и 0,5 г СаСОз. Вместо дистиллированной используют водопроводную или морскую воду.

* В пресной воде клетки не растут, даже при добавлении NaCl; оптимальный рост наблюдается в среде, содержащей от 70 до 100% морской воды, I мМ. NaNOj и перечисленные неорганические соли. Источником углерода служит атмосферная со5.

0 Среду периодически аэрируют воздухом, содержащим 5% С02.

Источником энергии, азота и углерода служит тиоциаиат калия (0,2 г/л). Thiobacitlus thioparus ие растет иа таких сложных средах, как среды, содержащие питательный бульон, пептон, дрожжевой экстракт или гидролизат казеина.

е После стерилизации к среде добавляют с соблюдением правил асептики 200—400 мг Na2S-9H20, 168 мг NaHCOs и 410 мг ацетата иатрия или 320 мг метилового спирта (общий объем 1 л).

^ На 1 л среды добавляют 2 г цитрата аммония.

s На 1 л среды добавляют 1 г глицерофосфата калия и 0,5 г ЭДТА. В качестве источников углерода используются L-глутамат, пировииоградная кислота, ацетат и лактат, но наилучший рост наблюдается в присутствии смеси 5 Г L-глутаминовой кислоты и 10 г DL-лактата (иа 1 л среды).

На 1 л среды добавляют 3 г целлобиозы, 20 ммоль ацетата, 1 ммоль изовалериата и 1 ммоль изобутирата. Отдельно в атмосфере N2 автоклавируют растворы, содержащие 0,5 г Na2S-9H26 и 4 г Na2C03, и затем добавляют их к среде непосредственно перед посевом.

' Для роста иа этой среде необходимо довольно большое количество активного ииокулята.

'Для большинства этих сред глюкозу стерилизуют отдельно (обычно автоклавироваиием) и добавляют с соблюдением правил асептики к стерильному раствору других компонентов.

ь

На 1 л среды добавляют 1 мг хелатироваииого железа, 30 мкг Na2MoCv2H50; 0,6 мкг СоС12-6Н20, 6 мкг CuS04-5H20 и 30 мкг ZnS04'7HsO.

'на 1 л среды добавляют 1 мг хелатироваииого железа, 100 мкг Na2Mo04-2H20, 2 мкг СоС12-6Н20, 100 мкг ZnS04-7HaO и 20 мкг CuS04-5HaO.

т На 1 л среды добавляют 1,56 г элементной серы, про-стерилизованиой отдельно автоклавироваиием.

"На 1 л среды добавляют 1 мг Na2Mo04>2H20.

да К О ?к s •s

5Г

л

о

X 5Г гае > х -+ о

•о

51

Продолжение табл. 7.11

На 1 л среды добавляют 0,8 мкг Мо (в виде молибдата аммония) 10 мг Zn (в виде ZnS04-7H20), 4 мг В (в виде НзВОз), 1 мг Си (в виде CuSCv5HsO) и 1 мг Со (в виде CoSCv7HsO).

р На 1 л среды добавляют 4 мг CoCls-6HsO.

" На 1 л среды добавляют по 100 мг L-цистииа и L-трип-тофаиа.

г На I л среды добавляют 300 мг L-алаиина, 400 мг L-ap-гинииа, 750 мг L-аспарагииовой кислоты, 200 мг L-Цистеина, 750 мг L-глутамииовой кислоты, 200 мг глицина, 500 мг L-гистиднна, 200 мг DL-нзолейцина, 200 мг L-лейцина, 800 мг L-лизииа, 150 мг DL-метиоиииа, 200 мг DL-феиилаланина, 500 мг L-пролииа, 400 мг DL-серииа, 200 мг DL-треоиииа, 200 мг L-триптофаиа, 100 мг L-тирозииа и 300 мг L-валина.

s На 1 л среды добавляют по 200 мг каждой из следую-?п щих аминокислот: L-триптофаиа, L-цистеина, DL-треоиина, о DL-метиоиииа, DL-валииа, DL-лейцина, DL-изолейцииа, DL-лизииа, DL-фенилаланина, L-тирозииа, L-пролина, глицина, DL-аланина, D-аргинина, DL-серина, L-глутаминовой кислоты и L-аспарагииовой кислоты.

' На I л среды добавляют по 0,2 г каждой из следующих аминокислот: DL-аргииииа, DL-валииа, L-глутаминовой кислоты, DL-серина, DL-гнстидииа, DL-изолейцииа, DL-лейцина, L-тирозина, DL-метионина, DL-триптофана и DL-фенил-алаиииа.

