ние).

' Аэробы.

^ Для стимуляции и инициации роста необходим экстракт из бактериальных клеток. ь

S. hyatina [151] можно выращивать на синтетической среде с глюкозой, лактозой или сахарозой в качестве источника углерода, нитратами нлн солями аммония в качестве источника азота и в присутствии витаминов Вг и В]2. Лучший рост достигается прн использовании в качестве источника азота органических соединений, например глутамата нлн пептона.

' Вместо биотина необходим витамин В12 (40 мкг/л).

т Ко всем средам для С. halobacteroides необходимо добавлять NaCl до концентрации 2%.

п Потребность С. vibrloides в витаминах удовлетворяется рибофлавином (100 мкг/л),

° Микроа ;рофилы.

Р Источником углерода служит С02 Перед разливом стерильного водного раствора агара, содержащего свежеосажденное FeS, среду аэрируют с помощью С02 в течение 10—15 с FeS готовят, смешивая в кипящей дистиллированной воде эквнмолярные количества сульфата аммония и железа(И) и сульфида натрия. Осадок несколько раз промывают стерильной дистиллиро?. БИОХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ванной водой, декантируя ее. FeS можно вносить не в агар, а иа дно куль-туральной пробирки.

^ Необходима СОг; рост стимулируется гумусом нли почвенным экстрактом.

т Потребности в витаминах; кроме бнотниа необходимы тиамин (5 мг/л) и витамин В,2 (0,1 мг/л).

Непатогенная форма вирулентной Treponema pallidum; вирулентную форму Т. pallidum не удалось культивировать in vitro.

1 Наибольший урожай клеток получают при забуфернванин среды 0,033 М Ы-2-гндрокснэтнлпнразнн-Ы'-2-этаисульфоновой кислотой (HEPES), пнпера-зии-N, N'-бис (2-^танолсульфоновой кислотой) (PIPES) или ЛГ-трис(гидрокси-метнл)метнл-2-амниоэтансульфоновой кислотой (TES) или периодическим добавлением ЫаНСОз. Попытки вырастить микроорганизм на полиостью синтетической среде не увенчались успехом. Концентрацию дрожжевого экстракта можно уменьшить до 0,05%, но исключать его совсем нельзя. Потребности в витаминах (биотнне, рибофлавине и витамине Bja), вероятно, больше, чем было показано ранее, так как в используемой среде содержится 0,5%-ный дрожжевой экстракт — богатый источник витаминов. (HEPES и другие реактивы получены от фирмы Sigma или Calbiochem.)

и Известна также синтетическая среда, поддерживающая рост этого микроорганизма в микроаэробных условиях [18].

Для Agrobacterium гиЫ необходимы также пантотенат (100 мкг/л) и никотиновая кислота (100 мкг/л). A. tumefacCens хорошо растет без этих добавок на синтетической среде с NH+CI и глюкозой.

В дефицитной по азоту среде эти микроорганизмы фиксируют молекулярный азот, для чего необходимы следы молнбдата. A. chrococcutn в качестве источника азота использует также аммиак, нитрат и аминокислоты,

х Крайне устойчив к изменению рН (растет в диапазоне рН от 4 до 10).

Картофельную кожуру (125 г) кипятят в смеси глицерина с водой до того момента, когда она станет мягкой. Смесь фильтруют через марлю, выдерживают до тех пор, пока прошедший раствор не станет прозрачным и декантируют его. Затем добавляют соль и доливают водой до 1 л. Добавляют 15 г агара и нагревают до его полного растворения. Стерилизуют в 250-мнллнтровых колбах; к каждым 250 мл основного агара добавляют с соблюдением правил асептики 50 мл дефибрииированиой овечьей крови и перемешивают. Для получения жидкой среды агар не добавляют.

г Эта среда поддерживает также умеренный нлн слабый рост штаммов В. suis и В. abortus. Для культивирования этих видов подходит бульон для бруцелл [127].

аа К автоклавированной и охлажденной среде добавляют с соблюдением правил асептики 25 мл эритроцнтарной массы из крови человека нли 50 мл дефнбринированной кроличьей крови.

Клетки растут в атмосфере, состоящей на 40% из метана и на 60% из

воздуха; вторым известным источником углерода является метанол. с с

Только 6 из 146 испытанных соединений служат источниками углерода. Это р-окснбутнрат, ацетат, бутират, валерат, пируват и сукцннат.

^ Для роста требуется лишь несколько углеводов как источников углерода. Необходимая аминокислота — метионнн.

Углеводы (в том числе глюкоза) не используются в качестве источника углерода; однако таким источником служат многие органические вещества (например, насыщенные днкарбоновые кислоты, гликолат и тестостерон).

^ Рост некоторых штаммов стимулируется метноинном (0,02%) и глутами-новой кислотой (0,1%) (нли они нуждаются в них), другим необходима никотиновая кислота (100 мкг/л). Потребность в биотнне не обнаружена. Все другие потребности в питательных веществах сходны с потребностями Agrobacterium rhizogenes [46].

^ Рост зависит от повышенной влажности атмосферы [198, 199]. Адеиии, аденознн, рибофлавин и флавинаденннмононуклеотнд обладают выраженным ннгнбнрующнм действием.

h h

Из аминокислот необходим только метнонин, однако другие аминокислоты стимулируют рост. Потребность в метионнне удовлетворяется его D- или

L-изомерами или частично витамином Biz. Рост на полностью синтетической среде хуже, чем на среде с дрожжевым экстрактом.

11 В питательный агар добавляют сахарозу (5%).

