>15 мин при

Для приготовления среды растворы 1 и 2 объединяют с соблюдением правил асептики. Для получения твердой среды добавляют 20 г агара иа 1 л.

Среда В

К2НР04 0,8 г

КН2Р04 0,2 г

CaS04-2H20 0,05 г

MgS04-7H20 1.0,5 г

Стерилизуют 15 мин при 12 среды добавляют 20 г агара

FeS04-7H20 0,01 г

Дистиллиро- 1000 мл

ванная вода

;°С. Для получения твердой на 1 л.

8.5.6. Основная минеральная агаровая среда для целлюлолитических цитофаг [72)

(NH4)3S04 или 1 г СаС12 0,1 г

KN03 FeCl3 0,02 г

К2НР04 1 г Агар 10 г

MgS04 0,2 г Водопроводная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0—7,5, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.7. Основная солевая среда для Thermus [11]

Нитрилотриук- 100 мкг FeCl3 2800 нг

сусная кис- MnS04-H20 22 мкг

лота ZnS04.7H20 5 мкг

CaS04-2H30 60 мкг НзВОз 5 мкг

MgS04-7H30 100 мкг CuS04 160 нг

NaCl 8 мкг Na2Mo04-2H30 250 нг

KNOs 103 мкг СоС12-6Н20 460 нг

NaN03 689 мкг Деионизован- 1000 мл

Na2HP04 111 мкг ная вода

Доводят рН до 8,2 с помощью NaOH.

8.5.8. Среда BG-11 [59]

NaNOs

K2HP04-3H30

MgS04-7H20

СаС12-2Н20

Лимонная кислота

Желез оа мм о-нийцитрат

1.5 0,04 0,075 0,036 0,006

0,006 г

ЭДТА, дву натриевая 0,001 г

магниевая соль

Na2COs 0,02 г

Смесь микроэлемен- 1,0 мл

тов А5 (см. ниже)

Деионизованная вода 1000 мл

После автоклавирования и охлаждения рН среды должен быть 7,4.

Смесь микроэлементов А5:

НзВОз 2,86 мг/мл Na2Mo04-2H20 0,39 мг/мл

МпС12-4Н20 1,81 мг/мл CuS04-5H20 0,079 мг/мл

ZnS04-7H20 0,222 мг/мл Co(N03)2-6H20 0,0494 мг/мл

8.5.9. Желчно-эскулиновый агар (BBL или Difco)

Раствор А:

Мясной экстракт 3 г

Пептон 5 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 400 мл

Раствор В: Раствор С:

Бычья желчь 40 г Цитрат железа 0,5 г

Дистиллированная 400 мл Дистиллированная 100 мл

вода вода

Смешивают три раствора и смесь нагревают 10 мин при 100°С. Стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 50 °С. С соблюдением правил асептики добавляют 100 мл 1%-ного раствора эскулина, стерилизованного фильтрованием, и смесь разливают в стерильные пробирки для получения косяков.

8.5.10. Агар BMS, или картофельный агар [17]

Отмытый, очищенный картофель, нарезанный ломтиками 200 г

L-яблочная кислота 2,5 г

КОН 2 г

Нерафинированный тростниковый сахар 2,5 г

Раствор витаминов (разд. 8.5.37) 1,0 мл

Бромтимоловый синий (0,5% -ный спиртовой раствор) 2 капли

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Картофель в марлевом мешке кипятят 30 мин в 1 л воды. Полученный экстракт фильтруют через вату и фильтрат сохраняют. Яблочную кислоту растворяют в 50 мл воды и добавляют 2 капли бромтимолового синего и КОН, пока раствор яблочной кислоты не станет зеленым (рН 7,0). Этот раствор, а также тростниковый сахар, витамины и агар добавляют к картофельному фильтрату. Дистиллированной водой доводят объем раствора до 1 л, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.П. Модифицированный агар Борде —Жангу [3]

