Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 2

Автор Ф.Герхардт

коза

Глицин Алании Фенилаланин К+

Тиометилгалактозид

Тиодигалактозид

Тиофенилгалактозид

Изопропилтиогалактозид

2-Дезоксиглюкоза

а-Метилглюкозид

а-Аминоизобутират

я-Фторфенилаланин Rb+

[2Ц

[39] [44]

[29, 43]

[28] [5, 37]

транспортом и 3) с помощью мембранных везикул, не содержащих цитоплазматических ферментов.

Список некоторых часто используемых аналогов приведен (с указанием соответствующих литературных источников) в табл. 19.1.

19.3.4. Мутанты с блокированным метаболизмом

Отбор мутантов для изучения транспорта гистидина у Salmonella typhimurium подробно описан Эймсом [9]. Широко используются для этой цели мутанты zy+ Е. coli, лишенные р-галактозидазы, но сохраняющие систему транспорта для р-галактозидов; эти мутантные штаммы можно получить в коллекциях генетически маркированных культур (разд. 13.10).

19.3.5. Мембранные везикулы

Использование мембранных везикул, предложенное Кабаком и Штадтманом [19], становится все более популярным. Обзор их применения при изучении транспорта был сделан недавно Конингсом [23].

Первый этап получения везикул обычно состоит в превращении изучаемых бактерий в осмотически чувствительные формы; последние подвергают лизису в условиях, при которых возможно образование везикул. Сферопласты грамотрицательных бактерий, например Е. coli, можно получить, обрабатывая клетки лизоцимом и ЭДТА [18]; при такой обработке внешняя мембрана клеточной стенки остается на сферопласте. Протопласты грамположительных бактерий часто можно полностью освободить от структур клеточной стенки путем обработки клеток муралитическим ферментом. Для Bacillus те-gaterium, Bacillus subtilis, Streptococcus faecatis и M. ly-sodeikticus использовали лизоцим, для Staphylococcus aureus — лизостафин.

Кобаяси и др. [22] выделили везикулы из штамма АТСС1 9790 S. faecalis с помощью методики, которая достаточно иллюстративна. Они суспендировали клетки Б осмотически стабилизирующем растворе, содержащем 500 мМ глицилглицин и 2 мМ MgS04 (рН 7,2), затем добавляли 0,5 мг лизоцима на 1 мл и инкубировали 1 ч при 37 °С (протопласты можно также стабилизировать сахарозой вместо глицилглицина). Суспензию протопластов центрифугировали, ресуспендировали в гипотоническом растворе, содержащем 50 мМ трис-малеат (рН 7,4), 250 мМ сахарозу, и 5 мМ MgS04, и обрабатывали дезоксирибонуклеазой I, для активации которой требуются ионы магния. Суспензию охлаждали, гомогенизировали с помощью гомогенизатора для тканей и центрифугировали 10 мин при 5000 g для осаждения мембран. Мембраны ресуспендировали в трис-малеат-пом буфере с сахарозой и MgSQi, а затем пропускали через пресс Френча (700 кг/см2). Полученную суспензию дважды центрифугировали: при 27 000 g для удаления крупных частиц и при 48 000 g в течение 90 мин для осаждения везикул.

Возможны различные варианты этой методики, и для выбора оптимальной процедуры применительно к конкретному организму нужны предварительные опыты. Конингс и др. [24] описали сокращенную одноэтапную методику для грамположительных бактерий, в особенности для В. subtilis.

Получаемые препараты обычно неоднородны по размерам везикул, а препарат Кабаяси и др. {22] содержал как нормальные, так и вывернутые везикулы, что видно на электронных микрофотографиях при использовании метода замораживания — скалывания. Из Е. coli можно получить препараты, содержащие только «нормальные» («невывернутые») везикулы. Например, Кабак [18] описал методику, включающую осмотический лизис, без использования пресса Френча; при его использовании везикулы Е. coli могут содержать в основном «вывернутые» формы, которые накапливают Са2+, вместо того чтобы экскретировать его, и не способны поглощать такие вещества, как пролин [8].