Клетки растут иа цнтратной среде Козера, которая содержит те же компоненты, что и синтетическая среда. Среда Козера производится фирмой

Difco. ъь

К питательному бульону, используемому для приготовления жидкой среды, добавляют 10%-ную сыворотку. Рост иа твердой среде улучшается при повышенной влажности.

^ Аэроб, но некоторые штаммы растут и в анаэробных условиях.

тт Анаэробные условия достигаются пропусканием аргона. Выход биомассы и скорость роста на синтетической среде вдвое меньше, чем на комплексной. Добавление витаминов и других факторов ие способствует улучшению роста иа синтетической среде.

пп Основные культуры сохраняют на среде с агаром, содержащей 407о рубцовой жидкости, глюкозу, целлобиозу и крахмал.

00 Синтетическая среда отличается от вышеупомянутой тем, что в пей используют 0,02 М фосфатный буфер и иные, чем D-глюкоза, источники углерода. Источниками углерода служат ацетат, бутнрат, спирты, аминокислоты, пентозиые сахара, углеводороды и соединения ароматического ряда.

^ Среда отличается от вышеупомянутой присутствием аминокислот (см. сноску w в табл. 7.10). Лактат и сукцииат являются основными источниками углерода и энергии для В. catarrhalis.

^ В отношении потребностей питания N. gonorrhoeae существуют самые различные данные. Известно много природных вариантов; кроме того, у этих бактерий легко возникают мутации. Частые пересевы в лабораторных условиях приводят к появлению менее требовательных к среде штаммов, которые отличаются генетически от исходных нзолятов (Lankford, личное сообщение).

ГГ Окисляет аммнак до нитрита и фиксирует С02; не растет в морской воде.

SS

Значительно ннгибнруется большинством органических веществ в концентрациях 10—3 М.

" 5. acidocaldarius является факультативным автотрофом; он растет быстрее на среде, содержащей минеральные соединения и 0,1%-ный дрожжевой экстракт, чем на среде, содержащей серу.

иа Исследования проводились иа слегка загрязненной культуре; попытки дальнейшей очистки не предпринимались нз-за очень низкой скорости развития Methanosarcina. [В настоящее время чистые культуры Methanosarcina получены в работе Balch et al , Microbiol. Rev., 43, 260, 1979). — Прим.. ред.] Вероятно, авторы считали, что загрязнение не влияло на результаты экспериментов.

На 1 л основной среды добавляют 15 г формната натрия и (после автоклавировання) стерильный раствор, содержащий 0,5 г пирувата калия. Джоунс и Стэдмэн [99] рекомендуют добавлять к среде селенит (1 мкМ) и вольфрамат (100 мкМ).

Добавляют глюкозу до концентрации 0,5%.

Факультативный анаэроб,

^ Штаммы варьируют от факультативных анаэробов до аэробов.

Согласно неправильной классификации [139], ранее известен как Leu conostoc mesenteroides Р-60.

aaaKele, McCoy, Bacteriol. Proc, p. 66, 1970

для ЛуЧШеГо роста на 1 л среды 58А добавляют следующие компоненты- 300 мг аскорбиновой кислоты и 5 мл твнна 80. ссс

По крайней мере для одного штамма L. delbrueckii (а именно для L. delbrueckii 730) нужны также пирндоксаминфоефат (0,002 мг/л) и тимиднн (4 мг/л).

Вместо пантетенна добавляют 20 мкг пантотеиата кальция.

еее л

В отсутствие ацетата этот микроорганизм нуждается в факторе роста, названном мевалоновой кислотой (поставляется в форме лактона фирмой Sigma Chemical Co.). Его добавляют к среде в концентрации I мкг/л.

?^Гемин (0,2 мг/л), а также COj стимулируют рост в анаэробных условиях.

SSS для рОСТа необходима СО*.

^^Бсе штаммы С. bovis нуждаются в ненасыщенных жирных кислотах с длинной цепью, пальмитоолеиновой, рицииолевой или олеиновой. Эта по-требиость эффективно восполняется 0,1%-ним твииом 80.

ш Для продолжительного поддержания культуры нужен кровяной агар. В качестве жидкой среды рекомендуется питательный бульон, обогащенный 0,3%-ным дрожжевым экстрактом, 0,1%-ным солянокислым цистеином, 1%-иой глюкозой и 5%-иой асцитнческой жидкостью человека. В случае другого штамма Eubacterium при добавлении субстратных количеств аргинина к основной среде с пептоном рост значительно стимулируется [207].

^ Род, включает в себя паразитов, сапрофитов и промежуточные формы. Сапрофитные штаммы растут на простых средах, а остальные — на более сложных нли требуют добавок, например мнкобактина. Некоторые штаммы культивируются только иа живых клетках. Все штаммы на любой среде растут медленно.

Все жидкие среды кипятят в течение 10 мин и перед инокуляцией быстро охлаждают. Все культуры инкубируют в анаэробных условиях в атмосфере, состоящей нз 80% N2, 10% Н2 и 10% С02.

^ Бактерии растут на среде Чапека без пептона. ттт gaKTepHH (Кр0ме отдельных, которые отмечены) являются облигат-иыми паразитами и жизнеспособны только в животных клетках. Их можно выращивать в эмбриональных желточных мешках цыпленка и в культурах тканей позвоночных.

ппп Культивируются in vitro на искусственных средах. Для роста необходима сыворотка и желателен гемоглобин. В некоторых случаях стимулирующий эффект оказывают глутатнон и аскорбиновая кислота. Чаще всего их выращивают на полужидких