![]() |
|
|
Методы общей бактериологии. Том 1>15 мин при Для приготовления среды растворы 1 и 2 объединяют с соблюдением правил асептики. Для получения твердой среды добавляют 20 г агара иа 1 л. Среда В К2НР04 0,8 г КН2Р04 0,2 г CaS04-2H20 0,05 г MgS04-7H20 1.0,5 г Стерилизуют 15 мин при 12 среды добавляют 20 г агара FeS04-7H20 0,01 г ванная вода ;°С. Для получения твердой на 1 л. 8.5.6. Основная минеральная агаровая среда для целлюлолитических цитофаг [72) (NH4)3S04 или 1 г СаС12 0,1 г KN03 FeCl3 0,02 г К2НР04 1 г Агар 10 г MgS04 0,2 г Водопроводная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0—7,5, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.7. Основная солевая среда для Thermus [11] Нитрилотриук- 100 мкг FeCl3 2800 нг сусная кис- MnS04-H20 22 мкг лота ZnS04.7H20 5 мкг CaS04-2H30 60 мкг НзВОз 5 мкг MgS04-7H30 100 мкг CuS04 160 нг NaCl 8 мкг Na2Mo04-2H30 250 нг KNOs 103 мкг СоС12-6Н20 460 нг NaN03 689 мкг Деионизован- 1000 мл Na2HP04 111 мкг ная вода Доводят рН до 8,2 с помощью NaOH. 8.5.8. Среда BG-11 [59] NaNOs K2HP04-3H30 MgS04-7H20 СаС12-2Н20 Лимонная кислота Желез оа мм о-нийцитрат 1.5 0,04 0,075 0,036 0,006 0,006 г ЭДТА, дву натриевая 0,001 г магниевая соль Na2COs 0,02 г Смесь микроэлемен- 1,0 мл тов А5 (см. ниже) Деионизованная вода 1000 мл После автоклавирования и охлаждения рН среды должен быть 7,4. Смесь микроэлементов А5: НзВОз 2,86 мг/мл Na2Mo04-2H20 0,39 мг/мл МпС12-4Н20 1,81 мг/мл CuS04-5H20 0,079 мг/мл ZnS04-7H20 0,222 мг/мл Co(N03)2-6H20 0,0494 мг/мл 8.5.9. Желчно-эскулиновый агар (BBL или Difco) Раствор А: Мясной экстракт 3 г Пептон 5 г Агар 15 г Дистиллированная вода 400 мл Раствор В: Раствор С: Бычья желчь 40 г Цитрат железа 0,5 г Дистиллированная 400 мл Дистиллированная 100 мл вода вода Смешивают три раствора и смесь нагревают 10 мин при 100°С. Стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 50 °С. С соблюдением правил асептики добавляют 100 мл 1%-ного раствора эскулина, стерилизованного фильтрованием, и смесь разливают в стерильные пробирки для получения косяков. 8.5.10. Агар BMS, или картофельный агар [17] Отмытый, очищенный картофель, нарезанный ломтиками 200 г L-яблочная кислота 2,5 г КОН 2 г Нерафинированный тростниковый сахар 2,5 г Раствор витаминов (разд. 8.5.37) 1,0 мл Бромтимоловый синий (0,5% -ный спиртовой раствор) 2 капли Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Картофель в марлевом мешке кипятят 30 мин в 1 л воды. Полученный экстракт фильтруют через вату и фильтрат сохраняют. Яблочную кислоту растворяют в 50 мл воды и добавляют 2 капли бромтимолового синего и КОН, пока раствор яблочной кислоты не станет зеленым (рН 7,0). Этот раствор, а также тростниковый сахар, витамины и агар добавляют к картофельному фильтрату. Дистиллированной водой доводят объем раствора до 1 л, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.П. Модифицированный агар Борде —Жангу [3] 125 г отмытого, очищенного и нарезанного ломтиками картофеля в марлевом мешке погружают в смесь, состоящую из 10 мл глицерина и 500 мл воды. Варят картофель до мягкости и затем выжимают его через марлю в смесь воды с глицерином. Дают жидкости отстояться в высоком цилиндре до относительного просветления. Надосадочную жидкость декантируют и доводят ее объем до 1 л дистиллированной водой. Добавляют 5,6 г NaCl с нагреванием, а затем 22,5 г агара, который растворяют кипячением с постоянным перемешиванием. Смесь стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 45 °С. С соблюдением правил асептики добавляют 200 мл дефибринированной овечьей крови (разд. 20.3.7), перемешивают и разливают в чашки Петри. Основной агар Борде-Жангу производится фирмами BBL и Difco. 8.5.12. Агар с бриллиантовой зеленью (BBL или Difco) Панкреатический гидролизат казеина USP 5 г Пептический гидролизат животных тканей USP 5 г Дрожжевой экстракт 3 г NaCl 5 г Лактоза 10 г Сахароза 10 г Феноловый красный 0,08 г Бриллиантовая зелень 0,0125 г Агар 20 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,9. Кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.13. Бульон с желчью, лактозой и бриллиантовой зеленью Раствор В: Бычья желчь Дистиллированная вода 20 г 200 мл Раствор А: Лактоза 10 г Пептон 10 г Дистиллированная 500 мл вода Смешивают растворы А и В и доводят дистиллированной водой до 975 мл. Устанавливают рН 7,4, добавляют 13,3 мл 0,1%-ного водного раствора бриллиантовой зелени и дистиллированной водой доводят объем до 1 л. Смесь разливают в пробирки, содержащие перевернутые поплавки, и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5,14. Агар для бруцелл (BBL или Difco) Панкреатический гидролизат казеина 10 г Пептический гидролизат животных тканей 10 г Глюкоза 1 г Дрожжевой автолизат 2 г NaCl 5 г Бисульфит натрия 0,1 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.15. Среда CHSS для