125 г отмытого, очищенного и нарезанного ломтиками картофеля в марлевом мешке погружают в смесь, состоящую из 10 мл глицерина и 500 мл воды. Варят картофель до мягкости и затем выжимают его через марлю в смесь воды с глицерином. Дают жидкости отстояться в высоком цилиндре до относительного просветления. Надосадочную жидкость декантируют и доводят ее объем до 1 л дистиллированной водой. Добавляют 5,6 г NaCl с нагреванием, а затем 22,5 г агара, который растворяют кипячением с постоянным перемешиванием. Смесь стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 45 °С. С соблюдением правил асептики добавляют 200 мл дефибринированной овечьей крови (разд. 20.3.7), перемешивают и разливают в чашки Петри. Основной агар Борде-Жангу производится фирмами BBL и Difco.

8.5.12. Агар с бриллиантовой зеленью (BBL или Difco)

Панкреатический гидролизат казеина USP 5 г

Пептический гидролизат животных тканей USP 5 г

Дрожжевой экстракт 3 г

NaCl 5 г

Лактоза 10 г

Сахароза 10 г

Феноловый красный 0,08 г

Бриллиантовая зелень 0,0125 г

Агар 20 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,9. Кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.13. Бульон с желчью, лактозой и бриллиантовой зеленью

Раствор В:

Бычья желчь Дистиллированная вода

20 г 200 мл

Раствор А:

Лактоза 10 г

Пептон 10 г

Дистиллированная 500 мл вода

Смешивают растворы А и В и доводят дистиллированной водой до 975 мл. Устанавливают рН 7,4, добавляют 13,3 мл 0,1%-ного водного раствора бриллиантовой зелени и дистиллированной водой доводят объем до 1 л. Смесь разливают в пробирки, содержащие перевернутые поплавки, и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5,14. Агар для бруцелл (BBL или Difco)

Панкреатический гидролизат казеина 10 г

Пептический гидролизат животных тканей 10 г

Глюкоза 1 г

Дрожжевой автолизат 2 г

NaCl 5 г

Бисульфит натрия 0,1 г

Агар 15 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.15. Среда CHSS для Spirillum volutans

Кислотный гидролизат казеина, без витаминов и солей 2,5 г

(ICN Nutritional Biochem Cleveland, Ohio)

Янтарная кислота 1 г

(NH4)3S04 1 г

MgS04-7H20 1 г

NaCl 0,1 г

FeCl3-6H20 0,002 г

MnS04H20 0,002 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0 с помощью 2 н. КОН. Для получения полужидких сред добавляют 1,5 г агара и кипятят до его растворения. Стерилизуют 20 мин при 121 °С.

8.5.16. Кровяной агар с цистином и теллуритом [3]

Агар с экстрактом сердечной мышцы (основной кровя- 500 мл

ной агар, разд. 20.3.31)

Агар 2»5 г

Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121 °С и охлаждают до 56°С.

С соблюдением правил асептики добавляют следующие ингредиенты:

Дефибрииированная кроличья или овечья кровь 25 мл

(разд. 20.3.7)

0,3%-ный раствор теллурита калия, стерилизованный 75 мл

автоклавированием

L-Цистин 22 мг

Во время разлива в чашки Петри смесь помешивают, чтобы цистин оставался в суспендированном состоянии.

8.5.17. Агар Е [3]

Папаиновый гидролизат соевой муки USP 20 г

NaCl 5 г

Агар 10 г

Деионизованная вода 1000 мл

Смесь нагревают до растворения ингредиентов, охлаждают и с помощью NaOH доводят рН до 7,4. Разливают и стерилизуют 15 мин при 121 °С, а затем охлаждают до 50 °С. К 65 мл раствора добавляют с соблюдением правил асептики 10 мл дрожжевого диализата (см. ниже), 25 мл лошадиной сыворотки, 2 мл пенициллина (10 000 ед./мл) и 1 мл 3,3%-ного ацетата таллия (стерилизованного фильтрованием). Среду разливают по 5 мл в чашки Петри (10X35 мм) и перед использованием инкубируют в течение ночи при комнатной температуре.

