Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

тинку с меткой, нанесенной на ее нижнюю сторону; на эту метку наводят зрительную трубу, глядя в которую, затем регулируют фокусировку всей системы. При желании можно использовать также традиционные матовое стекло и черную накидку.

Фотографии следует увеличивать до формата, позволяющего легко различать важные детали; объект при этом должен занимать большую часть фотографии.

1.10. ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

Книги по световой микроскопии и фотографии в микроскопии легко доступны — от энциклопедий до брошюр в бумажной обложке. Однако в книгах можно найти лишь основные принципы микроскопирования. Научиться удовлетворительно работать с микроскопом можно только под чьим-то непосредственным руководством, приобретая практический навык, немалую часть которого составляет искусство приготовления хороших препаратов. Микроскопии бактерий посвящено множество различных книг, но ее принципы универсальны. В приводимом ниже перечне (1 —10) представлены различные типы опубликованных по данному вопросу работ.

1.11 ЛИТЕРАТУРА

1. Anonimous. Photography through the microscope. Eastman Kodak

Co., Rochester, N. У.

Это пример брошюр, которые выпускаются фирмами-изготовителями, связанными какнми-то сторонами своей деятельности с микроскопией. Последние их варианты можно получить у подобных этой фирм или их агентов. По большей части это превосходные издания,

2. Barer R. Lecture notes on the use of the microscope. Blackwell

Scientific Publications, Oxford (1968).

Советы опытного микроскописта.

3. Bradbury S. The optical microscope in biology. Edward Arnold, London (1976).

Эго маленькая брошюра, в которой ясно изложен материал по разрешающей способности микроскопов в современным выдам микроскопии.

4. Cargille J. I. Immersion oil and the microscope. Technical Reprint 10—1051. R. P. Cargille Laboratories, Cedar Grove, N. J. (1975). Другая брошюра, выпущенная фирмой-изготовителем. Комментарии см. выше [1].

5. Culling С. F. Л. Modern microscopy — elementary theory and practice. Butterworths and Co., London (1974).

Комментарии см. выше [3].

6. Engle С. E. (ed.). Photography for the scientist. Academic Press,

Inc., New York (1968),

Общие вопросы научной фотографии, включая микрофотографию.

7. James J. Light microscopic techniques in biology and medicine. Mar-tinus Nijhoff Medical Division, Amsterdam (1976). Прекрасная современная книга, в которой освещена теория и практика с упором на последнюю. В ней даются советы по специальным и усовершенствованным методикам и их применению, включая фазово-контрастную, интерференционную, темнопольную, поляризационную и люминесцентную микроскопию.

8. Mollring F. К. Microscopy from the very beginning, Carl Zeiss, Oberkochen, Federal Republic of Germany.

Еще одна брошюра, выпущенная фирмой-изготовителем. Комментарии см. выше [1].

9. Shillaber С. P. Photomicrography in theory and practice. John Wiley

and Sons, Inc., New York (1944).

Ничто, по-видимому, не заменит этого классического произведения, в котором досконально и в то же время доступным языком разбираются свойства линз в объективах, свойства окуляров и конденсоров. В нем подробно изложены приемы хорошего освещения, взвешены преимущества различных иммерсионных сред, разбираются практические и теоретические вопросы микроскопии. 10. Slayter Е. М. Optical methods in biology. John Wiley and Sons, Inc., New York (1970).

Эта книга — источник теоретических основ большинства видов микроскопии и введение в аналитические процессы, включая дифракцию, спектроскопию и сопряженные оптические методы. В ней освещаются принципы, но нет практических рекомендаций.

Глава 2

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ

ДЛЯ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ

Р. Мюррэй, К- Робиноу

Развитие методов электронной микроскопии ослабило стремление исследователей получить как можно больше информации цитологического характера методами световой микроскопии. Тем не менее эти методы еще очень полезны для общего изучения бактерий и заполнения пробелов на уровне распознавания клеточных компонентов между живой клеткой, с одной стороны, и изображением, которое дает электронный микроскоп, — с другой. Приготовить образцы для световой микроскопии нетрудно, а получаемые с ее помощью результаты очень ценны как с эстетической, так и с научной точки зрения.

В ряде мест этой главы упоминаются или подразумеваются следующие полезные предметы.

1. Пинцет с плоскими незазубренными захватывающими поверхностями, изогнутыми под углом 30°, удобный для вынимания покровных стекол; изогнутый заостренный ювелирный пинцет с незазубренными кончиками также хорош для этой цели.

2. Нож для нарезания агаровых блоков. Для этой цели годны все виды инструментов, но обычные ножи или скальпели портятся при стерилизации i пламени. Поэтому лучше всего пользоваться нихромовой проволокой, конец которой, обработанный на наковальне, имеет узкую листовидную форму. Отрезанный довольно короткий кусок этой проволоки закрепляют в держателе петли и стерилизуют в пламени.

