Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

средах с 1%-ным агаром, ио они могут также расти на твердой среде типа кровяного агара. В. bacilliformis растет в культуре тканн первичных эксплантатов легких, костного мозга илн селезенки крыс и морских свинок, а также на хорноаллантоисной и желточной жидкостях зародыша цыпленка. Оптимальное значение рН культуральной среды 7,8.

000 К основному кровяному агару добавляют гемии (40 мкг/л) или гемоглобин (1 мг/л) и инкубируют в атмосфере, содержащей 95% воздуха и 5% COj. Необходимо также присутствие детокснкаитов типа бычьего альбумина (2 г/л), крахмала (2 г/л) или активированного угля (0,2 г/л).

РРР Более полная информация о питании этой группы бактерий дана в обзоре [169].

qqq Бульон нз экстракта сердечной мышцы обогащен 20%-иой стерильной (нагретой до 56 °С в течение 30 мни) лошадиной сывороткой и 10%-ным свежим раствором дрожжевого экстракта (25 г дрожжевых клеток на 100 мл раствора).

ТТТ Для роста всех штаммов необходимы стероиды и жирные кислоты с длинной цепью.

Таблица 7.2. Состав комплексных (А) и полу синтетических (В) сред №1—12 для бактерий,

перечисленных в табл. 7.1

КОЛИЧЕСТВО (В ЕДИНИЦАХ, УКАЗАННЫХ В КОЛОНКЕ 1) ИА 1Л среды

КОМПОНЕНТЫ

IB

ЗА

4АИ

5А15В"

10АЕ

ПА

Глюкоза' (г) Глицерин (г) (NH4)2S04 (г) KN03 (г) Na2HP04 (г) КШРО* (г) КгНР04 (г) MgS04-7H20 NaCl (г) СаС12-2Н20 (г) FeS04-7H20 (мг) Микроэлементы Витамины

Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт

К[Г) Кислотный гидроли-зат казеина (каза-миновые кислоты;г)

Ферментативный гид-ролизат казеина (казитои; г)

Пептон (г)

1,0

1,0 0,5 0-30

0,5

3,0

3,0

1,13 0,48 1,0

20

0,5 0,5

0,2

1,0 1,0

1,0

1,0

0,5

5,0

1,0 0,1

0,1

0,1

№ ДаА

1,0

0,25 1,0

1,0 Да'

0,5

5,4

1,4

3,0

10

1,0

0,04 0,04 0,075

0,05

0,5

10

1,0

5,0

1,0

5,24 2,77

1,0

0,5

1,74 1,06

0,1

0,05

0,05

Триптон (г) 5,0

Специальная среда

рн 7,. 6,8 7,0 7,0 7,0 7,5 7,2 7,0—7,2 7,0й 7,0 7,0 7,0

Да/ 7,0-7,4

ю ю

ЫаНСОз (2 г/л) служит источником COj, а N2S-9H20 (1 г/л) используется как восстанавливающий агент и источник серы. Для обеспечения микроэлементами вместо дистиллированной воды пользуются водопроводной.

* Вместо дистиллироваионй воды следует пользоваться водопроводной.

сДля морских штаммов используют профильтрованную морскую воду; вместо нее можно применять имеющийся в продаже заменитель морской воды илн смесь следующих солей (на I л): 25 г NaCl, 5 г MgS04-7H20, 1 г СаС13-2Н20 и 0,1 г КС1. Добавляют также глицерофосфат натрия (0,1 г/л) и трис-буфер (Sigma; 1 г/л).

^Среду используют для пресноводных штаммов. К среде добавляют глицерофосфат натрия 40,1 г/л) и трис-буфер (Sigma; 1 г/л).

е20 мл основного раствора Хатиера, не содержащего витаминов. Этот раствор, модифицированный Коэи-Базаер и др. [35], содержит следующие компоненты: 10 г ннтрилотриук-сусиой кислоты (растворенной и иейтрализоваииой с помощью КОН); 14,45 г MgSOWHjO; 3,33 г CaCls-2H20; 9,25 мг (NH4)eMo7Oa4'24HsO; 99 мг FeS04-7H20; 50 мл смеси металлов № 44 (см. ниже). Объем доводят дистиллированной водой до 1 л, рН среды устанавливают 6,6—6,8. Смесь № 44 содержит в 100 мл: 250 мг этнленднамнитетрауксусной кнс-ЯОты; 1,095 мг ZnSOWH20; 500 мг FeSO«-7H20; 154 мг MnSCVHjO; 39,2 мг CuS04-5HaO; 24,8 мг Со(ЫОз)г-6Н20 и 17,7 мг NajBiOj-lOHiO. Чтобы не выпадал осадок, добавляют несколько капель 6 н. H3SO4.

