Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

,

* К среде добавляют 17,8 г Na2S04.

Для большинства сред рекомендуется стерилизовать глюкозу отдельно (автоклавироваиием или фильтрованием через

соответствующие мембранные фильтры), а затем с соблюде- м

иием правил асептики добавлять ее к другим компонентам

среды. 2

1 К

Для приготовления шоколадного агара к триптиказово- Q

му соевому бульону* добавляют 3% (вес/объем) дрожжевого g

экстракта и 1% агара. После стерилизации в бульон вносят >

дефибринированную овечью кровь (конечная концентрация *j

4%), инкубируют среду около 15 мин при 70 "С, охлаждают д

ее до 50 °С и добавляют IsoVltaleX* (5 мл/среды) и СаСЬ и

(конечная концентрация 0,5 мМ). <"J

Агар готовят иа экстракте из сердца крупного рогатого К

скота: 450 г сердечной мышцы, лишенной жира, измельчают

и выдерживают в воде в течение ночи при 4—6 "С, добавля- •&

ют пептон и NaCl, как указано выше, кипятят 30 мии, филь- >

труют, объединяют с растворенным агаром (2% в готовой ц

среде), доводят рН до 7,4 и автоклавируют. о

•о

Таблица 7.5. Состав комплексных (А) и полусинтетических (В) сред № 38—50 для бактерий,

перечисленных в табл. 7.1

Количество (в единицах, указанных в колонке 1) иа 1 л среды

Компоненты

38А"

39А"

40А41А"

42Ае

43В'

НА8

45А"

4бАг'

47А;

48А"

49А

50А

Глюкоза' (г) (NH4)2S04 (г) KN03 (г) Na2HP04 (г) КН2Р04 (г) К2НР04 (г) MgS04-7H20 (г) MnS04-H20 (г) NaCl (г) СаС12-2Н20 (г) EeS04-7H20 (мг) Микроэлементы Аминокислоты Витамины

Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт (г)

Кислотный гидроли-зат казеина (каза-миновые кислоты;г)

Ферментативный гид-ролизат казеина (казитон; г)

Пептои (г)

5,0

1,0

5,0

3,0 1,0

10

5,0 15

1,0 5,0

10

2.0

5,0

0,074

3,0

5,0

2,25 0,75

0,096 0,001

0,002 2,0 Да™ Да" Да0

20

0,5

0,5 0,3

4,0

5,0

2,89

1,0 1,0 0,1

2,0 0,1

10

0,2 0,05

10 5,0

10

10

2,5

10

10

20

Триптон (г) Специальные среды РН

5,0 Да" Да*

7,6 7,2-7,4 6,5—7,0 7,0 7,4 7,0 7,4 6,6 6—8 6,7 5,5 7,0

СО

СО

Добавляют следующие компоненты: 0,5 г цистеи-на-НС1'НаО, 2г растворимого крахмала, 10 г протеозопепто-на, 50 мл стерильной сыворотки. Инкубируют в атмосфере, содержащей 90% N2 — 10% С02.

b К перечисленным компонентам добавляют следующие: 0,05 г цистеина-НСЬШЭ, 2 г тногликолата натрия, 1 г натриевого формальдегидсульфоксилата, 10 г протеозопептоиа и 0,02 г гемина. Для первичного выделения этих бактерий необходима 5%-ная концентрация С02.

0 На 1 л среды добавляют 0,5 г цистеииа-НС1-Н20 и 10 г триптиказы (BBL). Смесь инкубируют в атмосфере 95% N2 —5% С02.

^Требуются комплексные среды. Кроме вышеупомянутых компонентов среда содержит 1—3 г бутирата, 30 мг олеиновой кислоты, экстракт из сердечной мышцы крупного рогатого скота (25 г) и овечьей сыворотки (100 мл).

е Глутамат натрия (10 мг/л) и рибонуклеиновая кислота (250 мг/л).

'На 1 л среды добавляют пурины и пиримидины: по 10 мг гуанина, урацила и гипоксаитнна. Культуры на твердых средах инкубируют в анаэробных сосудах, через которые продувается смесь 95% N2 — 5% С02.

& На 1 л среды добавляют 0,3 г тиогликолевой кислоты, 20 г растворимого крахмала, 13 г DL-лактата натрия. Инкубируют в атмосфере с 5% (или больше) С02; остальной газ может быть Н2.

