Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

димо готовить ряд разведений, например в 10-кратном или каком-либо ином интервале. В этом случае можно отбросить данные по разведениям, где процент сохранившихся стерильными пробирок лежит вне интервала 8—36 или (если допустим более широкий интервал ошибок) вне интервала 5—50. Ошибку для разведений в пределах интервала можно найти или интерполировать по данным рис. 11.2. Этот метод прост, но требует много времени. Поэтому были предложены статистические приемы, позволяющие объединять данные, полученные с использованием различных разведений и определенным числом пробирок для каждого разведения.

В табл. 11.1 приведены результаты расчетов для определения НВЧ. Они применимы при интерпретации данных, полученных при учете посевов в 10 параллельных пробирок из трех последовательных 10-кратных разведений. Рассмотрев 1000 возможных результатов таких тестов, Халворсон и Зиглер [21] отмечают 210 случаев, когда величины Р превышают 0,01% (объяснения и определения терминов см. в сносках к табл. 11.1). Финни [18] подробно рассмотрел статистические аспекты и подходы к определению НВЧ для параллелей в каждом разведении. Он указывает, что в вычислении, связанном с подсчетом ошибок, существуют определенные преимущества, если серия разведений составляет такой интервал, что по крайней мере в одном разведении в каждой пробирке обнаруживается рост, а в следующем разведении в каждой пробирке роста нет. Но даже и в таком случае точные статистические расчеты весьма громоздки.