?^Для большинства сред рекомендуется глюкозу стерилизовать отдельно автоклавироваиием или фильтрованием через соответствующие мембраны и затем добавлять ее с соблюдением правил асептики к другим стерильным компонентам среды.

^На 1 л среды добавляют 1 мл раствора, содержащего следующие микроэлементы: растворимые соли В, Fe, Мп (каждого элемента по 0,5 мг/л) и растворимые соли Со, Си, Mo. Zn (каждого элемента по 0,01 мг/л).

* Добавляют солянокислый тиамин (1 мг/л) и витамин Би (1 мкг/л).

Добавляют витамин Би (500 мкг/л).

^ Суспендируют 40 г кровяного агара (имеется в продаже) в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения, ав-токлавируют, охлаждают и к еще не застывшей смеси добавляют с соблюдением правил асептики 5%-ную стерильную дефнбриннрованиую кровь. Состав основного кровяного агара: 500 г экстракта сердечной мышцы крупного рогатого скота, 10 г триптозы (Difco), 5 г хлористого натрия и 15 г агара (Difco). К 1 л среды добавляют 10 г янтарной кислоты.

В процессе ннкубчции Leptothrix ochracea величину рН поддерживают около 7, добавляя к среде стерильный раствор 0,5 и. NaOH.

S О

х к

J3 гп о

S И

е >j

о тэ К

Таблица 7.3. Состав комплексных (А) и полусинтетнческих (В) сред № 13—24 для бактерий,

перечисленных в табл. 7.1"

Компоненты

Глюкоза* (г) Глицерин (г) (NH4)2S04 (г) KN03 (г) Na2HP04 (г) КН2Р04 (г) К2НР04 (г) MgS04-7H20 (г) MnS04-H20 (г) NaCl (г) СаС12-2Н20 (г) FeS04-7H20 (мг) Микроэлементы Витамины

Дрожжевой экстракт (г) Кислотный гидролизат

казеина (казаминовые

кислоты; г) Ферментативный гидро

лизат казеина (казн

тон; г) Пептон (г) рН

ю ю

Готовые среды, имеющиеся в продаже, отмечены звездочкой.

* Среда содержит также 0,75 г солянокислого цистеииа и 0,5 г тногликолата натрия. К 9 мл стерильной основной среды добавляют 1 мл кроличьей сыворотки, простерилизо-ваииой фильтрованием.

На 1 л среды добавляют 0,5 г тногликолата натрия. Бактерии лучше всего растут прн забуфериваиии среды 0,033 М Ы-2-гидрооксиэтилпиперазин-Ы'-этаиолсульфоновой кислотой (HEPES), М-трнс(гидроксиметнл)-метил-(2-амииосульфоиовой кислотой (TES), пнперазии-Ы,М-бис(2-этанолсульфоновой кислотой) (PIPES) илн при периодическом добавлении ЫаНСОз. Буферы производят фирмы Calbiochem и Sigma.

^Дополнительные компоненты: ОД г NaHSOs, 10 г пепти-ческого гидролизата животной ткани (USP*), 10 г панкреатического гидролизата казеина (USP*). Среда продается под названием «бульон для бруцелл».

еДля выращивания Campylobacter к «бульону для бруцелл»* добавляют 0,16% агара для создания частично анаэробных условий.

?^Добавляют янтарную кислоту (10 г/л).

s Добавляют СаСОз (30 г/л).

* Объединяют перечисленные компоненты со следующими; солянокислым цистеином (I г); панкреатическим гндролиза-том сердечной мышцы* (3 г); папаниовым гндролнзатом соевой муки* (10 г); солянокислым тиамином (0,05 мг). Объем доводят до 1 л.

' На 1 л среды добавляют 2 г сукцината натрия и 0,5 г цитрата натрия.

