![]() |
|
|
Методы общей бактериологии. Том 1>НзВОз 2000 мг Na2Mo04.2H20 500 мг Деионизованная вода 1000 мл 8.5.23. Среда Иверсона [33] Триптиказо-соевый агар (обезвожен- 40 г ный, BBL) Агар 5 г Лактат натрия, 0,4%-ный раствор 600 мл MgS04-7H20 2 г Железоаммонийсульфат 0,5 г Дистиллированная вода 400 мл Доводят рН до 7,2—7,4, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 1 г 4 г 0,5 г 1 г 0,2 г 0,1 г 0,1 г 0,5 г (20—30 г) 8.5.24. Лактатная среда Дрожжевой экстракт Лактат натрия NH4C1 К2НРО4 MgS04-7H20 СаС12-2Н20 FeS04-7H20 Na2S04 NaCl (для морских организмов) Стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.25. Бульон для листерий [3] Пептон, триптоза (Difco) или 20 г биосейт (BBL) Глюкоза (декстроза) 2 г NaCl 5 г Na2HP04 2,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,3 и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.26. Среда Лёвенштейна—Иенсена (BBL или Difco) КН2РО4 2,4 г MgS04-7H20 0,24 г Цитрат магния 0,60 г Аспарагин 3,6 г Картофельная мука 30 г Глицерин 12 мл Дистиллированная вода 600 мл Гомогенизированные яйца 1000 мл Малахитовый зеленый 2-% ный 200 мл водный раствор Соли И аспарагин растворяют в воде, добавляют к ним глицерин и картофельную муку и автоклавируют 30 мин при 121 °С. Скорлупу свежих (хранящихся не более недели) яиц тщательно моют в 5%-ном мыльном растворе. Оставляют яйца в этом растворе на 30 мин, а затем скорлупу вновь тщательно моют в проточной холодной воде. На 15 мин погружают яйца в 70%-ный этанол, затем вынимают их и разбивают в стерильную колбу. Гомогенизируют яйца встряхиванием со стеклянными бусами, гомогенат фильтруют через четыре слоя стерильной марли и 1 л отфильтрованного яичного гомогената вливают в колбу с охлажденной карто-фельно-солевой смесью. Добавляют малахитовый зеленый, хорошо перемешивают и разливают по 6—8 мл в стерильные пробирки (20X150 мм) с завинчивающимися крышками. Наклоняют пробирки и выдерживают их в течение 50 мин при 85 °С для сгущения содержимого. Стерильность пробирок проверяют инкубацией в течение 48 ч при 37 °С. Хранят пробирки с плотно завинченными крышками в холодильнике. 8.5,27. Агар Мак-Конки (BBL или Difco) Пептон (Difco) или джелизат 17 г (BBL) Протеозопептон (Difco) или по- 3 г липептон (BBL) Лактоза 10 г Смесь желчных солей 1,5 г NaCl 5 г Нейтральный красный 0,03 г Кристаллический фиолетовый 0,001 г Агар 13,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,1, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.28. Солевой агар с маннитом (BBL или Difco) Мясной экстракт 1 г Пептон (Difco) или полипептон 10 г (BBL) NaCl 75 г Маннит 10 г Феноловый красный 0,025 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С, охлаждают до 55 °С и разливают по чашкам Петри. 8.5.29. Среда Мак-Брайда для лнстерий [3] (Difco) Пептон, триптоза (Difco) или 10 г биосейт (BBL) Мясной экстракт 3 г NaCl 5 г Ангидрид глицина 10 г UC1 0,5 г Фенилэтанол 2,5 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,3, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Среду охлаждают до 45—50 °С и добавляют к ней стерильную дефибриниро-ванную овечью кровь до конечной концентрации 5%, 8.5.30. Минеральный агар [7] Na2P04-12H20 9 г КН2Р04 1,5 г MgS04-7H20 0,2 г NH4C1 1 г Железоаммонийцитрат 