>НзВОз 2000 мг

Na2Mo04.2H20 500 мг

Деионизованная вода 1000 мл

8.5.23. Среда Иверсона [33]

Триптиказо-соевый агар (обезвожен- 40 г

ный, BBL)

Агар 5 г

Лактат натрия, 0,4%-ный раствор 600 мл

MgS04-7H20 2 г

Железоаммонийсульфат 0,5 г

Дистиллированная вода 400 мл

Доводят рН до 7,2—7,4, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

1 г 4 г 0,5 г 1 г 0,2 г 0,1 г 0,1 г 0,5 г (20—30 г)

8.5.24. Лактатная среда

Дрожжевой экстракт Лактат натрия NH4C1 К2НРО4 MgS04-7H20 СаС12-2Н20 FeS04-7H20 Na2S04

NaCl (для морских организмов) Стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.25. Бульон для листерий [3]

Пептон, триптоза (Difco) или 20 г

биосейт (BBL)

Глюкоза (декстроза) 2 г

NaCl 5 г

Na2HP04 2,5 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,3 и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.26. Среда Лёвенштейна—Иенсена (BBL или Difco)

КН2РО4 2,4 г

MgS04-7H20 0,24 г

Цитрат магния 0,60 г

Аспарагин 3,6 г

Картофельная мука 30 г

Глицерин 12 мл

Дистиллированная вода 600 мл

Гомогенизированные яйца 1000 мл

Малахитовый зеленый 2-% ный 200 мл

водный раствор

Соли И аспарагин растворяют в воде, добавляют к ним глицерин и картофельную муку и автоклавируют 30 мин при 121 °С. Скорлупу свежих (хранящихся не более недели) яиц тщательно моют в 5%-ном мыльном растворе. Оставляют яйца в этом растворе на 30 мин, а затем скорлупу вновь тщательно моют в проточной холодной воде. На 15 мин погружают яйца в 70%-ный этанол, затем вынимают их и разбивают в стерильную колбу. Гомогенизируют яйца встряхиванием со стеклянными бусами, гомогенат фильтруют через четыре слоя стерильной марли и 1 л отфильтрованного яичного гомогената вливают в колбу с охлажденной карто-фельно-солевой смесью. Добавляют малахитовый зеленый, хорошо перемешивают и разливают по 6—8 мл в стерильные пробирки (20X150 мм) с завинчивающимися крышками. Наклоняют пробирки и выдерживают их в течение 50 мин при 85 °С для сгущения содержимого. Стерильность пробирок проверяют инкубацией в течение 48 ч при 37 °С. Хранят пробирки с плотно завинченными крышками в холодильнике.

8.5,27. Агар Мак-Конки (BBL или Difco)

Пептон (Difco) или джелизат 17 г

(BBL)

Протеозопептон (Difco) или по- 3 г

липептон (BBL)

Лактоза 10 г

Смесь желчных солей 1,5 г

NaCl 5 г

Нейтральный красный 0,03 г

Кристаллический фиолетовый 0,001 г

Агар 13,5 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,1, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.28. Солевой агар с маннитом (BBL или Difco)

Мясной экстракт 1 г

Пептон (Difco) или полипептон 10 г

(BBL)

NaCl 75 г

Маннит 10 г

Феноловый красный 0,025 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С, охлаждают до 55 °С и разливают по чашкам Петри.

8.5.29. Среда Мак-Брайда для лнстерий [3] (Difco)

Пептон, триптоза (Difco) или 10 г

биосейт (BBL)

Мясной экстракт 3 г

NaCl 5 г

Ангидрид глицина 10 г

UC1 0,5 г

Фенилэтанол 2,5 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,3, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Среду охлаждают до 45—50 °С и добавляют к ней стерильную дефибриниро-ванную овечью кровь до конечной концентрации 5%,

8.5.30. Минеральный агар [7]

Na2P04-12H20 9 г

КН2Р04 1,5 г

MgS04-7H20 0,2 г

NH4C1 1 г

Железоаммонийцитрат 0,005 г

СаС12.2Н20 0,010 г

Раствор микроэлементов (см. 3 мл

ниже)

Бидистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,1 и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Для получения твердой среды добавляют 17 г агара на 1 л, смесь кипятят до его растворения и стерилизуют автоклавироваиием. После охлаждения среды до 45— 50 °С добавляют нужное количество раствора NaHCCb (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 0,5 г/л.

