированная среда Бёрка [73]

Раствор А:

MgS04-7H20 0,2 г Na2Mo04-2H20 0,00024 г

CaS04-2H20 0,1 г Глюкоза 10,0 г

FeS04*7H20 0,005 г Дистиллированная 500 мл

вода

Раствор Б:

Калий-фосфатный буфер, 0,005 М, рН 7,1 500 мл

Растворы А я Б автоклавируют отдельно и после охлаждения смешивают их в соотношении 1 : 1.

20.3.10. Предварительно восстановленный бульон

с рубленым мясом [7]

Рубленая говядина (используют простую говяди- 500 г

иу без жира) или конина

Дистиллированная вода 1000 мл

NaOH, 1 и. 25 мл

Мясо измельчают, предварительно удалив жир и пленки, смешивают его с водой и NaOH и доводят смесь до кипения, постоянно перемешивая. Охлаждают до комнатной температуры, снимают с поверхности жир и фильтруют. Отдельно сохраняют осадок и фильтрат. К фильтрату добавляют дистиллированную воду в количестве, необходимом для восстановления первоначального объема (1 л), и затем следующие компоненты:

Триптиказу Дрожжевой экстракт K.HPOi

Раствор ресазурина (0,025%)

30,0 г 5,0 г 5,0 г

4,0 мл

Смесь кипятят в колбе с отводом (для предотвращения перекипания). В 1-л колбу наливают 750 мл бульона, а в 750-мл колбу 500 мл бульона. Кипятят до изменения окраски ресазурина от розовой до бесцветной.

20.3.12. Агар Кристенсена с мочевиной [25]

Пептон 1,0 г Феноловый красный 0,012 г

Глюкоза 1,0 г Агар 20,0 г

NaCl 5,0 г Дистиллированная 1000 мл

КН2Р04 2,0 г вода

Дрожжевой экстракт

(ие во всех случа- (0,1 г)

ях)

Компоненты смешивают и доводят рН до 6,8—6,9. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до 50° С. Добавляют с соблюдением правил асептики достаточное количество 20%-ного раствора мочевины (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 2%. Перемешивают и с соблюдением правил асептики разливают по 2— 3 мл в стерильные небольшие пробирки. Охлаждают в наклонном положении, при котором высота столбика равна 1,3 см, а длина скошенной части 2,5 см.

20.3.13. Безазотная среда для Clostridium pasteurianum [28]

MgS04-7H2O

FeCl3-6H20

MgS04-H20

Na2Mo04-2H20

ZnS04-7H20

CuS04-5H20

CoCI2-6H20

0,0493 г 0,0541 г 0,0034 г 0,0048 г 0,00058 г 0,00050 г 0,00048 г

К2НР04 1,132 г

Биотии Следы

Сахароза 20,0 г

СаСОз 3,0 г

Дистиллированная 1000 мл

вода

(Примечание. Для повышения буферности можно увеличить количество СаСОз до 30 г.)

Компоненты смешивают и автоклавируют. Перед инокулированием в среде необходимо создать анаэробные условия, пропуская через нее газообразный азот, очищенный от кислорода.

20.3.14. Желточный агар [7]

Пептон

Na2HP04

NaCl

MgS04, 0,5% -ный (вес/объем) раствор

20,0 г 2,5 г 1,0 0,1

Глюкоза Агар

Дистиллированная вода

1,0 мл 12,5 г 500 мл

Компоненты смешивают, рН смеси доводят до 7,3—7,4. Смесь кипятят для растворения агара, стерилизуют автоклавированием и охлаждают до 60 °С в водяной бане. Скорлупу яйца дезинфицируют спиртом и дают ей обсохнуть. Яйцо разбивают и отделяют желток от белка. Желток с соблюдением правил асептики переносят в расплавленный агар и перемешивают до получения однородной суспензии. Разливают в чашки и оставляют для затвердения. Работая с анаэробными организмами, чашки используют в течение 4 ч после приготовления или хранят их в анаэробном боксе.

20.3.15. Бульон Хейнса [42]

Триптон 1,5 г

Дрожжевой экстракт 1,0 г

К2НРО4 1,0 г

Глюконат калия 40,0 г

Компоненты смешивают, доводят рН смеси до 7,0 и стерилизуют фильтрованием.

20.3.16. Безазотная среда Хино и Уилсона для Bacillus [43]

Раствор А:

Сахароза 20,0 г Na2Mo04-2H20 0,005 г

10,0 г 500 мл

СаСОз Дистиллированная вода

10,0 мкг 5 мкг

К2НРО4—КН2Р04, 0,1 М буфер, рН 7,7 500 мл

Растворы А и Б автоклавируют отдельно. После охлаждения смешивают с соблюдением правил асептики равные объемы растворов.

20.3.17. Среда для теста 0/F

по Хью и Лейфсону [44]

1че- 2,0 г Бромтимоловый сииий

ка- Агар

Дистиллированная

5,0 г вода

0,3 г

0,03 г 3,0 г 1000 мл

Компоненты смешивают и рН смеси доводят до 7,1. Смесь кипятят для растворения агара и разливают по 3—4 мл в пробирки размером 13x100 мм. Стерилизацию проводят в автоклаве. Пробирки охлаждают до 45—50 °С и в каждую пробирку добавляют 10%-ный раствор углевода (обычно глюкозы), стерилизованного фильтрованием, до конечной концентрации 1,0%. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют для остывания.

20.3.18. Минеральная основа по Хатнеру [27]

Минеральный раствор:

Нитрилотриуксусная 10,0 г

кислота

MgS04 14,45 г

СаС12-2НаО 3,335 г

(NH4) вМо7024 • 4Н20 0,00925

FeS04*7H20 0,099 г

Основной солевой 50 мл

раствор

Дистиллированная 950 мл

вода

Основной солевой раствор:

ЭДТА 2,5 г

ZnS04-7H20 10,95 г

FeS04*7H20 5,0 г

MnS04-H20 1,54 г

CuS04-5H20 0,392 г

Co(N03)2*6H20 0,248 г

Na2B4O7-10H2O L °'177 г

Дистиллированная 1000 мл

вода

К основному солевому раствору добавляют несколько капель H2S04 для предотвращения осаждения. При приготовлении минерального раствора нитрилотриук-сусную кислоту растворяют в дистиллированной воде и нейтрализуют, добавляя приблизительно 7,3 г КОН. Вносят остальные компо