Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

ислот и аминов, а также образованием H2S из CaS04, обеспечивает рост многих микроорганизмов. При этом фототрофные серобактерии образуют характерные пурпурные, красные или зеленые пятна на стенках цилиндра либо слой или полосы в колонке над границей раздела фаз осадка и воды. При сборе бактерий со стеклянной поверхности или из отдельных слоев для микроскопирования, выделения или дальнейшего накопления в жидких культурах пользуются пастеровскими пипетками. Можно также последовательно снимать порции осадка ложечкой или шпателем. Накопительные культуры можно также получать, используя синтетические жидкие среды. Среды для отдельных видов фототрофных серобактерий подбирают, варьируя условия их культивирования, длину волны света, его интенсивность, температуру инкубации, а также донор электронов и его концентрацию. Более детальное обсуждение возникающих при этом проблем можно найти в очень полезной работе ван Нила [76].

8.1.21. Ультрафиолетовое облучение

при получении культур цианобактерий

Очень часто трудно получить культуры цианобактерий, свободные от посторонних микроорганизмов, которые нередко проникают в слизистые чехлы, окружающие клетки и нити цианобактерий. Герлоффу и др. [22]' удалось очистить культуры цианобактерий от сопутствующих форм следующим способом. Разведенную суспензию цианобактерий помещали в кварцевую камеру и облучали ультрафиолетовым светом (275 нм), излучаемым покрытой кварцевой рубашкой ртутной лампой. Во время облучения суспензию постоянно перемешивали. При правильно выбранном времени экспозиции сопутствующие микроорганизмы погибали, тогда как цианобактерий оставались жизнеспособными. В процессе облучения периодически отбирали пробы и готовили из них большое количество разведений. Разведенные культуры, в которых выявлялся рост цианобактерий, проверяли на присутствие посторонних форм, микроскопируя пробы, а также высевая их в разные среды.

Одним из недостатков этого метода является то, что в чистой культуре могут содержаться цианобактерий, у которых в результате ультрафиолетового облучения возникли мутации.

8.1.22. Ультразвуковая обработка

при получении культур Sporocytophaga myxococcoides

Накопительные культуры образующей микроцисты и целлюлолитической бактерии S. myxococcoides можно получить, исходя из наличия в жизненном цикле этого организма форм, устойчивых к ультразвуку (Leadbet-ter, Bacteriol. Proc, p. 42, 1963). 100 мл среды для Spo8. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И чистых КУЛЬТУР

rocytophaga (разд. 8.5.47) помещают в 500-миллилит-ровую колбу Эрленмейера и вносят в нее примерно 0,1 г почвы, ила или растительного материала. После инкубации в течение 7—10 дней при 30 °С с периодическим перемешиванием отбирают 5 мл культуры, обрабатывают ее ультразвуком в течение 15—30 с и затем высевают в другую колбу с такой же средой. Через 5— 7 дней среда приобретает характерный желтый оттенок. С помощью фазово-контрастной микроскопии находят микроцисты и вегетативные клетки на волокнах целлюлозы и вокруг них. Часть этой культуры вновь обрабатывают ультразвуком и затем для получения отдельных колоний используют метод посева разливом в чашки, как описано в разд. 8.2.25.

8.1.23. Использование антисывороточной агглютинации при получении культур бактерий

Использование антисыворотки может обогатить минорную фракцию в популяции, состоящей из двух видов микроорганизмов. При исследовании смешанной культуры, в которой присутствуют два вида морской спириллы — крупные и мелкие, Линн и Криг [45] обнаружили, что мелких спирилл значительно больше. Это делало невозможным получение отдельных колоний крупных спирилл методом посева в чашки. Более того, для этих целей не подходил ни один из многочисленных методов селекции. Для получения накопительных культур крупной спириллы авторы выделили мелкую спириллу и использовали ее для иммунизации кролика. Когда полученную антисыворотку добавили к смешанной культуре, мелкие спириллы агглютинировали и осели на дно пробирки. Для получения отдельных колоний методом посева в чашки использовали надосадочную жидкость, содержащую теперь много крупных спирилл.

8.2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

8.2.1. Щелочные условия инкубации при получении культур Mycobacterium tuberculosis [20]

В центрифужную стерильную пробирку (емкостью 50 мл) с завинчивающейся крышкой, содержащую 10 мл

раствора М-ацетил-Ь-цнстеина в NaOH (разд. 8.5.36), добавляют 10 мл исследуемой мокроты. Крышку завинчивают, хорошо перемешивают содержимое в миксере Vortex в течение 5—20 с и оставляют пробирку на 15 мин при комнатной температуре. N-ацетил-Ь-цистеин является муколитическим веществом, превращающим вязкую мокроту в жидкую, водянистую массу. Гидро-ксид натрия разрушает многие примеси, присутствующие в мокроте, тогда как клетки М. tuberculosis относительно устойчивы к воздействию щелочи. Для нейтрализации гидроксида натрия в пробирку добавляют стерильный 0,067 М фосфатный буфер, не доливая до края 1,3 см, а затем центрифугируют 15 мин при 1800— 2400 g, чтобы сконцентрировать микобактерии, и удаляют надосадочную жидкость. К осадку добавляют 1 мл стерильного 0,2%-ного бычьего сывороточного альбумина и осторожно перемешивают. Эту суспензию используют для инокуляции соответствующих культуральных сред (разд. 8.5.26).

