Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 1

Автор Ф.Герхардт

помощью ВаС03) глута-ральдегидом [доведенным до концентрации 0,1% (объем/объем)], выливают в воронку над фильтром. Затем к пробе добавляют 0,1%-ный (вес/объем) раствор акридинового оранжевого (с 40%-ным содержанием красителя в исходном реактиве) в 0,02 М трисе, рН 7,2 (при 20°С) с таким расчетом, чтобы конечная концентрация красителя составила 0,01% (вес/объем). После прокрашивания в течение 3 мин проба с акридиновым оранжевым просасывается (под действием приложенного отрицательного давления 125 мм рт. ст.) через мембранный фильтр. Затем фильтр вынимают из аппарата и кладут на каплю иммерсионного масла (типа I, F или A; Cargil-le Laboratories, Inc., Cedar Grove, N. J.), находящуюся на предметном стекле. Другую каплю наносят сверху и накрывают покровным стеклом. Эти операции следует проводить быстро, чтобы фильтр на высох. Препарат просматривают в стандартном микроскопе, оснащенном системой возбуждения люминесценции падающим светом, включающей в себя 100-ваттную галогеновую лампу, возбуждающий светофильтр BG-12, запирающий светофильтр LP-510 и светоделитель FT-510. Бактерии, находящиеся на фильтре, люминесцируют зеленым светом; при этом можно наблюдать отдельные морфологические типы.

Другой, занимающий много времени способ пропагандирует Хенрици. Он рекомендует подвешивать пред

метные или покровные стекла в исследуемой воде на несколько часов или дней, а затем окрашивать и микро-скопировать их. В этом случае происходит отбор микроорганизмов, обладающих свойством прикрепляться к поверхностям, характерным для многих обитателей пресных и соленых вод.

3.4.5. Почвенные бактерии

Известны неселективные методы прямого микроскопического изучения почвенных бактерий [3, 11]. В качестве миниатюрных предметных стекол используют специальные стеклянные капилляры разной ширины с прямоугольным сечением (Carlson Scientific Inc., Matteson, IL 60443). Существуют капилляры, у которых одна стенка очень тонкая (0,17 мм). Устройство для взятия проб, так называемый пелоскоп, состоит из набора четырех или пяти пучков прямоугольных в сечении капилляров длиной 1—2 см, по пять капилляров в пучке. Пелоскоп заполнен стерильной дистиллированной водой и прикреплен к держателю (с маркированной миллиметровой шкалой) посредством резиновой полоски. Его вертикально опускают в исследуемый образец почвы. По истечении определенного срока пелоскоп извлекают и исследуют под микроскопом, чтобы увидеть «микробные ландшафты» в капиллярах. Рекомендуется тщательно отмыть пелоскоп водой и удалить из держателя захваченные клетки. Каждый капилляр снаружи протирают дочиста бумагой для линз и затем просматривают тонкой стенкой вверх. При помощи специальных методик капилляры можно превратить в вечные препараты [11].

Другой простой способ, позволяющий произвести отбор (конечно же, неполный) почвенных микроорганизмов для микроскопического изучения, заключается в следующем. Пробу почвы помещают на дно часового стекла или маленькой чашки. При помощи пастеровской пипетки снизу к ней добавляют воду до тех пор, пока над пробой не появится водная поверхность. На эту поверхность кладут покровные стекла или электронно-микроскопические сетки, к которым прикрепляются микроорганизмы, находящиеся в поверхностной пленке.

3.5. ЛИТЕРАТУРА

3.5.1. Общая литература

1. N orris J. R., Ribbons D. W. (ed.). Methods in microbiology, vol. 5A,

Academic Press, Inc., New York, 1973.

