Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

ржит экстракт из сердца крупного рогатого скота с пептоном и NaCl (34 г/л); лошадиная сыворотка (200 мл); 25%-иый экстракт свежих пекарских дрожжей (100 мл); 1%-иый агар (предпочтительнее полумягкий). Желательна влажная атмосфера.

' На 1 л среды добавляют: 21 г PPLC-бульона (Difco), 70 г сорбита, 1 г фруктозы, 10 г сахарозы и 200 мл лошадиной сыворотки. COj (5%) в атмосфере N2 стимулирует рост бактерий на твердых средах.

К О X S

К л га п ж К га

О

о

Дополнительные компоненты: 0,2 г яблочной кислоты в 0,005 г ЭДТА, рН 6,8, Растворы, содержащие 1,5 г NaHCOj и 1 г Na2S-9HsO, стерилизуют фильтрованием отдельно.

* Отдельно фильтрованием стерилизуют растворы, содержащие 20 г NaHCOj и 1 г NaaS-9HjO, и добавляют их к стерильной среде.

с Добавляют к другим компонентам среды 0,2 г ЭДТА и простерилизованные фильтрованием растворы, содержащие 12,76 г Na2COj И 0,1 г Na2S.9HsO.

^ Добавляют 0,025 г ЭДТА, а также 2—6 г яблочной кислоты в качестве источника углерода.

Урожай клеток увеличивается при добавлении иа 1 л среды 0,5 г ацетата натрия, 2 г NaHCOj, 42 г CaS04 и 0,001 г ЭДТА.

?^Для Flexithrix dorotheae глюкозу как источник углерода можно заменить галактозой или сахарозой (1 г/л), а хлористый аммоний в качестве источника азота — глутаматом натрия или NaNOs (10 г/л). На 1 л среды добавляют 0,1 г глицерофосфата натрия.

& Источниками азота служат глутамат натрия (0,5 Г/л) и аспарагииовая кислота (0,5 г/л).

Il 1 л среды содержит 20 мл безвитаминиого минерального основного раствора Хатиера. В модификации Коэи-Базир и др. [35] этот раствор содержит следующие компоненты: 10 г нитрилотриуксусной кислоты (растворенной и иейтрализоваииой с помощью КОН); 14,45 г MgSO«-7H20, 3,33 г CaCls-2HjO, 9,25 мг (NH4)eMor024-24H20, 99 мг FeS04-7H20, 50 мл смеси металлов № 44 (см. ниже) и дистиллированную воду — до 1л. рН доводят до 6,6—6,8. Смесь металлов № 44 содержит в 100 мл 250 мг ЭДТА, 1,095 мг ZnS04-7H20, 500 мг FeS04-7H20, 154 мг MnS04H20, 39,2 мг CuS04-5HjO, 24,8 мг Co(N03)2-6H20 и 17,7 мг Na2B4Or-10HsO. Чтобы предотвратить выпадение осадка, следует добавить несколько капель 6 и. HsS04.

' На 1 л среды добавляют 0,5 г аспарагина и 0,01 г ЭДТА.

?'Для большинства этих сред глюкозу стерилнзувэт отдельно (обычно автоклавнроваиием) и затем с соблюдением правил асептики добавляют ее к стерильным растворам других компонентов

ет К О X S

а

К

л м о

К

г

о •о

с

Продолжение табл. 7.8

Автоклавируют отдельно и затем с соблюдением правил асептики добавляют к другим компонентам.

' Стерилизуют фильтрованием отдельно.

т На 1 л среды добавляют: 0,1 мг ZnS04-7H20; 0,3 мг Н3ВОэ; 0,2 мг СоС12-6Н20; 0,01 мг CuClj-2H20; 0,02 мг NiCl2-6H20; 0,03 мг NasMo04-2HjO.

" На 1 л среды добавляют: 0,1 мг ZnS04-7H20; 0,1 мг Н3ВОэ; 0,05 мг СоС12-6Н20 и 0,005 мг СиС12-2НаО.

0 На 1 л среды добавляют: 2,4 мг ZnS04-7H20; 28 мг Н3В03; 0,4 мг СиС12-6Н20 и 7,5 мг Na2Mo04-2H20.

р На 1 л среды добавляют 0,05 мг ZnS04-7H20; 0,05 мг НзВОз; 0,005 мг СоС12-6НаО; 0,025 мкг CuCls-2H20 и 0,005 мг Na2Mo04-2H,0.

' На I л среды добавляют 1 мл смеси следующих микроэлементов: растворимых солей В, Fe и Мп (по 0,5 мг/л) и Со, Си, Мо и Zn (по 0,01 мг/л).