?^20 мл безвитамннной минеральной среды Хатнера. Для модификации этой среды, согласно пропнсн Коэн-Базир и др. [35], добавляют следующие компоненты: 10 г ннтрилотриук-сусной кислоты (растворенной и нейтрализованной КОН); 14,45 г MgS04'7H2O; 3,33 г СаС122Н20; 9,25 мг (NRthM07O24 - 24 H20; 99 мг FeSO4-7H20; 50 мл смеси металлов № 44 (см. ннже). Дистиллированной водой объем доводят до 1 л и устанавливают рН 6,6—6,8. Смесь металлов N° 44 содержит (на 100 мл); 250 мг этилендиаминтетрауксус-ной кислоты; 1,095 мг ZnS04-7H20; 500 мг FeS04-7HaO; 154 мг MnS04-H20; 39,2 мг CuS04'5HsO; 24,8 мг Co(NOa)2-6H20; 17,7 мг Na2B4Orl0HaO. Чтобы предотвратить выпадение осадка, добавляют несколько капель 6 н. H2S04.

Для большинства сред рекомендуется стерилизовать глюкозу отдельно от других компонентов среды и затем добавлять ее с соблюдением правил асептики. Глюкозу стерилизуют автоклавироваиием нли фильтрованием через соответствующие мембраны.

'На 1 j среды добавляют: 0,05 мг CoS04-7H20; 0,2 мг Na2Mo04-2H20; 0,2 мг ZnS04; 0,01 мг CuS04-5H20.

mHa 1 л среды добавляют: 50 мкг Си (в виде CuS04-5HsO); 10 мкг В (в виде Н3ВОз); 10 мкг Мп (в виде MnS04-4HsO); 70 мкг Zn (в виде ZnS04-7HsO); 10 мкг Мо (в виде МоОз).

"Добавляют 5 мг солянокислого тиамнна. К 9 частям стерильной основной среды добавляют одну часть стерилизованной ультрафильтроваиием смеси альбумина с жирными кислотами* следующего состава: 20 г фракции V бычьего альбумина, 0,01 г CaCl2-2HsO, 0,01 г М#СЛ2-6Н20, 8 мг ZnSO,-7H20 0,6 мг CuS04-5H20, 0,1 г FeS047Hi.O, 0,4 мг витамина Ни, 2,5 мл твнна 80. Дистиллированной водой объем доводят до 200 мл.

"Добавляют кальциевую соль паитотеновой кислоты (0,2 г/л). Для роста необходимо также иеидентнфицнрован-ное вещество, экстрагированное из агара (3 мл/л, 90 мг твердого субстрата). Витамин не нужен. На комплексных средах бактерии не растут.

^Добавляют картофельный экстракт, приготовленный следующим образом. Картофель очищают от кожуры и нарезают ломтями. Добавляют к нему глицерин с водой и варят до состояния мягкости; затем фильтруют, оставляют стоять на некоторое время и надосадочную жидкость декантируют.

И S О X S

ГЧ О

S m

Н

О •а

Готовые среды, имеющиеся в продаже, отмечены звездочкой.

* На 1 л среды добавляют 10 г лактозы, 3 г протеозопеп-тоиа, 1,5 г желчных солей.

сДля морских штаммов пользуются профильтрованной морской водой или ее заменителем (имеется в продаже) или же смесью следующих солей (г/л): NaCl (25); MgSO»-7HjO (5); CaCl2-2HjO (1) и KCl (1). Добавляют также глицерофосфат натрия (0,1 г/л) и трис-буфер (Sigma, 1 г/л).

d Протеозопептои (5 г/л).

е Растворяют 6,05 г триса и 5,8 г яблочной кислоты в воде и доводят рН до 6,8 с помощью NaOH.

$ Непосредствеиио перед экспериментом к другим компонентам среды добавляют отдельно стерилизованные растворы L-аскорбииовой кислоты (0,1 г) и L-цистииа (0,1 г). L-аскор-бииовую кислоту стерилизуют фильтрованием, а L-цистии — фильтрованием или автоклавироваяием.

?° ^ К другим компонентам среды добавляют 200 мл освет-" ленной рубцовой жидкости (см. ниже), 2 г триптиказы (BBL) и 1 мг гемииа. Устанавливают рН 6,7, объем доводят водой до 1 л и автоклавируют. Непосредственно перед экспериментом к автоклавированной среде добавляют стерильные растворы Ь-цистеина-НС1-Н20 (0,5 г) и Na2C03 (4 г).

Культуры инкубируют в атмосфере, содержащей С02. Осветленную рубцовую жидкость готовят из свежесобраииой рубцовой жидкости коровы, содержащейся на рационе из сена. Жидкость фильтруют через марлю и дают ей отстояться, после чего прозрачную надосадочиую жидкость центрифугируют 20 мии при 14 000 об/мин [21]

страница 42
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(25.11.2017)