Раствор микроэлементов:

ZnS04.7H20 10 мг

МпС13.4Н20 3 мг

НзВОз 30 мг

СоС12-6Н20 20 мг

СиС12-6Н20 0,79 мг

NiCl2-6H20 2 мг

Na2Mo04-2H20 3 мг

Бидистиллированная 1000 мл

вода

8.5.31. Агар для Streptococcus mltis и 5. salivarius [13] (Difco)

Триптон (Difco) 10 г

Протеозопептон № 3 (Difco) 5 г

Протеозопептон (Difco) 5 г

Глюкоза 1 г

Сахароза 50 г

К2НР04 4 г

Трипановый синий 0,075 г

Кристаллический фиолетовый 0,0008 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С и затем охлаждают до 50—55 °С. Добавляют 1 мл 0,1%-ного теллурита калия (стерилизованного фильтрованием), перемешивают и разливают в чашки Петри.

8.5.32. Среда MN [59]

NaN03 0,75 г

К2НР04-ЗН20 0,02 г

MgS04-7H20 0,038 г

СаС12-2Н20 0,018 г

Лимонная кислота 0,003 г

Железоаммонийцитрат 0,003 г

ЭДТА, двунатриевая магниевая соль 0,0005 г

Na2C03 0,02 г

Смесь микроэлементов А5 (см. среду BG-11 1 мл

в разд 8 5 8)

Морская вода 750 мл

Деионизованная вода 250 мл

После автоклавирования и охлаждения рН среды должен быть 8,3.

8.5.33. Модифицированная среда Рогозы [46]

Раствор А:

MgS04-7H20 П,5 г

MnS04-4H20 2,8 г

FeS04-7H20 0,08 г

Дистиллированная вода 100 мл

Раствор В:

Дрожжевой экстракт 6

Кислый аммонийцитрат 2,4 "г

КН2Р04 7,2

Глюкоза f 24 г

Твин 80 1,2 г

Дистиллированная вода 100 мл

Раствор С:

К 100 мл раствора В добавляют 6 мл раствора А. Слабо нагревают до растворения ингредиентов, а затем добавляют 60 мл 4М ацетатного буфера, рН 5,37, и доводят дистиллированной водой объем раствора до 200 мл. Конечный рН среды равен 5,0.

Раствор D:

Снятое сырое молоко (рН доведен до 8,5) 1000 мл

Трипсин 5 г

Хлороформ 10 мл

Инкубируют 24 ч при 37 °С, стерилизуют паром 20 мин, фильтруют горячий раствор и доводят рН до 6,65 ледяной уксусной кислотой (около 0,5 мл на 1 л).

Для приготовления полной среды добавляют к 700 мл раствора D 19 г агара, который растворяется во время автоклавирования при 121ЬС в течение 20 мин. К этому горячему раствору добавляют 185 мл раствора С, предварительно нагретого до 50 °С, и доводят объем до 1 л горячим раствором D. Проба из полученной среды, разведенная в 3 раза теплой водой, должна при 30 °С иметь рН 5,35+0,05. Среду разливают по 10 мл в пробирки и без стерилизации хранят в холодильнике. При разливе среды по чашкам ее расплавляют слабым нагреванием, стараясь избежать потемнения среды и образования осадка.

8.5.34. Модифицированная среда Вольфа [40, 54]

Приготовление железосульфидного агара

Равные количества железоаммонийсульфата и сульфида натрия вливают в кипящую дистиллированную воду, заполняют этой смесью мерную колбу и закрывают ее. Осадку дают возможность осесть, а надосадочную жидкость сливают. К осадку вновь добавляют кипящей дистиллированной воды и несколько раз переворачивают колбу, ресуспендируя осадок. Дают осадку осесть, надосадочную жидкость сливают, а к осадку опять добавляют кипящую дистиллированную воду и т. д. Таким способом отмывают сульфид железа четыре раза. Осадок хранят в мерной колбе, наполненной водой и закрытой пробкой. Сульфид железа достают со дна колбы пипеткой.