Непрерывность мембраны везикул лучше всего можно проверить, определив степень набухания или сжатия последних при изменении осмоляльности суспендирующей среды. Для этого можно использовать методы, описанные в предыдущем разделе (разд. 19.3.2), включая определение изменений светорассеяния. Функциональное состояние везикул испытывают, определяя их способность к транспорту растворенных веществ, например пролина.

19.4. ЛИТЕРАТУРА

19.4.1. Общая литература

1. Ames G.-F. L. Two methods for the assay of amino acid transport.

Methods Enzymol., 32, 843—849 (1974).

В статье подробно описываются методы измерения поглощения гистидина S. typhimurium. Описаны методы, применимые к растущим, голодающим или нерастущим клеткам; они могут также применяться для изучения многих других систем транспорта у бактерий.

2. Lamanna С, Mallette М. F., Zimmerman L. Basic bacteriology, 4th ed. The Williams & Wilkins Co., Baltimore, 1973. Стандартный учебник, в котором рассмотрены вопросы осмоса и проницаемости с методической точки зрения (разделы гл. 6).

3. Maloney Р. С, Kashket Е. R.f Wilson Т. Н. Methods for studying transport in bacteria. Methods Membrane Biol, 5, 1—49 (1975). Блестящий обзор основных методов изучения систем транспорта у бактерий; представлены данные по конкретным культурам, обсуждаются многие важные технические детали. В основном рассматривается транспорт лактозы, однако описанные методы представляют общий интерес

4. Rosen В. P. Bacterial transport, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.

Книга по вопросам транспорта; вступительная глава М. Футаи посвящена методологии этой проблемы; многие последующие главы содержат описание методов определения. 5.' Silver S., Pattacharyya P. Cations, antibiotics, and membranes, Methods Enzymol., 32, 881—893 (1974).

В статье описаны методы определения поглощения катионов и приведена таблица изотопов, имеющих практическое значение. 6. Stadelmann Е. /. Evaluation of turgidity, plasmolysis, and deplas-molysis of plant cells, Methods Cell Physiol, 2, 144—216 (1966). Предметом статьи являются растительные клетки, но большая часть представленного материала применима к бактериальным клеткам, которые также обычно имеют стенки. Особенно ценно описание плазмолиза и тургора.

19.4.2. Специальная литература

7. Abrams A. J. Biol. Chem, 235, 1281—1285 (1960).

8. Altendorf К Н., Staehelin L. A. J. Bacteriol, 117, 888—899 (1974).

9. Ames G.-F. L. Methods Enzymol, 32, 849—856 (1974).

10. Arnold W. N., Lacy J. S. J. Bacteriol, 131, 564—571 (1977).

11. Conway E. J., Downey M. Biochem. J, 47, 347—355 (1950).

12. Damadian R. V. Crit. Rev. Microbiol, 2, 377—422 (1973).

13. Dubois M., Gilles K. A., Hamilton I. K-, Rebers P. A„ Smith F. Anal Chem, 28, 350—356 (1956).

14. Epstein W., Schultz S. G. J. Gen. Physiol, 49, 221—224 (1965).

15. Hamilton W. A. In: B. A. Haddock and B. A. Hamilton (ed.), Microbial energetics, p. 185—216, Cambridge University Press, New York, 1977.

