Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

>Раствор микроэлементов (см. ниже) 10 мл

Раствор 2 М H2S04 2 мл

Дистиллированная вода 1000 мл

Стерилизуют автоклавированием и после охлаждения добавляют следующие компоненты основного раствора:

Ацетат натрия 0,5 г

NaHC03 (простерилизован фильтрованием 4 г

при положительном давлении)

Na2S-9H20 0,3 г

Биотин 20 мкг

Доводят рН до 7,8. Растирают высокоочищенный серный цвет с дистиллированной водой в ступке и стерилизуют его 30 мин при 112—115°С; избыток воды декантируют. К каждой порции среды (50 мл) добавляют кусочек серы размером с горошину. Кроме того, в каждую бутыль со средой добавляют стерильные стеклянные бусы.

Раствор микроэлементов:

ЭДТА, двунатриевая 500 мг

соль

FeS04-7H20 200 мг

ZnS04-7H20 10 мг

MnCl2*4H20 3 мг

Н3ВО3 30 мг

СоС12-6Н20 20 мг

СиС12-2Н20 1 мг

NiCl2-6H20 2 мг

Na2Mo04.2H20 3 мг

Деионизованная вода 1000 мл

8.5.40. Фенилэтаноловый агар (BBL или Difco)

Панкреатический гидролизат казеина USP 15 г

Папаиновый гидролизат соевой муки USP 5 г

NaCl 5 г

Фенилэтаиол 2,5 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7Д кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 118°С.

8.5.41. Почвенная среда Прингсхейма [60]

Зерно пшеницы или ячменя вносят в большую пробирку и покрывают его садовой почвой толщиной 3— 4 см. Пробирку заполняют водопроводной водой почти доверху. Стерилизуют среду 30 мин при 121 °С.

8.5.42. Среда RGCA-SC [27]

Глюкоза 0,0248 г

Целлобиоза 0,0248 г

Растворимый крахмал 0,05 г

Раствор ресазурина (0,025%) 0,4 мл

Дистиллированная вода 20 мл

Раствор солей (разд. 20.3.28) 50 мл

Рубцовая жидкость (Randolph Biologicals, 30 мл

Houston, Тех.)

Солянокислый цистеин 0,05 г

Раствор гемина (разд. 20.3.28) 1 мл

Раствор витамина Ki (разд. 20.3.28) 0,02 мл

Среду готовят способом, описанным для бульона PY (разд. 20.3.28), разливают по 10 мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, и автоклавнруют. Для приготовления конечной среды в двух пробирках агар расплавляют и охлаждают до 50 °С. В каждую пробирку добавляют с соблюдением правил асептики:

Стерильную инактивированиую сыворотку кроли- 1,5 мл

ка, нагревавшуюся в течение 4 ч при 60 °С

Раствор кокарбоксилазы (тиаминпирофосфата; 0,2 мл

0,025%), стерилизованный фильтрованием

Стерильный предварительно восстановленный 2,0 мл

бульон PY (разд. 20.3.28)

Смешивают и переливают содержимое двух пробирок в чашку Петри, где среда застывает. Среду либо используют немедленно, либо хранят в анаэростате.

8.5.43. Агар для салмонелл и шигелл (BBL или Difco)

Мясной экстракт 5 г

Пептон 5 г

Лактоза 10 г

Смесь желчных солей 8,5 г

Цитрат натрия 8,5 г

Тиосульфат натрия 8,5 г

Цитрат железа 1 г

Бриллиантовая зелень 0,33 г

Нейтральный красный 0,025 г

Агар 13,5 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0 и нагревают до кипения, чтобы растворить агар. Автоклавирования не проводят. Охлаждают до 42—45°С и разливают в чашки Петри.

8.5.44. Бульон с селенитом F [43J (BBL или Difco)

Полипептои (BBL) или триптон (Difco) 5 г

Лактоза 4 г

Na2HP04 10 г

Кислый селенит натрия 4 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0. Среду используют сразу же без стерилизации или хранят пробирки после их стерилизации с текучим паром в течение 30 мин.

