Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

ердые среды. Для видов Bacillus наиболее подходящей средой является питательный бульон с 0,5% дрожжевого экстракта, а для Clostridium— восстановленный крахмальный бульон (бульон PY+1% растворимого крахмала; разд. 20.3.28).

Для некоторых спорообразующих бактерий иногда приходится изменять режим тепловой обработки, поскольку эндоспоры разных штаммов могут различаться по термоустойчивости. Поэтому, если не удается получить удовлетворительных результатов при стандартной температуре 80 °С, ее следует снизить до 75 или 70 °С.

8.1.7. Нагревание для получения культур термофильных спорообразующих бактерий [6]

Термофильные спорообразующие бактерии встречаются в различных сладких веществах, используемых при изготовлении мороженого. Обычно готовят 20%-ную пробу исследуемого объекта (свекловичный или тростниковый сахар, лактоза, церелоза, искусственный, кукурузный или кленовый сироп, кукурузный или жидкий сахар, мед), выдерживают ее 5 мин при 100°С и затем доводят стерильной водой до конечной концентрации 13,3%.

Получение культур термофильных аэробных слабоацидофильных микроорганизмов

2 мл прокипяченного раствора сахара наносят на поверхность глюкозо-триптонового агара в чашках Петри (разд. 8.5.20) и инкубируют 48 ч во влажной камере при 55 °С. Характерные колонии круглой формы (2— 5 мм в диаметре) с темной центральной частью, окруженные желтым ореолом, растут на поверхности агара. Колонии, растущие под поверхностью агара, более компактны и имеют размеры булавочной головки. Fix следует пересеять на глюкозо-триптоновый агар.

Получение культур термофильных анаэробов, образующих сероводород

Пробы прокипяченного раствора сахара вносят в глубокие пробирки, содержащие сульфитный агар (1% триптона или триптиказы, 0,1% сульфита натрия и 2% агара). Перед инокуляцией агар в пробирках должен быть расплавлен и охлажден до 55 °С. Содержимому пробирок даюг застыть и затем инкубируют при 55°С в течение 72 ч. Бактерии, выделяющие сероводород, образуют в среде темные сферические зоны.

8.1.8. Нагревание для получения культур

Bacillus fastidiosus [41]

0,2 г почвы добавляют к 50 мл среды, содержащей 1% мочевой кислоты и 0,1% К2НРО4 в дистиллированной воде. Пробу инкубируют с встряхиванием в течение 48 ч, нагревают до 80 °С и выдерживают 15 мин при этой температуре, а затем переносят в чашку с агаром, приготовленным на этой же среде. В этом методе учитывается не только термоустойчивость В. fastidiosus, но также и то, что данная бактерия способна использовать источники углерода и энергии, недоступные другим микроорганизмам.

8.1.9. Нагревание для получения культур

Bacillus pasteurii [82]

Споры разлагающей мочевину бактерии В. pasteurii обладают высокой термоустойчивостью и способны расти на средах с таким значением рН, при котором большинство других видов не растет. Последнее свойство используется в описываемом ниже методе. Для роста В, pasteurii значение рН должно быть выше 8. После нагревания суспензии почвы (для сохранения исключительно спор) пробы инкубируют при 30 °С в щелочной накопительной среде (1% дрожжевого экстракта и 5% мочевины), простерилизованной фильтрованием. После завершения роста культуру пересевают на твердую щелочную среду Уилли и Стокса (разд. 8.5.58) для получения отдельных колоний.

8.1.10. Использование роения клеток Clostridium tetani для получения их культур [71]

Пробы из почвы, испражнений животных и клинического материала инокулируют в небольшой участок свежеприготовленного кровяного агара (разд. 20.3.7). Чашки инкубируют при 37 °С в анаэростате в течение

1 дня и затем внимательно исследуют поверхность агара на наличие так называемой зоны роящихся клеток (швармеров), которые в виде тонкой пленки распространяются за пределы зоны инокуляции. Для того чтобы убедиться в существовании процесса роения, иногда полезно поскрести иглой поверхность агара. Отбирают пробы с края зоны роения и переносят их в бульон, а затем рассевают по поверхности твердой среды (5% агара) для получения отдельных колоний.

8.1.11. Использование подвижности трепонем для получения их культур [24—26, 61—63]

В центре соответствующей агаровой среды (разд. 8.5.42), находящейся в чашке Петри или в мензурке, вырезают углубление не менее 7 мм глубиною и 2—10 мм в диаметре (углубление не должно достигать дна). В это углубление вносят пробы, полученные из ротовой полости, кишечного содержимого или каловых масс. Крупные углубления (диаметр 10 мм) инокулиру' ют 0,2 мл образца, а в небольшие углубления (диаметр

2 мм) пробу вносят косым уколом в их стенку. Важно не допускать попадания проб на поверхность агара. Сразу же после внесения проб чашки помещают в ана-эростат (разд. 6.6.3) и инкубируют их от 4 до 7 дней при 37 °С. В отличие от большинства других бактерий трепонемы могут мигрировать через агаровую среду.