16. Harold F. M., Altendorf K. Curr. Top. Membr. Transp, 5, 1—50 (1974).

17. Hurwitz С, Braun С. В., Peabody R. A., J. Bacteriol, 90, 1692— 1695 (1965).

18. Kaback H. R. Methods Enzymol, 22, 99—120 (1971).

19. Kaback H. R., Stadtman E. R. Proc. Natl. Acad. U.S.A., 55, 920— 927 (1966).

20. Kanos K, Fendter J. H. Biochim. Biophys. Acta, 509, 289—299 (1978).

21. Kepes A. Curr. Top. Membr. Transp., 1, 101 — 134 (1970).

22. Kobayashi H., Van Brunt Л, Harold F. M. J. Biol Chem, 253, 2085—2092 (1978).

23. Konings W. N. Adv. Microb. Physiol, 15, 175—251 (1977).

24. Konings W. N.t Bisschop A., Veenhuis M., Vermeulen C. A. J. Bacteriol, 116, 1456—1465 (1973).

25. Levin B. C.f Freese E. J. Environ. Sci. Health, Part C, Environ. Health Sci, 13, 1—21 (1978).

26. MacDonald R. E., Gerhardt P. Can. J. Microbiol, 4, 109—124 (1958).

27. Marquis R. E. Arch. Biochem. Biophys, 118, 323—331 (1967).

28. Marquis R. E. Handb. Exp. Pharmacol, XX/2, 166—192, 1970.

29. Marquis R. E., Gerhardt P., J. Biol Chem, 239, 3361—3371 (1964).

30. Matts Т. C, Knowtes C. /. Biochim. Biophys. Acta, 249, 583— 587 (1971).

31. Mitchell P. Biol Rev., 41, 445—502 (1966).

Щ. Mitchell P-, Motjle J. J. Gen. Microbiol, 20, 434—441 (1959),

33. Ogawa S., Shulman R. G., Glynn P., Yamane Т., Navon G. Biochim. Biophys. Acta, 502, 45—50 (1978).

34. Postma P. W-, Roseman S. Biochim. Biophys. Acta, 457, 213— 257 (1976).

35. Ramos S., Kaback H. R. Biochemistry, 16, 848—854 (1977).

36. Ramos S.t Schuldiner S.t Kaback H. P. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 73, 1892—1896 (1976).

37. Rhoads D. В., Woo A, Epstein W. Biochim. Biophys. Acta, 469, 45—51 (1977).

38. Rogers H. J. Adv. Microb. Physiol., 19, 1—62 (1979).

39. Romano A. H., Eberhard S. J., Dingle S. L., McDowell T. D. J. Bacteriol., 104, 808—813 (1970).

40. Schales O., Schales S. S. J. Biol. Chem., 140, 879—884 (1941).

41. Scherrer R., Gerhardt P. J. Bacteriol., 107, 718—735 (1971).

42. Sorgato M. C., Ferguson S. J.t Kell D. В., John P. Biochem. J., 174, 237—256 (1978).

43. Thompson /., MacLeod R. A. J. Biol. Chem., 248, 7107—7111 (1973)

44. Winkler H. H. J. Bacteriol, 106, 362—368 (1971).

ОГЛАВЛЕНИЕ

Часть III ГЕНЕТИКА

Введение. Ю. Нестер (Перевод С. Ф. Барбашова) .... 5 Литература (7)

Глава 13. Мутации. Б. Кэрлтон, Б. Браун (Перевод С. Ф. Барбашова) 8

13.1. Выбор нужного мутанта (9]Г. 13.2 Выбор мутагена (12). 13.3. Экспрессия мутаций (26). 13.4. Обогащение мутантными клетками (26). 13.5. Прямое выявление мутантов (28). 13.6. Непрямое выявление мутаций (35). 13.7. Изучение свойств мутантов (41). 13.8. Специальные приложения (43). 13.9. Рецепты сред (55). 13.10. Источники штаммов и специальных материалов (60). 13.11. Литература (62).

Глава 14. Перенос генов. Я. Кёртис (Перевод С. Ф. Барбашова) 65

14.1. Трансформация (65). 14.2. Трансдукция (80). 14.3. Конъюгация (101). 14.4. Среды и штаммы (117). 14.5. Литература (125).

Глава 15. Плазмиды. Дж. Кросса, С. Фалкоу (Перевод

С. Ф. Барбашова) 128

15.1. Выделение плазмидной ДНК (130). 15.2. Выделение плазмидной ДНК с большой молекулярной массой (136). 15.3. Изучение свойств плазмидной ДНК (139). 15.4. Литература (164).

Часть IV МЕТАБОЛИЗМ

Введение. В. Вуд (Перевод X. С. Андреевой) 166

Глава 16. Физические мето

страница 83
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 2" (4.15Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(16.09.2019)