Вероятность Вероятность

Код Р Код Р

10 6 3 1,25 0,59 5 2 0 0,086 3,36

10 6 2 1,09 2,73 5 1 2 0,099 0,03

10 6 1 0,933 8,42 5 1 1 0,086 0,58

10 6 0 0,792 10,73 5 1 0 0,073 8,28

10 5 5 1,30 0,02 5 0 2 0,085 0,01

10 5 4 1,15 0,14 5 0 1 0,072 0,79

10 5 3 1,02 0,91 5 0 0 0,060 12,10

10 5 2 0,872 3,30 4 5 0 0,106 0,02

10 5 1 0,742 8,94 4 4 0 0,093 0,06

10 5 0 0,622 12,68 4 3 1 0,092 0,03

10 0 2 0,314 0,15 3 0 0 0,032 18,64

10 0 1 0,268 1,44 2 4 0 0,062 0,02

10 0 0 0,231 7,95 2 3 0 0,051 0,11

9 8 0 0,499 0,03 2 2 0 0,041 3,95

9 7 1 0,488 0,02 2 1 1 0,040 0,02

9 7 0 0,435 0,17 2 1 0 0,030 6,01

9 6 2 0,474 0,06 2 0 2 0,040 0,01

9 6 1 0,425 0,23 2 0 1 0,030 0,41

9 6 0 0,381 0,56 2 0 0 0,020 24,13

9 5 2 0,416 0,10 1 3 0 0,038 0,04

8 6 0 0,270 0,11 10 9 0 1,70 5,30

8 5 1 0,267 0,11 10 8 7 3,10 0,01

8 5 0 0,242 0,46 10 8 6 2,78 0,14

8 4 2 0,266 0,04 10 8 5 2,49 0,56

8 4 1 0,240 0,33 10 8 4 2,21 1,64

8 4 0 0,217 1,47 10 8 3 1,96 4,50

8 3 2 0,239 0,08 10 8 2 1,71 8,46

8 3 1 0,214 0,77 10 8 1 1,50 10,83

8 3 0 0,193 3,73 10 8 0 1,30 7,21

8 2 3 0,233 0,01 10 7 6 2,19 0,01

7 2 0 0,133 5,49 10 4 5 1,073 0,01

7 1 2 0,149 0,08 10 4 4 0,943 0,07

7 1 1 0,132 1,10 10 4 3 0,818 0,48

7 1 0 0,116 8,98 10 4 2 0,700 2,26

7 0 2 0,132 0,04 10 4 1 0,589 7,97

7 0 1 0,116 0,80 10 4 0 0,493 14,99

7 0 0 0,101 7,92 10 3 4 0,773 0,02

6 5 0 0,155 0,08 10 3 3 0,662 0,24

6 4 2 0,171 0,00 10 3 2 0,561 1,60

6 4 1 0,155 0,04 10 3 1 0,474 6,93

Вероятность Вероятность

Код X Р Код X Р

9 5 1 0,372 0,86 6 2 1 0,122 0,45

9 5 0 0,334 1,78 6 2 0 0,107 4,12

9 4 3 0,408 0,02 6 1 2 0,121 0,06

9 4 2 0,365 0,22 6 1 1 0,106 0,87

9 4 1 0,324 1,13 6 1 0 0,092 8,73

9 4 0 0,290 3,58

9 3 3 0,362 0,04 4 3 0 0,080 0,43

9 3 2 0,324 0,26 4 2 1 0,080 0,16

9 3 1 0,288 1,77 4 2 0 0,068 2,16

9 3 0 0,255 6,23 4 1 2 0,080 0,01

4 1 1 0,068 0,50

8 2 2 0,210 0,14 4 1 0 0,056 7,21

8 2 1 0,188 1,24 4 0 2 0,067 0,02

8 2 0 0,169 7,12 4 0 1 0,056 0,76

8 1 2 0,187 0,11 4 0 0 0,045 14,62

8 1 1 0,166 1,46 3 4 0 0,076 0,04

8 1 0 0,147 9,31

8 0 2 0,166 0,06 1 2 1 0,038 0,02

8 0 1 0,146 0,88 1 2 0 0,029 0,53

8 0 0 0,128 6,41 1 1 1 0,028 0,12

7 6 0 0,212 0,02 1 1 0 0,019 0,34

1 0 1 0,019 0,34

6 4 0 0,139 0,32 1 0 0 0,110 34,58

6 3 2 0,153 0,01 0 2 0 0,018 0,21

6 3 1 0,138 0,20 0 1 1 0,018 0,04

6 3 0 0,123 1,35 0 1 0 0,009 3,05

6 2 2 0,137 0,03 0 0 1 0,009 0,26

В таблице указано количество бактерий в 1 мл, вычисленное на основании учета числа пробирок, в которых обнаружен рост клеток после инокуляции соответствующими разведениями. В 10 пробирок вносят по 10 мл культуры, в другие 10 пробирок —по 1 мл и еще в 10 пробирок по 0,1 мл. Код отражав! количество пробирок, в которых обнаружен рост; первая цифра кода — количество пробирок с наличием роста после инокуляции 10 мл культуры, вторая и третья цифры — то же после ииокуляцин соответственно 1 мл и 0,1 мл культуры. В колонке X представлено наиболее вероятное число бактерий в 1 мл инокулята. В колонке Р приведен процент количества случаев воспроизведения кода при условии неограниченного числа определений с суспензией, содержащей число микроорганизмов, указанное в колонке X.

Примеры. Предположим, что каждым нз серии 10-кратных разведений исследуемой культуры инокулируют 10 пробирок с бульоном. Допустим, что после инкубации признаки роста обнаружены в случае девяти пробирок, иио-кулироваиных 10—7 мл исходной культуры; трех пробирок, инокулированных 10—8 мл; 0 пробирок, инокулированных Ю-9 мл. Код будет представлен цифрами 930. Соответствующее ему по таблице число X составляет 0,255 Это означает, что НВЧ в восьмом разведении исходной культуры составляет 0,255 бактерий в 1 мл, а НВЧ бактерий в исходной суспензии составляет соответственно 0,255-108 = 25 500 000 бактерий в 1 мл Если бы такой эксперимент был повторен неограниченно большое число раз с такой же исходной суспензией, результат воспроизводился бы в 6,23% случаев.

Таблица 11.2. Вычисление НВЧ с помощью микрокалькулятора

с введенной программой

Общая формула:

1-е

—а,х

Символ

Значения в примере

2 ад

Pi

НВЧ

исследуемый объем

общее количество определений

число определении, в которых наблюдается рост

10 1,0 0,1 10 10 10

10-19-f 10-1+ 10-0,1

8 5 1

111 мл

80 5 0,1

~10Х

1 _

111 мл «= Общий исследованный объем.