Spirillum volutans Кислотный гидролизат казеина, без витаминов и солей 2,5 г (ICN Nutritional Biochem Cleveland, Ohio) Янтарная кислота 1 г (NH4)3S04 1 г MgS04-7H20 1 г NaCl 0,1 г FeCl3-6H20 0,002 г MnS04H20 0,002 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0 с помощью 2 н. КОН. Для получения полужидких сред добавляют 1,5 г агара и кипятят до его растворения. Стерилизуют 20 мин при 121 °С. 8.5.16. Кровяной агар с цистином и теллуритом [3] Агар с экстрактом сердечной мышцы (основной кровя- 500 мл ной агар, разд. 20.3.31) Агар 2»5 г Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 56°С. С соблюдением правил асептики добавляют следующие ингредиенты: Дефибрииированная кроличья или овечья кровь 25 мл (разд. 20.3.7) 0,3%-ный раствор теллурита калия, стерилизованный 75 мл автоклавированием L-Цистин 22 мг Во время разлива в чашки Петри смесь помешивают, чтобы цистин оставался в суспендированном состоянии. 8.5.17. Агар Е [3] Папаиновый гидролизат соевой муки USP 20 г NaCl 5 г Агар 10 г Деионизованная вода 1000 мл Смесь нагревают до растворения ингредиентов, охлаждают и с помощью NaOH доводят рН до 7,4. Разливают и стерилизуют 15 мин при 121 °С, а затем охлаждают до 50 °С. К 65 мл раствора добавляют с соблюдением правил асептики 10 мл дрожжевого диализата (см. ниже), 25 мл лошадиной сыворотки, 2 мл пенициллина (10 000 ед./мл) и 1 мл 3,3%-ного ацетата таллия (стерилизованного фильтрованием). Среду разливают по 5 мл в чашки Петри (10X35 мм) и перед использованием инкубируют в течение ночи при комнатной температуре. Дрожжевой диализат: 450 г активных сухих дрожжей суспендируют в 1250 мл дистиллированной воды при 40 °С. Нагревают 5 мин при 121 °С и диали-зуют против 1 л дистиллированной воды в течение 2 дней при 4°С. Диализный мешок вместе с содержимым удаляют, а диализат стерилизуют 15 мин при 121 °С и хранят в морозильной камере. Двухфазная среда Для получения двухфазной среды в стерильные пробирки (16X25 мм) с завинчивающимися крышками с соблюдением правил асептики разливают по 3 мл Е-ага-ра. После затвердения на среду наслаивают 3 мл Е-бульона (разд. 8.5.18) и хранят пробирки при комнатной температуре. 8.5.18, Е-бульон [3] Папаиновый гидролизат соевой муки USP 20 г NaCl 5 г Глюкоза 10 г Феноловый красный, 2%-ный водный раствор 2 мл Деионизованная вода 1000 мл Доводят рН до 7,6, разливают и стерилизуют 15 мин при 121 °С. После охлаждения к бульону добавляют те же компоненты, что и в случае Е-агара (разд. 8.5.17). 8.5.19. Основная среда Гизбергера [83] NH4CI 1 г К2НР04 0,5 г MgS04 0,5 г Дистиллированная вода (см. примечание) 1000 мл Доводят рН до 7 и стерилизуют 15 мин при 121 °С. (Примечание: для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.) 8.5.20. Глюкозо-триптоновый агар [6] Триптон (Difco) или триптиказа 10 г Глюкоза 5 г Агар 15 г Бромкрезоловый фиолетовый 0,04 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,7, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С. 8.5.21. Среда для галофилов [65] Казаминовые 7,5 г КС1 2 г кислоты MgS04-7H20 20 г Дрожжевой 10 г FeCh 0,023 г экстракт NaCl 250 г Тринатрий- 3 г Дистиллиро- 1000 мл цитрат ванная вода fi. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И чистых КУЛЬТУР Перечисленные ингредиенты растворяют в 800 мл дистиллированной воды и доводят рН до 7,5—7,8 с помощью 1 н. КОН. Автоклавируют среду 5 мин при 120 °С и затем фильтруют для удаления осадка. Доводят рН до 7,4 с помощью 1 н. НС1, а объем среды — до 1000 мл и стерилизуют автоклавированием. Если необходима твердая среда, то добавляют 20 г агара на 1 л, кипятят до его растворения, а затем автоклавируют. Среду разливают в чашки Петри при 60—70 °С, чтобы предотвратить ее преждевременное отвердение. 8.5.22. Среда для Нyphomicrobium [9] К2НРО4 1,74 г NaH2P04-H20 1,38 г (NH4)2S04 0,5 г MgS04-7H20 0,2 г СаС12-2Н20 0,025 мг FeCl2-4H20 3,5 мг Метанол 5 мл КШз 5 г Раствор микроэлементов (см. ниже) 0,5 мл Деионизованная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0 с помощью NaOH. Среду, используемую для получения накопительных культур, не стерилизуют. Среду, используемую для выделения чистых культур, стерилизуют 15 мин при 121 °С перед добавлением метанола. Для приготовления твердой среды, используемой при выделении бактерий, добавляют 15 г агара на 1 л и исключают из смеси KN03. Перед добавлением метанола среду стерилизуют 15 мии при 121 °С. Для удаления кислорода из всех жидких сред перед использованием через них продувают азот. В анаэробных условиях KN03 в этих средах служит акцептором электронов. Раствор микроэлементов: ZnS04-7H20 50 мг MgCU-4H20 400 мг СоС12-6Н20 1 мг CuS04-5H20 0,4 мг |
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 |
Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb) |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [обратная связь] |