К 100 мл осадка сульфида железа добавляют 15 г очищенного агара, кипятят среду до расплавления агара и стерилизуют 20 мин при 121 °С. Смесь разливают пипеткой по 10 мл в стерильные прямоугольные 150-мил-лилитровые молочные бутылки с завинчивающимися крышками и дают агару застыть.

Приготовление жидкого поверхностного слоя

В каждой бутылке на агар наносят 50 мл (100 мл в случае получения накопительной культуры с формалином) среды следующего состава;

NH4C1 1 г

К2НР04 0,5 г

MgS04-7H20 0,2 г

СаС12 0,1 г

Бромтимоловый синий 0,016 г

Бромкрезоловый фиолето- 0,004 г

вый

Дистиллированная вода 1000 мл

Стерилизуют 20 мин при 121 °С. После охлаждения среду вносят с соблюдением правил асептики в сосуды с железосульфидным агаром. Через жидкий слой в течение 15 с или до снижения рН до 6,0 продувают С02.

8.5.35. Агар MPSS

Пептон (Difco) 5 р

Янтарная кислота 1 г

(NHibSOi 1 г

MgS04-7H20 1 г

FeCl36H20 0,002 г

MnS04-H20 0,002 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода (см. примечание) 1000 мл

Доводят рН до 7,0 с помощью КОН, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. (Примечание: для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.)

8.5.36. Реактив, содержащий 1^-ацетил-1--цистеин и гидроксид натрия [20]

Объединяют равные объемы 4%-ного NaOH и 2,94%-ного цитрата натрия-2H2G и разводят в этом растворе порошок Ы-ацетил-Ь-цистеина (0,5%). Приготовленный раствор годен в течение суток.

8.5.37. Среда Nfb [17]

L-Яблочная кислота 5 г

К2НРО4 0,5 г

MgS04-7H20 0,2 г

NaCl 0,1 г

СаС12 0,02 г

Раствор микроэлементов (см. ниже) 2 мл

Бромтимоловый синий (5%-ный спиртовой 2 мл

раствор)

Fe-ЭДТА (1,64%-ный раствор) 4 мл

Раствор витаминов (см. ниже) 1 мл

КОН 4 г

Агар 1,75 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,8, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. Среду охлаждают до 40—50 °С и разливают по 4 мл в 6-миллилитровые сывороточные пузырьки с резиновыми прокладками.

Раствор микроэлементов:

Na2Mo04-2H20 0,2 г

MnS04-H20 0,235 г

Н3ВО3 0,28*г

CuS04.5H20 0,008]г

ZnS04.7H20 0,024 г

Дистиллированная вода 200 мл

Раствор витаминов:

Биотин 10 мг

Пиридоксин 20 мг

Дистиллированная вода 100 мл

8.5.38. Среда для нитрификаторов [58]

Na2HP04 13,5 г

КН2Р04 0,7 г

MgS04.7H20 0,1 г

NaHCOa 0,5 г

FeChr6H20 0,014 г

СаС12-2Н20 0,18 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Разливают среду по 75 мл в 250-миллилитровые колбы Эрленмейера и стерилизуют 15 мин при 121 °С. В случае бактерий, окисляющих нитрит, перед стерилизацией в среду добавляют 0,5 г NaN02 на 1 л. Для бактерий, окисляющих аммоний, стерилизуют отдельно раствор (NH4)2S04 и добавляют его с соблюдением правил асептики до конечной концентрации 0,5 г/л.

8.5.39. Среда Пфеннига и Библа для серуокисляющих бактерий [56]

КН2Р04 1 г

NH4C1 0,3 г

MgS04-7H20 1 г

MgCl2-6H20 2 г

NaCl (для морских организмов) (20 г)

СаС12-2Н20 0,1 г