1 — е

Программируемый калькулятор переводят в режим прибавления

1-е-Х

к регистру, где Y и X — содержимое ячеек рабочей памяти.

Программа для калькулятора Hewlett-Packard, модель ЗЗЕ, имеет следующий вид 32, 15-1, 1, 41, 32, 71, 51, 13—00. Чтобы начать работу, нужно нажать клавишу R/S

Выбоать значение к (например, 0,3) Очистить регистры.

Набрать 80, ввести 3,0, нажать клавишу R/S.

Набрать 5, ввести 0,3, нажать клавишу R/S.

Набрать 0,1, ввести 0,03, нажать клавишу R/S.

Записать результат 106,87 и очистить регистры.

Выбрать новую величину х, скажем 0.25.

Набрать 80, ввести 2,5, нажать клавишу R/S.

Набрать 5, ввести 0,25, нажать клавишу R/S.

Набрать 0,1, ввести 0,025, нажать клавишу R/S.

Записать результат 113,81 и сравнить его с первым.

Полученные результаты находятся по обе стороны от значения 111 мл, соответствующего исследуемому объему, поэтому проводят интерполяцию нлн находят промежуточную величину, стараясь отыскать такое значение х, которое дает для суммы указанных трех слагаемых значение 122 мл. В любом случае получают *=0,27, что соответствует значению, приведенному в табл. 11 1

С помощью современных калькуляторов, в которые вводятся программы, можно, не прибегая к помощи таблиц, определить НВЧ для любых вариантов наборов параллельных пробирок и разведений (табл, 11.2). Этот метод хорош и для стандартных серий разведений, подобных приведенным в табл. 11.1, когда получают наборы цифр (кодов), не представленных в опубликованных таблицах.

В случае инокуляции 10 пробирок в каждом из трех последовательных 10-кратных разведений, несмотря на суммарное число пробирок 30, точность расчета ниже, чем в случае использования всех 30 пробирок для учета роста в одном разведении и оценки результатов с помощью кривой nj=30 на рис. 11.2. В первом случае точность примерно соответствует линии п—20 на том же рисунке.

11.4. СВЕТОРАССЕЯНИЕ

Методы, основанные на измерении светорассеяния, широко используются для изучения роста чистых культур. Они очень эффективны и часто бывают полезны, но иногда при их использовании можно получить ошибочные результаты. Основными преимуществами методов являются быстрота и то, что при их применении клетки сохраняются в интактном состоянии. С помощью методов светорассеяния можно получить информацию о содержании макромолекул, что обычно не представляет первоочередного интереса для бактериолога, но с их помощью нельзя определить число клеток. Физические и математические основы светорассеяния сложны, однако и при упрощенном рассмотрении этого явления можно получить ответы на большинство интересующих микробиолога вопросов.

Метод основан на принципе Гюйгенса. Электромагнитное излучение взаимодействует с электронными зарядами в любом веществе. Если энергия света не может быть поглощена, то квант света той же самой энергии (цвета) должен быть отражен. Этот свет распространяется во всех направлениях, т. е. все атомы в физическом теле служат вторичными источниками света. Те фотоны, которые движутся в исходном направлении, остаются в фазе, но те, которые движутся в других направлениях, с точки зрения наблюдателя, отличаются по фазе от световой волны, идущей непосредственно от источника света. В зависимости от расстояния и направления фотон, испускаемый атомом, отличается по фазе от фоРис. П.З. Светорассеяние случайно ориентированных бактерий. Показано угловое распределение света, рассеиваемого при прохождении пучка слева направо через суспензию клеток, которые по размерам и физическим свойствам сходны с Е. coli, выросшими в минимальной среде. Нижний пучок соответствует распределению света для сферических клеток, верхний — для эллипсоидных клеток с отношением осей 4: 1.

тонов, испускаемых другими точками физического тела. Свет, проходящий через вещество, замедляется вследствие этих взаимодействий пропорционально показателю преломления.

Описанные явления определяют закон отклонения и фокусировку света в больших телах, таких, как призма, линза, дождевая капля или оконное стекло. В последнем случае св

страница 86
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(13.12.2017)