Дрожжевой диализат:

450 г активных сухих дрожжей суспендируют в 1250 мл дистиллированной воды при 40 °С. Нагревают 5 мин при 121 °С и диали-зуют против 1 л дистиллированной воды в течение 2 дней при 4°С. Диализный мешок вместе с содержимым удаляют, а диализат стерилизуют 15 мин при 121 °С и хранят в морозильной камере.

Двухфазная среда

Для получения двухфазной среды в стерильные пробирки (16X25 мм) с завинчивающимися крышками с соблюдением правил асептики разливают по 3 мл Е-ага-ра. После затвердения на среду наслаивают 3 мл Е-бульона (разд. 8.5.18) и хранят пробирки при комнатной температуре.

8.5.18, Е-бульон [3]

Папаиновый гидролизат соевой муки USP 20 г

NaCl 5 г

Глюкоза 10 г

Феноловый красный, 2%-ный водный раствор 2 мл

Деионизованная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,6, разливают и стерилизуют 15 мин при 121 °С. После охлаждения к бульону добавляют те же компоненты, что и в случае Е-агара (разд. 8.5.17).

8.5.19. Основная среда Гизбергера [83]

NH4CI 1 г

К2НР04 0,5 г

MgS04 0,5 г

Дистиллированная вода (см. примечание) 1000 мл

Доводят рН до 7 и стерилизуют 15 мин при 121 °С. (Примечание: для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.)

8.5.20. Глюкозо-триптоновый агар [6]

Триптон (Difco) или триптиказа 10 г

Глюкоза 5 г

Агар 15 г

Бромкрезоловый фиолетовый 0,04 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Доводят рН до 6,7, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 °С.

8.5.21. Среда для галофилов [65]

Казаминовые 7,5 г КС1 2 г

кислоты MgS04-7H20 20 г

Дрожжевой 10 г FeCh 0,023 г

экстракт NaCl 250 г

Тринатрий- 3 г Дистиллиро- 1000 мл

цитрат ванная вода

fi. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И чистых КУЛЬТУР

Перечисленные ингредиенты растворяют в 800 мл дистиллированной воды и доводят рН до 7,5—7,8 с помощью 1 н. КОН. Автоклавируют среду 5 мин при 120 °С и затем фильтруют для удаления осадка. Доводят рН до 7,4 с помощью 1 н. НС1, а объем среды — до 1000 мл и стерилизуют автоклавированием. Если необходима твердая среда, то добавляют 20 г агара на 1 л, кипятят до его растворения, а затем автоклавируют. Среду разливают в чашки Петри при 60—70 °С, чтобы предотвратить ее преждевременное отвердение.

8.5.22. Среда для Нyphomicrobium [9]

К2НРО4 1,74 г

NaH2P04-H20 1,38 г

(NH4)2S04 0,5 г

MgS04-7H20 0,2 г

СаС12-2Н20 0,025 мг

FeCl2-4H20 3,5 мг

Метанол 5 мл

КШз 5 г

Раствор микроэлементов (см. ниже) 0,5 мл

Деионизованная вода 1000 мл

Доводят рН до 7,0 с помощью NaOH. Среду, используемую для получения накопительных культур, не стерилизуют. Среду, используемую для выделения чистых культур, стерилизуют 15 мин при 121 °С перед добавлением метанола. Для приготовления твердой среды, используемой при выделении бактерий, добавляют 15 г агара на 1 л и исключают из смеси KN03. Перед добавлением метанола среду стерилизуют 15 мии при 121 °С. Для удаления кислорода из всех жидких сред перед использованием через них продувают азот. В анаэробных условиях KN03 в этих средах служит акцептором электронов.

Раствор микроэлементов:

ZnS04-7H20 50 мг

MgCU-4H20 400 мг

СоС12-6Н20 1 мг

CuS04-5H20 0,4 мг