8.5.45. Бульон гидролизата казеина и соевой муки

[известен также, как триптиказо-соевый бульон (BBL) или триптический соевый бульон (Difco)]

Панкреатический гидролизат казеина 17 г

USP

Папаиновый гидролизат соевой муки 3 г

USP

NaCl 5 г

K2HPOi 2,5 г

Глюкоза 2,5 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,3 и стерилизуют 15 мин при 118— 121 °С.

8.5.46. Среда для Sphaerotilus [8]

Лактат натрия 100 мг

NH4C1 1,7 мг

КН2РО4 8,5 мг

К2НРО4 21,5 мг

Na2HP04-7H20 34,4 мг

MgS04-7H20 22,5 мг

СаС12 27,5 мг

FeCl3-6H20 0,25 мг

Дистиллированная вода 1000 мл

При необходимости доводят рН до 7,1—7,2. Разливают порции по 50 мл в квадратные бутыли Френча и стерилизуют 15 мин при 116°С.

8.5.47. Среда для

Бумага Whatman

media 11 KNO3

MgS04-7H20

СаС!2-2Н20

FeCls

Дистиллированная

Sporocytophaga

Chro- 10 г

0,5 г 0,2 г 0,1 г 0,02 г

вода 1000 мл

8.5.48. Агар для стандартных методов [6] (BBL или Difco)

Панкреатический гидролизат казеина USP 5 г

Дрожжевой экстракт 2,5 г

Глюкоза 1 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.49. Среда с сукцинатом и солями

Сукцинат натрия 4 г MgS04-7H20 0,2

KNO3 0,5 г СаС12-2Н20 0,1

К2НР04 0,5 г FeS04-7H20 0,2

Доводят рН до 7,0 и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.50. Агар TCBS [3] (BBL)

Тиосульфат натрия Цитрат натрия Бычья желчь Холат натрия Сахароза

Панкреатический гидролизат казеина TJSP Пептический гидролизат животных тканей USP Дрожжевой экстракт NaCl

Цитрат железа Тимоловый синий Бромтимоловый синий Агар

Дистиллированная вода

10 г

10 г 5 г 3 г

20 г 5 г 5 г 5 г

10 г 1 г

0,04 г 0,04 г 14 г

1000 мл

Нагревают, помешивая, и кипятят 1 мин. Среду охлаждают до 45—50 °С и разливают в чашки. Автоклавирования не проводят. Конечный рН должен быть 8,6.

8.5.51. Агар с ацетатом таллия

Ацетат таллия 1 г

Пептон 10 г

Дрожжевой экстракт 10 г

Глюкоза Ю г

Агар 13 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,0, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 118°С. Смесь охлаждают до 45—50 °С, добавляют к ней с соблюдением правил асептики 10 мл солянокислого трифенилтетразолия (1%-ный водный раствор, стерилизованный фильтрованием) и разливают в чашки Петри.

8.5.52, Агар Тейера и Мартина

Эту среду чаще всего готовят из имеющихся в продаже концентратов и растворов или используют готовую (BBL или Difco).

Раствор А (основной агар GC двойной концентрации):

Панкреатический гидролизат казеина USP

Пептический гидролизат животной ткани USP

15 г

15 г

Кукурузный крахмал 2 г

К2НРО4 8 г

КН2Р04 2 г

NaCl 10 г

Агар (см. примечание) 20 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С, после чего охлаждают до 50 °С. (Примечание: Файнголд и др. [20] рекомендуют увеличить количество агара до 30 г.)

Раствор В:

Гемоглобин 20 г

Дистиллированная 1000 мл

вода

К небольшому количеству воды постепенно добавляют порошок гемоглобина, чтобы получить однородную пасту; затем постепенно добавляют остальную воду. Стерилизуют 15 мии при 121 °С.

