Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

ти, встречающиеся в световой микроскопии, их причины и способы устранения [7]

Неисправность

Возможные причины

Способы устранения

Макровинт ходит слишком тяжело

Тубус или предметный столик самопроизвольно опускаются под собственным весом (изображение расфокусируется)

Микровинт не движется в одну из сторон

Расфокусировка в результате незначительного движения микровинта (особенно при работе с иммерсионными объективами)

Неправильная регулировка хода

Загрязнение реечного механизма

Неправильно отрегулирована зубчатая передача и (или) слишком жидкая смазка

Неисправная система наводки на фокус

Микровипт находится в крайнем положении

Объективы плохо ввинчены в револьверную насадку

К объективу пристало липкое из-за нанесенного на него масла покровное стекло

Для многих видов штативов регулировка осуществляется легко (обычно перемещением двух регулировочных головок в противоположных направлениях)

Почистить и нанести новую смазку

То же

Действовать, как в случае первой неисправности

Установить при помощи револьверной насадки объектив 10Х; поместить микровинт в среднее положение и вновь вывести объект в фокус с помощью макровинта

Способ устранения очевиден

Применять менее вязкое иммерсионное масло; прочнее прижимать образец

Неисправность

Возможные причины

Способы устранения

Неясное пятнистое изображение

Четко сфокусированные пятна или точки, смещающиеся и исчезающие при перемещении конденсора вверх и вниз

Неясное изображение, которое нельзя хорошо сфокусировать

Грязь или смазка на окуляре (пятиа движутся при вращении окуляра в тубусе) или объективе; загрязнение покровного стекла {пятна движутся при смещении образца) или любой поверхности в системе освещения

Загрязнение источника света или рассеивающего экрана

перед ннм, если условия освещения

критические, загрязнение крышки

встроенного осветителя или прилежащего к нему светофильтра при освещении по Келеру

Не та среда перед объективом (масло вместо воздуха, воздух вместо масла, пузырьки воздуха в масле); загрязнение передней линзы объектива, через которую проходит свет

Слишком толстое покровное стекло, чрезмерно толстый слой среды, в которую заключен препарат

соответст-поверхноОчистить вующие сти

См. выше; при невозможности достичь загрязненной поверхности с целью ее очистки слегка изменить фокусировку конденсора

Заменить среду; удалить загрязнение

Применить объектив с корректирующей втулкой или (что лучше) иммерсионный объектив

1. СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ

Неисправность

Возможные причины

Способы устранения

Поле зрения освещено не полностью

Поле зрения освещено неравномерно

Неравномерно расположенные остатки иммерсионного масла на покровном стекле, если используется безыммерсионный объектив с большим увеличением

Предметное стекло на предметном столике перевернуто препаратом вниз (только в случае объективов с большим увеличением)

Световой путь частично заслонен держателем светофильтра

Объектив не зафиксирован в нужном положении

Конденсор (или регулируемые линзы) не находится на оптической оси

Неправильно расположено зеркало

Не отцентрирован конденсор (при критических условиях освещения)

Неоднородность источника света и (или) рассеивающего экрана при критических условиях освещения

Очистить сухой

тканью или бумагой; избегать ксилола, так как ои может размягчить или растворить среду, в которую заключен препарат

Перевернуть предметное стекло; убедиться в том, что метка с обозначением препарата не наклеена на противоположную сторону

Способ устранения очевиден

Слегка подвигать конденсор вверх и вниз; поставить перед источником света матовое стекло

Неисправность

Возможные причины

Способы устранения

Через поле зрения проплывает мутное пятно; после этого пропадает фокус изображения (при работе с масляной иммерсией)

Четко очерченные яркие пятна в изображении

Нерезкие яркие пятна в изображении

Пузырек воздуха в иммерсионном масле; масло в плоскости изображения при работе с безыммерсионным объективом

Поперечные отражения внутри микроскопа (часто серповидные или кольцевидные)

Продольные отражения в тубусе, приводящие к появлению пятен света более округлой формы

Загрязнение поверхности линз, расположенных выше или ниже объекта, нли воздух в иммерсионном масле на конденсоре (различайте эти случаи, пользуясь приведенными выше разъяснениями)

Убрать масло с образца и нанести новое, тщательно очистить препарат и объектив

Попробовать другой окуляр, правильно установить осве* щение по Кёлеру

Применить просветленные линзы, сменить пару объектив — окуляр

Если не удается установить, где находится загрязнение, нежелательный эффект можно сгладить, открыв побольше диафрагму конденсора

денья должны регулироваться по высоте (включая табуреты в учебных лабораториях). Если работающий отличается высоким ростом, то можно выпилить деревянный брусок определенной высоты и подложить его под микроскоп на стол; в этих условиях его тело будет иметь прямое положение. Главная цель этих подгонок состоит в том, чтобы тот, кто работает с микроскопом, мог смотреть в тубус, минимально изгибая шею или спину. При удобном положении напряжение и неприятные физические ощущения, которые могут возникнуть, сведены к минимуму.