г На 1 л среды добавляют: 0,1 мг ZnS04-7H20, 0,1 мг НзВОз, 0,1 мг СиС12-2Н20, 0,05 мг Na2Mo04-2H20.

SHA I л среды добавляют: 6 мг (NH4)2Fe(S04)j и 4 мг СаСОз.

' Необходимы аминокислоты (г/л): фенилалаиин (1); лейцин (1); изолейцин (0,5); валин (0,1) и метионии (0,05). Добавляют также аминокислоты, стимулирующие рост бактерий (г/л): глиции (0,05); пролин (0,5); аспарагии (0,44); ала-иии (1,0); лизин (0,25), треонии (0,1) и триптофан (1,0). Независимо от способности стимулировать рост бактерий к среде добавляют (г/л) гистиднн (0,05), аргинин (0,1) и серии (0,1).

Источником азота служат (в концентрации 1 г/л) лейцин, пролин, аспарагин, алаиин, триптофан, аргииии, аспа-рагиновая кислота и цистин. Смесь аминокислот в виде ка-замииовых кислот способствует более быстрому и интенсивному росту культур. При замене глюкозы на сахарозу, глицерин или сукцииат в качестве источника углерода, микроорганизм может использовать неорганические источники азота.

v Необходимый для роста внтамин Bi2 (кобаламин) добавляют в концентрации 0,005 мг/л.

Необходим биотии (15 мкг/л).

х Необходим витамин Ви (0,005 мг/л); для некоторых штаммов нужен биотин (0,005 мг) и солянокислый тиамии (0.1 мг/л).

^ У некоторых штаммов SphaeroUlus nutans обнаружена потребность в биотиие (0,005 мг/л).

г Ни один из выделенных штаммов не растет на среде без витаминов; для поддержания или стимуляции роста большинства штаммов необходимы биотин, тиамии и витамин Bi2. Готовят раствор, в 1 л которого содержатся следующие витамины: 2 мг биотииа, 2 мг фолиевой кислоты, 10 мг солянокислого пиридоксина, 5 мг рибофлавина, 5 мг солянокислого тиамина, 5 мг никотинамида, 5 мг пантотеиа-та кальция, 0,1 мг витамина Bi2 и 0,1 мг я-амииобензойиой кислоты. 10 мл этого раствора, простерилизоваиного авто-клавироваиием или ультрафильтрованием, добавляют на 1 л среды.

аа Добавляют биотин (0,2 мкг/л).

вв На 1 л стерильной среды добавляют 1 мг солянокислого тиамина и 0,003 мг витамина Ви, причем каждый из них стерилизуют отдельно ультрафильтроваиием.

Продолжение табл. 7.9

Количество (в единицах, указанных в колонке 1) на 1 л среды

Компоненты 15Св 16С 17С 18С I9C 20С 21С 22С 23С 24С 25С6 26С 27СС

Пурины и пиримиди-ны Да?

Витамины Даг Да* Да' Да" Да* да»

Твин 80 (мг) 6,00

РН 7,4 6,8 7,2 6,9 6,6— -7,4 5,5— —9,0 6,8 7,2--7,5 6,8 7,0--7,2 7,2 7,0 7,0

В качестве детоксиканта добавляют кристаллический сывороточный альбумин (1%).

* На 1 л среды добавляют 45 мг K2SO4.

0 В 670 мл теплой (45 °С) дистиллированной воды растворяют указанные в таблице компоненты, а затем добавляют к ним 100 г лимонной кислоты-Н20 и 175 г NaHNH4p04'4HsO. Отдельно простерилизоваиную глюкозу добавляют с соблюдением правил асептики к стерильной среде непосредственно перед посевом и затем разбавляют среду в 50 раз. Если добавить к среде 5 мл хлороформа, то ее можно хранить в закрытых сосудах при комнатной температуре.

Для большинства сред отдельно простерилизоваиную ав-токлавированнем глюкозу добавляют с соблюдением правил асептики к стерильному раствору, содержащему другие компоненты.

е Хорошо усваиваются также другие углеводы, глицерин и лимонная кислота.

лизуют фильтрованием и добавляют к стерильной среде перед ее использованием.

т На I л среды добавляют аминокислоты, необходимые для оптимального роста: 1,2 мг D-аланниа, 0,77 мг L-аргини-иа-НС1, 0,1 мг L-цистеина, 3,9 мг L-глутамииовой кислоты, 0,77 мг Ь-лизина-НС1 и 0,94 мг DL-метиоинна.

