Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

также 40 мг L триптофана и 500 мг L-гЛутамииовой кислоты. Гид-ролнзат казенна (4 г/л) можно заменить смесью аминокислот

Z На 1 л среды добавляют по 0,1 г L-цистина и L триптофана

аа Добавляют (мг/л) L цнстина (30), DL нзолейцнна (600), L-глутамина (100), L-аспарагина (200), глицнна (100), DL аланина (200), DL фенилаланнна (400), L-тирозина (50), L гистидина HCI (150) DL лейцина (800), L аргинина (200), DL метионина (200) и DL треонина (400)

Добавчяют (мг/л) L аргинина (70) L аспарагиновой кислоты (60), L цистеина (I) L глутаминовой кислоты (75), L глутамина (100) DL изолейцина (40) L метионина (15), DL фенилаланнна (50) и DL триптофана (20)

сс Гидролизат казеина можно заменить аминокислотами Хотя на среде с аминокислотами можно производить серии ный пересев культур интенсивность роста некоторых штзм мов при этом все же значительно ниже чем в присутствии гидролизата казенна

^ Добавляют к среде аденнн гуаиин, урацнл и ксангш до конечной концентрации 0 5 мг/100 мл

На 1 л среды добавляют по 20 мг сернокислого аденн на, гуаннна НС1, урацила, ксантнна и тимина

" На 1 л среды добавляют по 100 мг аденознна, гуанозп на и цнтндина

^ На 1 л среды добавляют 1 мг адеиозинтрнфосфата, по

> О -*

Ь4

•о

О

с> -i to

СЛ

200 мг DL-метионина, L-гистндинаНС!, L-аргннина-НС! и DL-трнптофана.

J Добавляют смесь аминокислот, исходя нз процентного соотношения аминокислот в казение [76].

' Добавляют (г/л): DL-аланнна (4); DL-аспарагнновой кислоты (1,6); L-глутамнновой кислоты (2); Ь-аргинина-НС1 и Ь-лнзина-НС1 (по 0,8); L-гнстидина (0,4); DL-изолейцина (0,8); L-лейцнна (0,4); DL-метионнна и DL-фенилалаинна (по 0,8); L-пролина (0,4); DL-треонииа (0,8); L-тнрозина (0,4); DL-валииа и DL-триптофаиа (по 0,8); L-цистииа (0,4); DL-серниа (0,8) и глицина (0,4). Вместо смесн аминокислот можно использовать кислотный гидролизат казеина. 10%-ный раствор казамнновых кислот обрабатывают активированным углем и добавляют к нему следующие аминокислоты (мг/л): L-трнптофан (2000); L-феннлаланин и L-тирознн (по 400); L-пролнн и DL-гистидин-НС! (по 200) и L-цнстенн (1000). Для конечной среды используют концентрацию 5 мг/100 мл.

U На 1 л среды добавляют 0,7 г L-цистенна, 2 г DL-валина, 0,6 г L-метионнна, 0,5 г L-тнрозина, 0,75 г L-пролина, 5 г L-аспарагнновой кислоты, 7,5 г L-глутамииовой кислоты и 2.3 мг Р-аланина.

'На 1 л среды добавляют 1,5 г L-глутаминовой кислоты и 1 г L-аргннниа.

is)

, На 1 л среды добавляют по 0,5 г L-глутаминовой кислоты. L-аргнннна, L-пролина и L-гистидина.

* Рост культур стимулируется смесью следующих аминокислот (каждая в концентрации 0,7 г/л): L-глутаминовая кислота, L-аспарагин, DL-Ct-аланин, L-глутамнн, L-гистиднн л DL-аспарагнновая кислота. Раствор фракции V бычьего альбумина после стерилизации фильтрованием инактивируют нагреванием до 56 "С и затем добавляют к стерильной среде -до конечной концентрации 0,01%.

0,3 мг гуанина и гипоксантииа и по 5 мг РНК и ДНК.

hh Добавляют (мкг/л): рибофлавина (1000); биотииа (100); тиамниа-НС] (1000) и DL-липоевой кислоты (I).

11 Добавляют (мкг/л)- тиамина (80); пиридоксаля (40); пиридоксамииа (4); пиридоксина (4); л-аминобензойной кислоты (40); фолиевой кислоты (4); холина (80); инозита (2000); биотина (0,1); витамина Ви (0,4) и пантотената кальция (80).

kk

Н Добавляют (мкг/л): тиамнна-НС1 (1000); л-аминобен-зойной кислоты (500); инкотнновой кислоты (1000); холнн-хлорида и инозита (по 10 000); пиридоксина (500); пиридокса-ля-НС1 и пантотената кальция (по 1000); бнотина (20); фолиевой кислоты и витамина В12 (по 10) и рибофлавина (500). Витамины ие являются необходимыми для всех видов, кроме одного штамма, который в отсутствие аминокислот нуждается в никотиновой кислоте.

На 1 л среды добавляют 2,3 мг никотиновой кислоты.

На 1 л среды добавляют I мкг витамина Ви, 0,5 мг фолиевой кислоты, по 2 мг л-амииобензойиой кислоты, тн-амнна-HCl и рибофлавина, по 1 мг никотиновой кислоты, ннкотннамида, пнридоксаля-HCl и пнрндоксамина-2НС1, по 2 мг пантотената кальция и инозита и по 0,1 мг DL-липое-вой кислоты и биотнна. Бнотнн, инознт, никотиновая кислота, пнрндоксаль и рибофлавин необходимы для роста бактерий.

тт На 1 л среды добавляют 1 мкг бнотина и по 1 мг пантотената кальция, тиамина и л-аминобензойной кислоты.