Л На 1 л среды добавляют 10 г 85%-ной молочной кислоты, 0,75 г тногликолата натрия, 0,1 г твнна 80 и 10 г триптиказы. рН среды доводят с помощью твердого К2СОз.

' Добавляют 6 г ЫаНСОз и рубцовую жидкость до концентрации 30%. Инкубируют в атмосфере, содержащей 80% Н2 и 20% С02. В качестве источника углерода можно использовать ацетат. Для некоторых штаммов необходимы 2-метил-к-бутират, несколько аминокислот и неидентифициро-ваиный витаминоподобиый фактор роста, содержащийся в рубцовой жидкости.

' На 1 л среды добавляют 5 г цитрата аммония, 2 г ацетата натрия и 1 г твина 80. ft

Добавляют ацетат калия до концентрации 0,25%.

^Для большинства сред рекомендуется стерилизовать глюкозу (автоклавированием или фильтрованием через соответствующие мембранные фильтры) отдельно от других компонентов, а затем объединять их с соблюдением правил асептики.

т На 1 л среды добавляют по 1 мг СоС12-6Н20, yS04-7H20, ZnSO, и NaMo04-2H20, 0,5 мг CuS04-5H20 и 20 мг иитрилотриуксусной кислоты.

яОЬ-триптофан (100 мг/л), солянокислый L-цистеин (350 мг/л).

"на 1 л среды добавляют по 1 г солянокислого пиридок-саля и кальциевой соли пантотеновой кислоты, по 50 мкг солянокислого тиамнна, ниацина и рибофлавина, 10 мкг в-аминобеизойной кислоты, 2 мкг биотина и по 1 мкг фолне-вой кислоты и витамина Вп.

^Экстракт из сердца и мозга (37 г/л; имеется в продаже).

' Очень хорошо растут на бульоне или агаре, приготовленном на осветленной рубцовой жидкости с целлюлозой. Осветленную рубцовую жидкость готовят из свежесобраниой рубцовой жидкости коровы, рацион которой состоит из сеиа люцериы. Раствор фильтруют через марлю и оставляют стоять на некоторое время, после чего прозрачную надоса-дочную жидкость центрифугируют 20 мин при 14 000 об/мин [211.

си 5

о х

5 2 к

M О

га

е

О

тэ Е

Специальные среды РН

Да'

7,4 7,4 7,2 8,8 7,8-8,1 7,0 5,4 7,2 6,8

Да"

ю со

СЛ

Другие компоненты, которые являются необходимыми или оказывают стимулирующее действие (мг/л): ацетат натрия (820); урацил (112); ксаитин (152) и аденин (135).

b На 1 л среды добавляют 400 мг NaHCO$.

0 На 1 л среды добавляют 1,5 г Na2S04. Воду берут ие дистиллированную, а водопроводную. Глюкозу можно заменить лактатом натрия (3,5 г). Если в среде присутствует пируват (в качестве субстрата), то сульфат добавлять не нужно.

^На 1 л среды добавляют 10 г ацетата натрия. е На 1 л среды добавляют 1 г цитрата натрия, 0,3 г тногликолата натрия, 0,06 г олеата натрия и 3 г сапонина,

?^Большинство молочнокислых бактерий можно поддерживать путем ежемесячных пересевов в столбиках с 2%-ным агаром, приготовленным на данной среде. Все компоненты автоклавируются вместе. К жидкой культуре следует добавить неорганические соли, перечисленные в табл. 7.14. Обратите внимание, что количество солей приводится на 1 л среды с двойной концентрацией.

^На 1 л среды добавляют следующие компоненты: 10 г сахарозы, 1,5 г ацетата калия и 0,5 г аскорбиновой кислоты. Среду используют для получения как посевного материала (инокулята), так и биомассы. Добавив к среде 1,5—2% агара, ее используют для поддержания роста микроорганизмов, пересевая каждые 2 нед в столбики. Все компоненты автоклавируют вместе.