Там, где они растут, на некотором расстоянии от углублений наблюдается помутнение среды. Из периферической зоны помутневшей области отбирают часть выросшей культуры и переносят ее в соответствующую предварительно восстановленную полужидкую среду (например, бульон, содержащий 0,15% агара). Поскольку можно ожидать присутствия нескольких видов тре-понем, субкультуру рассевают по стенке вращающейся пробирки с предварительно восстановленной средой для получения отдельных колоний. Колонии образуют в среде мутные белесые плотные зоны.

8.1.12. Использование подвижности клеток Spirillum votutans для получения их культур [30, 60J

Для получения накопительной культуры гигантских микроаэрофильных бактерий 5. volutans готовят настой сена на стоячей прудовой воде. После появления на поверхности настоя пены из-под нее отбирают пробы и исследуют их. Ищут очень крупные спириллы (1,4— 1,7 мкм в диаметре и до 60 мкм в длину) с биполярно расположенными пучками жгутиков, которые хорошо видны при микроскопии в темном поле. Для получения накопительной культуры немного сенного настоя вносят в почвенную среду Прингсхейма (разд. 8.5.41) и инкубируют при комнатной температуре. Однако даже при такой процедуре накопления другие бактерии явно количественно превосходят S, volutans. S. volutans выделяют также с помощью метода капиллярной трубки, впервые предложенного Гезбергером [60]. Размягчают на огне центральную часть стерильной стеклянной трубки (диаметр 5 мм), заткнутой ватными пробками. На размягченном участке трубку зажимают пинцетом с квадратными кониами так, чтобы она почти полностью была пережата. Вновь нагревают уплощенную часть трубки и быстро вытягивают ее, чтобы образовался длинный (15—30 см) капилляр шириной 0,1—0,3 мм, имеющий овальное поперечное сечение. Концы капилляра запаивают на огне, а затем с помощью стерильного пинцета ломают капилляр у одного конца и втягивают в него на длину от 10 до 20 см стерильную почвенную среду Прингсхейма (супернатант). После этого капилляр погружают в накопительную культуру и набирают в него еще 2—4 см этой культуры, убедившись, что между стерильной средой и культурой нет воздушного пространства. Кончик капилляра запаивают, оставляя небольшое воздушное пространство, и помещают капилляр на предметный столик микроскопа (100Х)- В накопительной культуре 5. volutans часто способны двигаться быстрее, чем другие бактерии, и, следовательно, они быстрее достигают отдаленного конца капилляра. Как только спириллы достигнут этого конца, капилляр за ними ломают, переносят их в пробирку с полужидкой средой CHSS (разд. 8.5.15) и инкубируют при 30°С. Чистоту выделенной культуры проверяют с помощью фазово-контрастной микроскопии.

8.1.13. Использование скользящей подвижности Cytophaga и Ftexibacter для получения их культур

Разведенные пробы (из почвы, воды или помета животных, контактировавшего с почвой) рассевают на поверхности агаровой среды с низкой концентрацией питательных веществ, например с 0,1% тритона или триптиказы, либо с разведенным в 10 раз питательным агаром. В другом варианте пробы, представляющие собой измельченные листья наземных растений, водорослей или морских растений, размазывают по поверхности обедненного агара. Cytophaga и Ftexibacter обладают способностью мигрировать по поверхности твердой среды. Их можно обнаружить по появлению тонких и часто почти полупрозрачных колоний с пальцевидными выступами, которые разрастаются далеко за зону нанесения исходного материала. Из этих колоний получают субкультуру. Для подавления роста других бактерий часто оказывается полезным включение в агаровую среду пенициллина G (15 ед/мл) и хлорамфенико-ла (5 мкг/мл) [79].

8.1.14. Использование скользящей подвижности Beggiatoa для получения их культур [19, 64]

Beggiatoa образует нити, состоящие из бесцветных клеток. Такие нити способны скользить по поверхности. Beggiatoa встречается в аэробных условиях в пресной

& ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И чистых КУЛЬТУР"

или морской воде, богатой H2S, причем она способна окислять сульфид в элементную серу, которая накапливается в клетках.

Для получения накопительных культур сначала готовят экстрагированное сено. Для этого сено измельчают и кипятят в больших объемах воды. В процессе экстракции воду трижды меняют. Вода в последней порции должна быть янтарного цвета. Сено подсушивают и помещают на подносе в термостат (37 °С) для окончательного высушивания.

Среду для получения накопительных культур, состоящую из 0,8%-ной суспензии высушенного экстрагированного сена в 70 мл водопроводной воды, вносят в 125-миллилитровые колбы Эрленмейера и закрывают ватными пробками. Затем ее стерилизуют автоклавиро-ванием, добавляют к ней 5 мл суспензии ила из пруда, озера или ручья, содержащей гниющий растительный материал, и инкубируют при 25 'С в течение 10 дней.

О процессе накопления бактерий свидетельствует появление резкого запаха H2S и образование белой пленки на поверхности среды и на стенках колб. Пленку исследуют на наличие характерных нитей Beggiatoa. Часть пленки смывают несколькими порциями стерильной водопроводной воды и затем наносят смывы на поверхность стерильной агаровой среды, содержащей 1 % агара и 0,2% мясного экстракта. Пробы инкубируют при температуре 28°С д

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(29.05.2017)