и Замена гидролизата хазеина восемнадцатью аминокислотами не влияет на интенсивность и скорость роста.

v Исключение из среды гидролизата казеина не влияет иа рост. Это доказывает, что соли аммония могут служить единственным источником азота.

w На I л среды добавляют по 5 мг аденина, гуанина, урацила и ксаитииа. Гуанин или ксаитии удовлетворяют потребности бактерий в пуринах. Для некоторых штаммов достаточно добавить адеиии.

х На 1 л среды добавляют по 5 мг гуаиииа, адеиииа, ура-цила и ксантина.

^ На 1 л среды добавляют по 5 мг ксаитииа, гуанина, аденина, тимина и урацила.

2 На 1 л среды добавляют 100 мкг биотииа, 10 мкг фолиевой кислоты, 2 мг никотиновой кислоты, 1 мг пантотената кальция, 2 мг солянокислого пиридоксииа, 1 мг рибофлавина и 1 мг солянокислого тиамииа. Пантотенат, никотиновая кислота и биотии, необходимы для роста всех штаммов или значительно стимулируют его.

аа На 1 л среды добавляют 5 мг пиридоксаля, 1 мг ий- > котиновой кислоты, 1 мг пантотената кальция, 1 мг рибо- Q флавина, 1 мг тиамииа, 1 мкг витамина Вц, 10 мкг биотииа, 5 мкг л-аминобензойной кислоты и 10 мкг фолиевой кислоты. _

На 1 л среды добавляют 10 мкг биотина. Потребности „

в биотине можно удовлетворить за счет бноцитииа или де- Q

тиобиотина, а также 1000-кратиого избытка твииа 80 или о

олеата натрия. -I

сс На 1 л среды добавляют 5 мг никотиновой кислоты, 1 мг пантотената кальция, 1 мг пиридоксииа, 100 мкг биотина и 0,01 мг лейковорина. Некоторым штаммам Pediococcus необходимы мевалоиовая кислота и рибофлавин.

^На 1л среды добавляют 2 мг тиамииа-НС1, 2 мг пантотената кальция, 2 мг рибофлавина, 2 мг иикотииамида, 1 мг лирндоксамииа-2НС1, 1 мг пиридоксаля-НС1, 1 мг пнрндокси-иа-НС1, 0,1 мг /г-аминобензойиой кислоты, 0,05 мг биотииа, 0,05 мг фолиевой кислоты и 0,005 мг кобаламина.

На 1 л среды добавляют 2 мг никотиновой кислоты и 0,5 мг биотина.

Продолжение табл. 7.12

Количество (в единицах, указанных в колонке 1) на 1 л среды

Компоненты 54Са 55С* 56СС 57Cd 58С* 59с/ 61 сп 62 С езс' 64В-' 65С* 66С1

Микроэлементы ДаР ДаР Да? Да'

Аминокислоты Да* Да' Да" Да* Да™ Да* Да* Да* Дааа Да&* Дасс Да^

Кислотный гидро-лизат казеииа (г) 5,0** 5,0// 5,0^

Пурины и пиримиди-ны JXahh Да" Да"' Да*к да» Датт дапп

Витамины Да00 Да" Да*? Дагг Дам Да" дааа Да™ Да** ДаУУ Да«

РН 7,1 6,8— —7,0 6,8 7,0 7,0 7.6 7,0--7,4 7,4 6,8 7,8 6,5 7,0 6,0

Урожай клеток на синтетической и комплексной средах одинаков, но в первом случае количество образуемого эн-теротоксина в 7 раз ниже, чем во втором. Для роста в анаэробных условиях необходимо добавлять к среде пурины и урацил нли ацетат (10 мМ) нлн пируват. Ацетат можно заменить мевалонатом, взяв его в 10 раз меньше, чем ацетата.

* Глюкозу автоклавнруют с другими компонентами среды. В присутствии фолнновой кислоты (цитроворнна) эта среда поддерживает хороший рост некоторых штаммов Pediococcus.

с Глюкозу автоклавнруют с другими компонентами среды. На 1 л среды добавляют 20 г цитрата натрия.

1 Глюкозу автоклавнруют вместе с другими компонентами среды. На 1 л среды добавляют 0,01 г олеиновой кислоты, 1 г твнна 40 (детокснкант олеиновой кислоты) и 25 мг ферментативного гидролизата казенна. Этот гндролизат можно частично заменить 10 мг глутамина, который отдельно стерилизуют фильтрованием.