1.9. ФОТОГРАФИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ МИКРОСКОПА

Возможность точного фиксирования результатов на пленку имеется при всех видах микроскопии независимо от длины волны используемого света. Прежде всего важно выполнять технические требования, благодаря чему возможна наиболее точная регистрация изображений. В целях контроля можно рассмотреть каждую деталь снимаемого изображения, за исключением случая, когда используются совершенно необычные длины волн. Имеются превосходные книги, в которых подробно описываются и разъясняются эти требования [3, 5, 7, 9].

К наиболее общеупотребительным относятся три типа аппаратов:

1. Насадочная окулярная фотокамера с рулоном пленки (обычно 35 мм). Над окуляром в такой камере обычно располагается светоделительное устройство, позволяющее видеть изображение, чтобы его можно было сфокусировать, через боковой окуляр. Все дополнительные детали помещаются на тубусе микроскопа.

2. Встроенные фотокамеры, разработанные рядом фирм, изготавливающих микроскопы. Эти фотокамеры имеют экспонометры и устройства для задания выдержки. Обычно они отвечают поставленным целям; к ним прилагаются описания с правилами пользования.

3. Аппараты старого типа с гофрированными светонепроницаемыми мехами (используются редко). Такой аппарат помещают на подставке рядом с микроскопом и подсоединяют основание мехов к световызодящему патрубку, в свою очередь соединяемому с верхней частью тубуса микроскопа. В верхней части аппарата устанавливается рамка, которая изготавливается либо под обычную пленку, либо под пленку типа Polaroid.

Успех при фотографировании с помощью микроскопа и получении в результате фотоотпечатков во всех случаях зависит от следующих факторов:

1. Качества препарата, надлежащим образом закрепленного и помещенного точно в фокусе.

2. Качества оптики, правильно настроенной и освещаемой (метод Келера следует предпочесть другим),

позволяющей получать наилучшее из возможных изображений, а также от подбора цветных светофильтров.

3. Соединения фотокамеры и микроскопа, при котором не должно быть вибраций.

4. Правильно подобранной пленки и фотобумаги, а также от их обработки, обеспечивающей оптимальный размер зерна при правильном контрасте и диапазоне плотности.

5. Правильно выбранного общего увеличения.

Как 1-й, так и 2-й пункты уже подробно обсуждались. В 3-м пункте существуют некоторые проблемы, поскольку при сочленении фотографических устройств с тубусами микроскопов образуются и передаются вибрации. Отчасти они возникают оттого, что нажим на спуск затвора сдвигает светоделитель, а затем приводит в действие сам затвор; эти движения порождают сохраняющиеся во времени вибрации. Затвор, задающий время экспозиции, лучше всего расположить между лампой и микроскопом. Вибрация не имеет значения при использовании фотокамер, снабженных мехами, которые создают своего рода световой манжет вокруг окуляра, позволяющий камере и микроскопу быть независимыми и не касаться друг друга. Все же вибрации следует сводить к минимуму, чему помогает прочный, массивный, не касающийся стены стол.

Пленка должна быть панхроматической с чувствительностью 60—100 ед. ASA (чтобы экспозиции находились в хорошо контролируемых пределах), но при фазово-контрастной микроскопии гораздо лучше использовать пленку с большей чувствительностью (300—400 ед. ASA), поскольку уровень освещенности здесь значительно ниже. Экспонометр позволяет воспроизводить выдержки, установленные в контрольном опыте.

Если в вашем отделе или лаборатории собрались выкинуть старый фотоаппарат с мехами, приберегите его, потому что это самый лучший аппарат, позволяющий проводить работы высочайшего качества, пусть и не самый удобный.

Прежде чем печатать микрофотографии, вы должны подумать об общем увеличении и о том, какую деталь вы хотите показать. При обработке пленки следует приI. СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ

держиваться инструкций изготовителя, это гарантирует получение хорошего контраста. Зерно на проявленной пленке не позволяет печатать снимки с увеличением больше чем в 2—2,5 раза. В благоприятных условиях при микроскопии обычных бактерий, как правило, получают общее увеличение 1500, что необходимо для выявления тонкой детальной структуры. Поэтому изображения большего размера, получаемые на куске пленки в камере старого образца, для которой при печати обычно достаточно увеличение в 1,25—1,5 раза, лучше, чем значительно более мелкие изображения на 35-миллиметровой пленке. Если полученные микрофотографии по резкости и качеству изображения уступают картине, наблюдаемой в микроскоп, попытайтесь все повторить. Независимо от используемой камеры важна точность фокусировки. При использовании аппарата с мехами удобен такой прием: помещают на место фотопленки (или фотопластинки) плоскую стеклянную плас

страница 7
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.04.2017)