8.2.2. Щелочные условия инкубации для получения культур вибрионов [37]

Для получения накопительных культур Vibrio chole-гае и V. parahaemolyticus клинический материал (жидкий стул или соскобы из прямой кишки) сеют легким штрихом на поверхность неселективной агаровой среды, например питательного агара (разд. 20.3.25), и густо рассевают по селективной среде типа агара TCBS (разд. 8.5.50). Материал, полученный из мазков жидкого кала, инокулируют также в питательный бульон (1% пептона, рН 8,4—8,5). В случае выделения V. parahaemolyticus к этому пептонному бульону добавляют 3% NaCl. При высоких значениях рН агара TCBS и питательного бульона рост большинства посторонних бактерий подавляется. В случае V. cholerae инкубация в бульоне продолжается от 6 до 8 ч при 35 °С, после чего делают пересев штрихом на неселективную и селективную агаровые среды. Для V. parahaemolyticus инкубация в бульоне продолжается ночь, после чего делают пересев на агар TCBS. Колонии V. cholerae в чашках имеют желтый цвет (сбраживают сахарозу) и оксидазоположительны. Колонии V. parahaemolyitcus имеют голубовато-зеленый цвет и также оксидазопополейте льны.

8.2.3. Кислые условия инкубации

для получения культур лактобацилл [46]

Для выделения лактобацилл из сыров типа Чеддер делают посев штрихом из разведений на модифицированную среду Рогозы (разд. 8.5.33). Эта среда за счет ацетатной буферной системы имеет рН 5,35. При этих значениях рН такие лактобациллы, как L. casei и L. plantarum, способны образовывать колонии, тогда как обычная молочнокислая бактерия Streptococcus lac-tis не растет.

8.2.4. Кислые условия инкубации

для получения культур Thiobacillus thiooxidans [78]

Пробы почвы, ила или воды (лучший источник — морской ил) вносят в среду для Т. thiooxidans (разд. 8.5.53). После 3—4 дней инкубации рН должен снизиться до 2,0, при котором растут преимущественно эти кислотоустойчивые микроорганизмы. Очистку культур производят путем посева штрихом на твердую среДУ8.2.5. Ингибирование теллуритом

для получения культур коринебактерий

и некоторых стрептококков

В соответствующих концентрациях теллурит калия подавляет рост грамотрицательных бактерий и большинства грамположительных бактерий. Для селекции таких коринебактерий как С. diphtheriae, к кровяному агару с цистином добавляют калиевую соль теллурита в концентрации 0,0375% (разд. 8.5.16). В результате восстановления теллурита колонии коринебактерий при обретают серый или черный цвет. Для селекции некоторых стрептококков (S. mitts, S. salivarius и энтерококков) используют калиевую соль теллурита в концентрации 0,001%, которую добавляют к специальной среде с агаром (разд. 8.5.31). 5. mitis образуют очень мелкие синие колонии, 5. salivarius — более крупные синие колонии типа «приклеенной капли», а энтерококки — небольшие черно-синие колонии.

8.2.6. Ингибирование таллием для получения культур микоплазм и энтерококков [10, 38]

Для выделения микоплазм из дыхательных путей к Е-агару (разд. 8.5.17) и Е-бульону (разд. 8.5.18) добавляют ацетат таллия в концентрации 0,032%. Экстракты проб тампоном переносят в жидкую среду (2 мл), содержащую соевую муку и гидролизат казеина (разд. 8.5.45) и 0,5% бычьего сывороточного альбумина. 0,1 мл суспензии инокулируют в двухфазную среду Е (разд. 8.5.17), а также в чашки с агаром, приготовленным на среде Е. Культуру выращивают в аэробных условиях при 37 °С, поместив чашки в закрытые контейнеры. В течение 30 дней с помощью препаровальной лупы (Х20—60) следят за появлением мелких колоний (10— 100 мкм в диаметре), напоминающих яичницу-глазунью. В случае двухфазной культуры наблюдают в микроскоп через боковую стенку пробирки, стараясь обнаружить так называемые «сферулы», т. е. колонии в жидкой среде. Контролируют также подкисление среды, сопровождающееся пожелтением индикаторного красителя фенолового красного. Для получения отдельных колоний содержимое двухфазной среды инокулируют в чашки с агаром Е.

Энтерококки выделяют на агаровой среде (разд. 8.5.51) с добавлением ацетата таллия (0,1%).

8.2.7. Ингибирование селенитом для получения культур салмонелл

К F-бульону (разд. 8.5.44) добавляют кислый селенит натрия в концентрации 0,4%. В этих условиях временно прекращается рост колиподобных бактерий, но салмонеллы продолжают расти. Пробы из кала рассева-ют штрихом на селективные и неселективные агаровые среды, а также вносят большое количество пробы в F-бульон (1 г или 1 мл на 8—10 мл бульона). Инкубацию проводят при 35—37 °С в течение 12—16 ч, а затем делают пересев в чашки с агаром.

8.2.8. Ингибирование фенилэтанолом для получения культур стрептококков и стафилококков

При добавлении в агаровую среду (разд. 8.5.40) фе-нилэтанола в концентрации 0,25% подавляется рост грамотрицательных бактерий, главным образом Proteus, тогд

страница 55
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(29.05.2017)