Раствор С:

Витамин В12 0,010 г

L-Глутамин 10 г

Аденин 1 г

Солянокислый гуанин 0,03 г

я-Аминобензойная кислота 0,013 г

L-Цистин 1,1 г

Глюкоза 100 г

Никотииамидадениндинуклеотид 0,25 г

Тиамиипирофосфат (кокарбокси- 0,1 г

лаза)

Нитрат железа 0,02 г

Солянокислый тиамии 0,003 г

Солянокислый цистеии 25,9 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Стерилизуют фильтрованием. Раствор D:

Ванкомицин 30 мг

Колистин 75 мг

Нистатин 125 000 ед.

Дистиллированная вода 100 мл

Стерилизуют фильтрованием.

С соблюдением правил асептики объединяют по 1000 мл растворов А и В и по 20 мл растворов С и D. Среду разливают в чашки Петри.

8.5.53. Среда для Thiobacillus thiooxidans [78]

Na2S203-5H20 10 г

KH2P04 4 г

К2НРО4 4 г

MgS04-7H20 0,8 г

NH4C1 0,4 г

Раствор микроэлементов (см. ниже) 10 мл

Деионизованная вода 1000 мл

Стерилизуют 15 мин при 121 °С. Доводят рН до 3,5—4,0 стерильной H2S04. Для получения твердой среды перед доведением рН добавляют 15 г агара на 1 л. Кипятят до растворения агара, стерилизуют автоклавированием и охлаждают до 45—50 °С. Доводят рН до 3,5—4,0 стерильной H2SO4.

Раствор микроэлементов:

ЭДТА 50 г

ZnS04-7H20 22 г

СаС12 5,54 г

МпС12-4Н20 5,06 г

FeS04-7H20 4,99 г

(NH4)eM07024-4H20 Ы г

CuS04-5H20 1,57 г

СоСЬ-6Н20 1,61 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,0 с помощью КОН.

8.5.54. Среда с триптофаном [44]

MgS04-7H20 0,2 г

К2НРО4 1 г

МпСЬ-4Н20 0,002 г

FeS04-7H20 0,05 г

СаС12 0,02 г

NaMo04-2H20 0,001 г

L-Триптофаи 1 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,8—7,0 и стерилизуют автоклавированием.

8.5.55. Среда Велдкампа [77]

NaCl 30 г

КН2Р04 1 г

NH4CI 1 г

MgCl2-6H20 0,5 г

СаСЬ 0,04 г

NaHCOa 5 г

Na2S-9H20 0,1 г

Цитрат железа, 0,004 М раствор 5 мл

Раствор микроэлементов (см. ниже) 2 мл

Агар, порошок 5 г

Дрожжевой экстракт 0,3 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0. Для получения первичной накопительной культуры среду используют без стерилизации. Чтобы получить среду, используемую для посева разливом в чашки, готовят среду двойной концентрации, но без агара, доводят ее рН до указанного значения и стерилизуют фильтрованием (положительное давление). Отдельно готовят 4%-ный раствор агара в свежедистиллированной прокипяченной воде и стерилизуют его кратковременным автоклавироваиием. Температуру среды двойной концентрации и расплавленного агара доводят до 45—50°С и с соблюдением правил асептики смешивают их в равных объемах.

Раствор микроэлементов:

Деионизованная вода 1000 мл

8.5.56. Агар с желчью и фиолетовым красным [6]

Дрожжевой экстракт 3 г

Пептон (Difco) или джелизат (BBL) 7 г

Смесь желчных солей 1,5 г

Лактоза 10 г

NaCl 5 г

Нейтральный красный 0,03 г

Кристаллический фиолетовый 0,002 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, охлаждают примерно до 45 °С и используют для заполнения чашек. После застывания среды ее покрывают дополнительным слоем среды, чтобы предотвратить поверхностный рост и распространение колоний.

8.5.57. Среда Виддла и Пфеннига [81]

Ацетат натрия 1,23 г

Na2S04 2,84 г

КН2Р04 0,68 г

MgCl2 0,19 г

NH4C1 0,32 г

СаС12 0,07 г

Раствор микроэлементов {см. ниже) 10 мл

Дистиллированная вода 1000 мл

Стерилизуют 15 мин при 121 °С. Затем добавляют следующие ингредиенты из стерильных основных растворов:

FeCU {из подкисленного основного раствора) 0,0

страница 63
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.09.2017)