"Добавляют следующие аминокислоты (мг/л): треонин (276); пролин (100); лейцин (426); гистидин (126); глицин (176); аргииин (160); глутаминовая кислота (200); валии (1S5) и тирозни (35). Первые шесть аминокислот являются необходимыми, остальные стимулируют рост.

° На 1 л среды добавляют: 1,4 г DL-алаиииа, 216 мг DL-триптофаиа и по 60 мг DL-треоиииа, L-лизииа, DL-ме-тиоиина, DL-гистидина, DL-фенилаланина, L-лейцина, DL-изО-лейцииз, DL-валина и L-аргинниа.

Р Рост стимулируется гидролизатом казеина (0,5%) или глутамиковой кислотой (0,1%).

to

Co

?^Микроэлементы (мкг/л): В (Н3В03) (5); Са (СаСОз) (100); Си (CuS04-5H20) (10); Fe [FeS04(NH4)2S04-6H20] (100-500); I (KI) (1); Mn (MnS04-H20) (10-20); Mo (M0Oa) (10); Zn (ZnSOWHjO) (50).

•^Для фиксации молекулярного азота необходимы следы молибдата (0,005 г Na2Mo04-2H20 на 1 л).

* Beijerinckia Indica молибдат необходим для фиксации молекулярного азота (см. выше сноску g), и его нельзя заменить ванадатом. Для некоторых штаммов, нуждающихся в Си и Zn, к среде добавляют ZnS04-7H20 (0,005 г/л) и CuS04-5H20 (0,004 г/л).

1 Са2+ добавляют в виде CaS04 (0,2 г/л). На 1 л среды добавляют также 0,5 мг Na2Mo04-2H20.

/Безвитамииный минеральный основной раствор Хатиера, 20 мл/л (см. сноску А в табл. 7.8). ь

Все виды Aeromonas растут на минимальной среде, содержащей смесь L-аргинина, аспарагина, лейцина и ме-тионина.

' Для роста нужны аргинин, аспарагиновая кислота, ци-стеин, глутамииовая кислота, гнстидии, лейцни, лизии, ме-тионин, феиилаланин, треонин, триптофан и валин. Сернн и тирозин оказывают стимулирующее действие, а алаиии, оксипролин и глицин не влияют иа рост. Все аминокислоты добавляют к среде в концентрации 0,001 М. Пролин может заменить глутамииовую кислоту. Глутамии (1,02 г/л) стериДля роста необходимы цитозин или урацил в концентрации 10 мг/л. Аденин (10 мг/л) оказывает стимулирующее действие.

г Потребность в витаминах не определена. Витамины добавляют в следующих концентрациях (на 1 л среды): 1 мг паитотеиата кальция, 10 мг л-амииобеизойной кислоты, 10 мкг биотина, 50 мг холина, 100 мкг фолиевой кислоты, 5 мг инозита, 1 мг никотиновой кислоты, 5 мг пиридоксаля, 5 мг пиридоксамина, 5 мг пиридоксина, 1 мг рибофлавина, 1 мг тиамина и 1,23 г аскорбиновой кислоты.

s Добавляют биотин (1 мкг/л).

'добавляют никотиновую кислоту (2 мг/л) и тиамин-НС1 (0,15 мг/л). Биотин необходим для Brucella abortus, 5% COi в воздухе достаточно для роста большинства штаммов В. abortus.

и На 1 л среды добавляют следующие витамины: 0,01 мг биотииа, 1 мг никотиновой кислоты и 0,5 мг солянокислого тиамина.

^Добавляют биотин (0,5 мкг/л) и солянокислый тиамин (100 мкг/л).

ТВ)

На 1 л среды добавляют: Ю мкг пантотената кальция, 1 мкг бнотина, 10 мкг никотииамида, 10 мкг солянокислого тиамина и 20 мкг солянокислого пиридоксина. Пантотенат, никотииамид и тиамин необходимы для роста, а биотии и пиридоксин оказывают стимулирующее действие.

О X Я ? S А И О

я

Я

га

© >

н о ч 5*

Пурины и пирими-дины Да" Да" Да**

Витамины Да" Датт Да"" Да00 ДрРР Да«? Да" Да" Да»

Твин 80 (мл) 5

рН 7.8.1 7,5 7,6 7,5 6,6— -6,9 6,8 6,7 6,8— —6,9 7,0 7,45 7,4± ±0,1 7,0 6,8й"

ю

После стерилизации к среде добавляют, соблюдая правила асептики, 500 мкг путресцииа и 100 мкг стерилизованного фильтрованием NAD.

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.04.2017)