Добавляют (мг/л)- никотиновой кислоты, рибофлавина, пиридоксина -НО, пиридоксаля НС1 и тиамина (по 2,5); фолииовой кислоты (1,0).

00 Добавляют (мг/л): холнна (0,5); биотина, фолневой кислоты, тиамина и пантотената кальция (по 0,01); пиридоксина (0,05).

(7)

S О X S

л м о

и

н О чэ Е

7.2.2. Комплексные и полусинтетические среды

В табл. 7.2—7.7 приведен состав комплексных (кодовая буква А) и полусинтетических (кодовая буква В) сред для бактерий, перечисленных в табл. 7.1. Имеющиеся в продаже готовые среды помечены звездочкой. Для получения твердой среды к бульонной среде добавляют 1,5—2% агара. Дополнительные компоненты сред и детальные пояснения даны в сносках, обозначенных строчными латинскими буквами.

7.2.3. Синтетические среды

В табл. 7.8—7.13 приведен состав синтетических сред (кодовая буква С) и несколько полусинтетических сред (кодовая буква В) для бактерий, перечисленных в табл. 7.1. Дополнительные компоненты сред и детальные пояснения даны в сносках, обозначенных строчными латинскими буквами.

7.3. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕЩЕСТВ

ПО РОСТУ КУЛЬТУР

Бактерии широко используются для количественного анализа большого числа веществ, которые способствуют их росту или ингибируют его: витаминов, аминокислот, микроэлементов, пиримидиновых оснований, полиаминов, дезоксирибонуклеозидов, дезоксирибонуклео-тидов, лекарственных препаратов, антибиотиков и других химиотерапевтических агентов [70, 105а]. Хотя инструментальные методы (например, анализ аминокислот с помощью аминокислотного анализатора) частично заменили некоторые из бактериологических методов, последние еще используются довольно часто. В некоторых случаях (например, при определении витамина В6) наблюдается различная чувствительность к разным формам витамина, поэтому такой анализ нелегко заменить другими методами. До гех пор пока не удастся выделить и охарактеризовать фактор роста, его влияние на рост соответствующего организма часто служит единственным показателем при последующем выделении этого фактора из природного материала.

Бактериологические анализы в принципе основаны на линейной зависимости интенсивности (но не скорости) роста микроорганизмов при увеличении количества лимитирующего питательного вещества в ограниченном диапазоне.

Разброс результатов при бактериологическом анализе обычно составляет ±10%, однако в тщательно контролируемых условиях он может уменьшаться до ±3%. В целом количественный анализ необходимого питательного вещества можно провести с более высокой степенью точности, чем количественный анализ стимулирующего фактора.

Для количественного анализа витаминов и аминокислот наиболее пригодны штаммы родов Lactobacillus, Streptococcus и Pedlococcus, поскольку для их роста требуются сложные питательные смеси, т. е. в их ростовую среду необходимо добавлять большое число компонентов. Эти микроорганизмы можно использовать для количественного анализа нескольких витаминов и аминокислот. Например, метод анализа с использованием Streptococcus equinus АТСС 8042 (ранее известного как Leuconostoc mesenteroides Р-60) позволяет определить все аминокислоты, кроме аланина [216]. Алании можно определить с помощью этой же среды, если к ней добавить фолиновую кислоту (см. сноску b в табл. 7.12) и в качестве тест-бактерии использовать P. cerevisiae 8081.

Детали метода бактериологического анализа можно проиллюстрировать на примере работы Стила и др. [216], в которой для определения аргинина используется 5. equinus.

7.3.1. Аминокислоты (аргинин)

Аргинин — одна из семнадцати аминокислот, определяемых с помощью 5. equinus. Для других аминокислот и витаминов приемы определения сходны. Ссылки на специфические методы, используемые для определения других факторов роста, даны в обзоре Гирарда и Снелла [70]. Для изучения путей синтеза и распада витаминов и аминокислот успешно используют мутанты бактерий — ауксотрофы по одному или нескольким веществам.

Организм

S. equinus АТСС 8042 получен из Американской коллекции типовых культур (12301 Parklawn Drive Rock-ville, MD 20852). Основную культуру бактерий поддерживают в столбиках со средой, состоящей из 1,5% агара, 1 % глюкозы и 1 % дрожжевого экстракта. Один раз в месяц культуру пересевают на свежую среду. Столбики инкубируют 24 ч при 37 °С. Посев делают в 2 пробирки. Одну из них оставляют на хранение и используют только при последующем пересеве через месяц. Другую используют для приготовления инокулята, применяемого при анализах.

Полная основная среда

Состав основной среды приведен в табл. 7.14. Поскольку это сложная среда, ее можно приготовить несколькими способами, причем каждый исследователь может выбрать любой из предложенных здесь вариантов. Удобнее всего смешать различные вещества (например, аминокислоты, минеральные соли, пуриновые и пиримидиновые основания, витамины), которые можно хранить либо в твердой форме, либо в виде основных растворов. Затем к этой смеси добавляют необходимые компоненты в нужном количестве и готовят соответствующее количество среды, концентрация которой вдвое выше требуемой (так называемая среда с двойной концентрацией). В аналитических целях отдельные вещества, подлежащие определению, следует исключить из таких смесей. Смеси готовят следующим образом.

Аминокислоты. Делают навески аминокислот в количествах, указанных в табл. 7.14. Аминокислоты, предназначенные для определения, исключают из смеси. Приготовленные навески смешивают, растирают в ступке и хранят в хорошо закупоренной банке в темном месте. Смеси всех аминокислот, предназначенных для аналитических целей, готовят и хранят таким же способом.

Известно, что активны только L-изомеры аминокислот. Из соображений удобства иногда используют DLАцетат натрия

Хлористый аммоний

Неорганические соли: КН2Р04 К

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.07.2017)