ЛНа 1 л среды добавляют также 1 г цистеииа-НС1, 1 г растворимого очищенного крахмала, 1,5 мг NaMo04-2H50, по 20 мг адениисульфата урацила, ксантина и тимииа, 100 мкг СоА и 1 мг олеиновой кислоты. На этой среде хорошо растут штаммы Actinomyces israelii, A. bovis и некоторые виды Corynebacterium, Lactobacillus bifidus и Leptotrichia bucca-lis. Крахмал суспендируют в небольшом количестве холодной воды, вносят суспензию в кипящую воду и затем добавляют остальные компоненты среды, кроме глюкозы, которую автоклавируют отдельно. Эта среда пригодна также для поддержания культуры. Для столбиков используют 0,7%-кый агар.

'Добавляют 30 г сахарозы.

?'На 1 л среды добавляют также 1 г кислого цитрата аммония и 100 мкг terregens-фактора.

k Для большинства сред рекомендуется стерилизовать глюкозу отдельно от других компонентов среды (авгокла-вироваиием или фильтрованием через соответствующие мембранные фильтры), а затем добавлять ее с соблюдением правил асептики.

' На 1 л среды добавляют 1 мг цитрата железа.

т На 1 л среды добавляют 100 мг 1--цистеинаНС1 и 50 мг DL-триптофана.

п На 1 л среды добавляют 0,5 г цистеина-НС1.

0 На 1 л среды добавляют 1 г гистидина-HCl-HjO.

" На 1 л среды добавляют 1 мг никотиновой кислоты, 1 мг солянокислого тиамина и 1 мкг биотииа.

' На 1 л среды добавляют 0,5 мг рибофлавина, 1 мг тиамина и 1 мг пантотеиата кальция.

Т На 1 л среды добавляют 16,5 мкг солянокислого пирид-оксамина.

5 На 1 л среды добавляют: 2 мг тиамниа-НС1, 1 мг пи-ридоксинэ-HCl, 0,5 мг пиридоксамина-2НС1, 0,5 мг пиридокса-ля-НС1, 2 мг паитотеиата кальция, 2 мг рибофлавина, 1 мг никотиновой кислоты, 1 мг никотинамида, 100 мкг й-амино-бензойиой кислоты, 50 мкг биотина и 50 мкг фолиевой кислоты.

'концентрат бульона из мозга и сердца, 37 г/л.

п Концентрат бульона из мозга и сердца (18,5 г/л) (имеется в продаже) и гемин (250 мкг/л).

D1 К

О X X S К А Р1 О

К м

•е->

н О •о

Е

Таблица 7.7. Состав комплексных (А) сред № 64—75 для бактерий, перечисленных в табл. 7.1

Глюкоза8 (г) Глицерин (г) (NH4)2S04 (г) Na2HP04 (г) КН2Р04 (г) К2НР04 (г) MgS04-7H20 (г) NaCl (г) СаС12-2Н20 (г) FeS04-7H20 (мг) Аминокислоты Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт (г)

Кислотный гидроли-2ат казеина (каза-миновые кислоты;г)

Ферментативный гид-ролизат казеина (казитон; г)

Пептон (г)

Триптои (г)

Специальные среды

рН

Компоненты

S3

Смешивают с 3 л лошадиной сыворотки, фильтруют и стерилизуют фильтрованием,

* Добавляют растворимый крахмал (2%) и СаСОз (0,1%)

с Добавляют растворимый крахмал (0,1%), СаСОз (0,1%) и агар (1,5%).

^Вместо дистиллированной воды используют водопроводную.

е На 1 л среды добавляют 0,1 г NajSOs, 0,5 г тногликолата натрия, 3 г фитона (BBL) и 17 г триптиказы (BBL).

^ Добавляют 0,2 г CaCOj на 1 л среды.

В Для большинства сред рекомендуется стерилизовать глюкозу отдельно от других компонентов среды (автоклавиро-ванием или фильтрованием через соответствующие мембранные фильтры) и затем добавлять ее с соблюдением правил асептики.

^ Добавляют 0,25 г L-цистииа иа 1 л среды.

Активный компонент дрожжевого экстракта был выделен и охарактеризован как один или несколько пептидов с мол. массой~1000 [201].

•^На водяной баие готовят овсяную кашицу нз 25—65 г плющеного овса и 1 л водопроводной воды. Смесь фильтруют через марлю н, пока она еще не остыла, доводят ее объем до 1 л. Затем добавляют 18—20 г агара и доводят рН до 7,2 с помощью NaOH [232].

ь

Среда Хайфлика и Чэиока [77]: PPLO-бульон (Difco) — дегидратированная среда, которая соде

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.11.2017)