3. Колумбийские кюветы для окрашивания. Они облегчают работу с препаратами, нанесенными на покровные стекла, при их хранении, отмывке и окрашивании. Кюветы сделаны с таким расчетом, чтобы вмещать квадратные покровные стекла со стороной 22 мм (А. Н. Thomas Co., Philadelphia, Pa.).

2.1 ЖИВЫЕ КУЛЬТУРЫ

При микроскопии препаратов живых культур используют очень полезный информативный метод типа «висячая капля». Так называется препарат, когда капля с культурой свисает с покровного стекла в лунку, сделанную в толстой пластинке из прозрачной пластмассы (разд. 3.2.3). При этом бактерии находятся в ростовой среде, располагаясь в плоскости, прилежащей к покровному стеклу. Поскольку обычно их берут из колонии в виде отдельных клеток, естественное взаиморасположение клеток не сохраняется, а из-за толщины подвешенного материала и возникающих оптических трудностей разрешение невелико. Несмотря на эти ограничения, данный метод можно использовать для прослеживания действия токсичных химических агентов и антибиотиков на рост клеток и их форму. Если необходимы длительные наблюдения в более оптимальных для микроскопии условиях, исследуют культуры, находящиеся на предметном стекле, а не препараты типа «висячая капля»; при этом их можно сделать достаточно тонкими и эффективно изучать, используя соответствующую оптику. Лучше всего применять фазово-контрастную микроскопию, но в большинстве случаев анализ можно проводить и с помощью обычной оптики.

2.1.1. Агаровая пластинка

Для приготовления агаровых пластинок рекомендуется следующая методика. Чистые стерильные предметные стекла дважды (или большее число раз) погружают в расплавленный агар соответствующего состава, который находится в чашке Петри. С нижней стороны стекол агар вытирают увлажненной тканью. Используя бинокулярную лупу, бактерии вносят в выбранную на верхней стороне стекла область с помощью вытянутого из пастеровской пипетки стеклянного волокна или стеклянной палочки. Кончик волокна смачивают в водном растворе пептона, слегка прикасаются им к колонии или культуре нужной бактерии, переносят приставшие к кончику бактерии в каплю водного раствора пептона на свежей поверхности агара и распределяют каплю по поверхности. Обрезают агар вокруг выбранной области, кладут сверху покровное стекло и по его краям заливают воск. Если участок питательного агара меньше покровного стекла, то будет поступать воздух при минимальном высыхании. Соответствующие модификации и методические детали можно продумать и для анаэробов с целью получения информации о форме и размере их клеток, а также способе роста.

2.1.2. Желатино-агаровая пластинка

Изменения в деталях внутреннего строения становятся видимыми при фазово-контрастной микроскопии, если использовать твердую питательную агаровую среду с большим коэффициентом преломления [1]. Такую среду получают добавлением желатины до 14—18% [9]. Высокие концентрации подходят для грамположительных бактерий, в то время как для грамотрицательных бактерий могут понадобиться более низкие концентрации. Вместо желатины применяют также [11] поливинилпир-ролидон (до 30%). Этот методический прием позволил Мэйзону и Поуэлсону [3] проследить за процессом деления нуклеоидов в растущих бактериях и сделать фотографии на разных стадиях этого процесса.

При необходимости культуры на пластинках можно фиксировать для окрашивания и даже подготовить для электронной микроскопии; однако образцы с таким мало погруженным в среду материалом [2, 7], находящимся в одной плоскости, требуют значительного мастерства в обращении и получении срезов. Покровное стекло с приставшей к нему неповрежденной культурой и средой следует удалить с пластинки для фиксации и заливки в пластмассу. Легче всего удалить стекло с помощью полоски ленты Mylar или какой-нибудь липкой этикетки.

2.2. ФИКСИРОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ

2.2.1. Фиксация по Боуэну

Препараты, в которых клетки по виду больше всего соответствуют живым, получают фиксацией in situ; при описании формы клеток и способов их роста наиболее полезны именно такие препараты. Их готовят следующим образом. Бактерии выращивают на твердой среде в чашке Петри, внося в нее столько материала, чтобы через несколько клеточных делений образовался или сплошной монослой клеток, или еще не слившиеся микроколонии, в которых клетки не нагромождены друг на друга. В процессе роста состояние клеток контролируют с помощью микроскопа при низком увеличении (с десятикратным объективом). Если для приготовления препаратов клетки нужно брать из жидкой среды, то переносят соответствующее количество суспензии на пластинку с хорошо подсушенной агаровой средой и дают жидкости впитаться в слой агара. Кусочки агара вырезают из той области, где наблюдается правильное распределение клеток. Лучше всего вырезать квадратный слой агара со стороной около 1 см и перевернуть его стороной с микроорганизмами вниз на покровное стекло размером 22X22 мм, не придавливая агар к стеклу и предотвращая скольжение. В этом случае клетки прилежат к стеклу, сохраняя свое взаимное расположение. Покровное стекло с лежащим на нем

страница 8
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.04.2017)