0,005 г СаС12.2Н20 0,010 г Раствор микроэлементов (см. 3 мл ниже) Бидистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,1 и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Для получения твердой среды добавляют 17 г агара на 1 л, смесь кипятят до его растворения и стерилизуют автоклавироваиием. После охлаждения среды до 45— 50 °С добавляют нужное количество раствора NaHCCb (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 0,5 г/л. Раствор микроэлементов: ZnS04.7H20 10 мг МпС13.4Н20 3 мг НзВОз 30 мг СоС12-6Н20 20 мг СиС12-6Н20 0,79 мг NiCl2-6H20 2 мг Na2Mo04-2H20 3 мг Бидистиллированная 1000 мл вода 8.5.31. Агар для Streptococcus mltis и 5. salivarius [13] (Difco) Триптон (Difco) 10 г Протеозопептон № 3 (Difco) 5 г Протеозопептон (Difco) 5 г Глюкоза 1 г Сахароза 50 г К2НР04 4 г Трипановый синий 0,075 г Кристаллический фиолетовый 0,0008 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С и затем охлаждают до 50—55 °С. Добавляют 1 мл 0,1%-ного теллурита калия (стерилизованного фильтрованием), перемешивают и разливают в чашки Петри. 8.5.32. Среда MN [59] NaN03 0,75 г К2НР04-ЗН20 0,02 г MgS04-7H20 0,038 г СаС12-2Н20 0,018 г Лимонная кислота 0,003 г Железоаммонийцитрат 0,003 г ЭДТА, двунатриевая магниевая соль 0,0005 г Na2C03 0,02 г Смесь микроэлементов А5 (см. среду BG-11 1 мл в разд 8 5 8) Морская вода 750 мл Деионизованная вода 250 мл После автоклавирования и охлаждения рН среды должен быть 8,3. 8.5.33. Модифицированная среда Рогозы [46] Раствор А: MgS04-7H20 П,5 г MnS04-4H20 2,8 г FeS04-7H20 0,08 г Дистиллированная вода 100 мл Раствор В: Дрожжевой экстракт 6 Кислый аммонийцитрат 2,4 "г КН2Р04 7,2 Глюкоза f 24 г Твин 80 1,2 г Дистиллированная вода 100 мл Раствор С: К 100 мл раствора В добавляют 6 мл раствора А. Слабо нагревают до растворения ингредиентов, а затем добавляют 60 мл 4М ацетатного буфера, рН 5,37, и доводят дистиллированной водой объем раствора до 200 мл. Конечный рН среды равен 5,0. Раствор D: Снятое сырое молоко (рН доведен до 8,5) 1000 мл Трипсин 5 г Хлороформ 10 мл Инкубируют 24 ч при 37 °С, стерилизуют паром 20 мин, фильтруют горячий раствор и доводят рН до 6,65 ледяной уксусной кислотой (около 0,5 мл на 1 л). Для приготовления полной среды добавляют к 700 мл раствора D 19 г агара, который растворяется во время автоклавирования при 121ЬС в течение 20 мин. К этому горячему раствору добавляют 185 мл раствора С, предварительно нагретого до 50 °С, и доводят объем до 1 л горячим раствором D. Проба из полученной среды, разведенная в 3 раза теплой водой, должна при 30 °С иметь рН 5,35+0,05. Среду разливают по 10 мл в пробирки и без стерилизации хранят в холодильнике. При разливе среды по чашкам ее расплавляют слабым нагреванием, стараясь избежать потемнения среды и образования осадка. 