Глюкозу автоклавнруют вместе с другими компонентами среды. На 1 л среды добавляют 500 мг L-аскорбнновой кислоты, 300 мг L-глутамнна (отдельно стерилизуют фильтрованием) и 1 мг спермина-НС!.

' Глюкозу автоклавнруют вместе с другими компонентами

СО

Добавляют 0,1 г L-аспарагнна. Добавление к I л среды 0,1 г ацетата аммония и 1 г ИаНСОз улучшает рост. g

Для Bacillus cereus и В. brevis необходимы некоторые кислоты, перечисленные в среде 58С, но витамины для них не требуются. В. alvei нуждаются в аминокислотах и тиамине, В. ctrculans и В. coagulans — в аминокислотах и обычно тнамине и биотине, В. sphaericus — в аминокислотах, тнамн-не и биотиие, В. pasteurii —- в аминокислотах, тнамнне, бно-тине, никотиновой кислоте и аммонии (1% NH4C1). Оптимальный рост В. pasteurii наблюдается при рН 8,5 и температуре 28 °С. В. anthracis также растет на среде с аминокислотами. Для некоторых штаммов нужен тиамни, их рост стимулируется аденознном и (нли) адеииловой кислотой. Большинство видов этого рода являются аэробными, однако некоторые штаммы, например В. cereus, могут также расти в анаэробных условиях.

f Bacillus subtilis, В. licheniformis и В. megaterium ие нуждаются в витаминах. В. pumilus и В. polymyxa в качестве источника азота используют соли NH4+; оии нуждаются также в бнотнне. В. macerans растут на среде 59С при добавлении в нее биотииа и тнамниа.

^ В качестве восстанавливающих агентов к среде добавляют меркаптоацетат (0,05%) и цнстенн (0,025%). Для быстрого и равномерного роста необходима С02. Некоторые штаммы Clostridium botulinum растут на синтетической среде только после добавления ферментативного гидролизата казенна (5 г/л) нли заменяющих его факторов: NaHCOs (200 мг/л), дрожжевого экстракта (5 г/л) нли оксалацетата (5 г/л). Клетки С. parabotutinam (тип А и В) и С. sporoge-nes хорошо растут на среде 60С, однако прн этом титр токсина в 7 раз ниже, чем прн росте на бульоне из экстракта сердца и мозга.

^ На 1 л среды добавляют 5 г тногликолата натрия. На среде 61С клетки растут хуже, чем на бульоне из экстракта сердца и мозга.

' На 1 л среды добавляют 0,15 г нитрилотрнуксусной кислоты и 0,01 г Na2S-9H20. Нужное значение рН среды устанавливают с помощью трнса.

среды. На 1 л среды добавляют 500 мг аскорбиновой кислоты, 1,67 г ацетата калия и 10 Мл раствора твин-олеата, содержащего 2 г твииа 40, 20 мг олеата натрия и воду до 20 мл.

"* Если нет специальных указаний, глюкозу стерилизуют отдельно автоклавированнем, а затем добавляют ее с соблюдением правил асептики к стерильному раствору других компонентов.

п Стерилизуют отдельно фильтрованием.

° Вместо КгНР04 используют (NH4)2HP04.

Р На 1 л среды добавляют 2 мг молнбдата аммония.

^ На 1л среды добавляют 8 мг ZnS04-7Ha0, 4,5 мг CuS04-5H20, 9 мг СоСЬ, 6 мг СаС12-2НаО, 14 мг NajB4O;-10H2O и 2,5 мг (NH4)aMo04.

rHa 1 л среды добавляют 0,114 мг Н3ВОз, 0,31 мг CuS04-5H20, 2,8 мг Fe(NH2) (S04)2-6H20, 0,01 мг CoS04-7H20, 0,12 мг MnS04-HsO, 0,07 мг (NH4)eMo7Oj4-4HaO и 1,6 мг ZnS04-7H20.

5 На 1 л среды добавляют по 25 мг глицина, валина, лейцина, треоиииа, феннлаланниа, тирозниа, цистеина, метнони-иа, пролина, аргинина, гнстидина и триптофана.

' На 1 л среды добавляют 200 мг DL-a-аланииа, 242 мг L-аргннина-НС], 400 мг L-аспарагина, 100 мг аспарагиновой кислоты, 50 мг L-цистенна, 300