8.5.34. Модифицированная среда Вольфа [40, 54] Приготовление железосульфидного агара Равные количества железоаммонийсульфата и сульфида натрия вливают в кипящую дистиллированную воду, заполняют этой смесью мерную колбу и закрывают ее. Осадку дают возможность осесть, а надосадочную жидкость сливают. К осадку вновь добавляют кипящей дистиллированной воды и несколько раз переворачивают колбу, ресуспендируя осадок. Дают осадку осесть, надосадочную жидкость сливают, а к осадку опять добавляют кипящую дистиллированную воду и т. д. Таким способом отмывают сульфид железа четыре раза. Осадок хранят в мерной колбе, наполненной водой и закрытой пробкой. Сульфид железа достают со дна колбы пипеткой. К 100 мл осадка сульфида железа добавляют 15 г очищенного агара, кипятят среду до расплавления агара и стерилизуют 20 мин при 121 °С. Смесь разливают пипеткой по 10 мл в стерильные прямоугольные 150-мил-лилитровые молочные бутылки с завинчивающимися крышками и дают агару застыть. Приготовление жидкого поверхностного слоя В каждой бутылке на агар наносят 50 мл (100 мл в случае получения накопительной культуры с формалином) среды следующего состава; NH4C1 1 г К2НР04 0,5 г MgS04-7H20 0,2 г СаС12 0,1 г Бромтимоловый синий 0,016 г Бромкрезоловый фиолето- 0,004 г вый Дистиллированная вода 1000 мл Стерилизуют 20 мин при 121 °С. После охлаждения среду вносят с соблюдением правил асептики в сосуды с железосульфидным агаром. Через жидкий слой в течение 15 с или до снижения рН до 6,0 продувают С02. 8.5.35. Агар MPSS Пептон (Difco) 5 р Янтарная кислота 1 г (NHibSOi 1 г MgS04-7H20 1 г FeCl36H20 0,002 г MnS04-H20 0,002 г Агар 15 г Дистиллированная вода (см. примечание) 1000 мл Доводят рН до 7,0 с помощью КОН, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. (Примечание: для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.) 8.5.36. Реактив, содержащий 1^-ацетил-1--цистеин и гидроксид натрия [20] Объединяют равные объемы 4%-ного NaOH и 2,94%-ного цитрата натрия-2H2G и разводят в этом растворе порошок Ы-ацетил-Ь-цистеина (0,5%). Приготовленный раствор годен в течение суток. 8.5.37. Среда Nfb [17] L-Яблочная кислота 5 г К2НРО4 0,5 г MgS04-7H20 0,2 г NaCl 0,1 г СаС12 0,02 г Раствор микроэлементов (см. ниже) 2 мл Бромтимоловый синий (5%-ный спиртовой 2 мл раствор) Fe-ЭДТА (1,64%-ный раствор) 4 мл Раствор витаминов (см. ниже) 1 мл КОН 4 г Агар 1,75 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,8, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Среду охлаждают до 40—50 °С и разливают по 4 мл в 6-миллилитровые сывороточные пузырьки с резиновыми прокладками. Раствор микроэлементов: Na2Mo04-2H20 0,2 г MnS04-H20 0,235 г Н3ВО3 0,28*г CuS04.5H20 0,008]г ZnS04.7H20 0,024 г Дистиллированная вода 200 мл Раствор витаминов: Биотин 10 мг Пиридоксин 20 мг Дистиллированная вода 100 мл 8.5.38. Среда для нитрификаторов [58] Na2HP04 13,5 г КН2Р04 0,7 г MgS04.7H20 0,1 г NaHCOa 0,5 г FeChr6H20 0,014 г СаС12-2Н20 0,18 г Дистиллированная вода 1000 мл Разливают среду по 75 мл в 250-миллилитровые колбы Эрленмейера и стерилизуют 15 мин при 121 °С. В случае бактерий, окисляющих нитрит, перед стерилизацией в среду добавляют 0,5 г NaN02 на 1 л. Для бактерий, окисляющих аммоний, стерилизуют отдельно раствор (NH4)2S04 и добавляют его с соблюдением правил асептики до конечной концентрации 0,5 г/л. 8.5.39. Среда Пфеннига и Библа для серуокисляющих бактерий [56] КН2Р04 1 г NH4C1 0,3 г MgS04-7H20 1 г MgCl2-6H20 2 г NaCl (для морских организмов) (20 г) СаС12-2Н20 0,1 г |
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 |
Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb) |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [обратная связь] |