Материал, представленный в первой части этого тома, особенно полезен как дополнение к тому, что излагалось в данной главе. В частности, укажем следующие главы:

I. Microscopy and micrometry, by L. В. Quesnel, p. 1—103.

II. Staining bacteria, by J. R. Norris and H. Swain, p. 105—144.

III. Techniques involving optical brightening agents, by A. M. Pa-ton and S. M. Jones, p. 135—144.

IV. Motility, by T. lino and M. Enomoto, p. 145—163.

2. Paik G., Suggs M. T. Reagents, stains, and miscellaneous test procedures, p. 930—950. In E. H. Lennette, E. H. Spaulding, and

J. P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 2nd ed. American Society for Microbiology, Washington, D. C, 1974.

Приведены некоторые дополнительные методики и соответствующая библиография по медицинской микробиологии.

3.5.2. Специальная литература

3. Aristovskaya Т. V. The use of capillary techniques in ecological studies in microorganisms, p. 47—52. In T. Rosswall (ed.), Modern methods in the study of microbial ecology. Swedish National Science Research Council, Stockholm (1973).

4. Bartholomew J. W. Variables influencing results, and the precise definition of steps in gram staining as a means of standardizing the results obtained. Stain Technol., 37, 139—155 (1962).

5. Casida L. Interval scanning photomicrography of microbial cell populations, Appl. Microbiol., 23, 190—193 (1972).

6. Henrichsen J. Bacterial surface translocation: a survey and classification, Bacteriol. Rev., 36, 478—503 (1972).

7. Hobbie J. E., Daley R. J., Jasper S. Use of Nucleopore filter for counting bacteria by fluorescence microscopy, Appl. Environ. Microbiol., 33, 1225—1228 (1977).

8. MacRae T. H.t McCurdy H. D. The isolation and characterization of gliding motility mutants of Myxococcus xanthus. Can. J. Microbiol., 22, 1282—1292 (1976).

9. Mason D. J., Powelson D. M. Nuclear division as observed in live bacteria by a new technique, J. Bacteriol., 71, 474—479 (1956).

10. N oiler E. C, Durham N. N. Sealed aerobic slide culture for photomicrography, Appl. Microbiol., 16, 439—440 (1968).

11. Perfil'ev B. V.r babe D. R. Capillary methods of investigating micro-organisms, Oliver and Boyd, Edinburg, 1969.

12. Robinow C. F. Morphology of bacterial spores, their development and'germination, p. 207—248. In: I. C. Gunsalus and R. Y. Stanier (ed.), The bacteria, vol. 1, Academic Press, Inc., New York (1960).

13. Truant J. P. Brett W. A., Thomas W. Fluorescence microscopy of tubercle bacilli stained with auramine and rhodamine. Henry Ford Hospital Med. Bull., 10, 287—296 (1962).

14. Vela G. R., Wyss O. Improved stain for visualization of Azotobac-ter encystment, J. Bacteriol., 87, 476—477 (1964).

Глава 4

ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ Р. Коул, Т. Попкин

Исследователь, собирающийся работать на электронном микроскопе и никогда не сталкивавшийся с ним ранее, должен перенять опыт от специалистов, работая вместе с ними, причем желательно на такой же модели, на которой он планирует проводить эксперименты. Предварительно он должен запастись руководствами и справочниками и, возможно, пройти подготовку на специальных курсах. Методы электронной микроскопии, предлагаемые нами в данной главе, предназначены для тех, кто имеет доступ к микроскопу и должен проводить бактериологические исследования. Исследователи могут почерпнуть для себя много полезного, не только занимаясь на курсах, но и осваивая необходимые манипуляции с помощью квалифицированного оператора, а также привлекая необходимые сведения, изложенные в руководствах и литературе по общим вопросам [1 —14]. Мы не будем здесь дублировать все эти источники инструкций, так как для каждого микроскопа существуют собственные правила работы.

В отличие от светового микроскопа, в отношении которого предполагается, что каждый, кто на нем работает, способен использовать его наилучшим образом, электронный микроскоп — специализированный прибор, который настраивается и обслуживается специалистами. Это связано с расходами на запасные части и производством ремонтных работ, осуществляемых по контракту с обслуживающим предприятием-изготовителем. Для того чтобы оправдать капитальные вложения и затраты, связанные с организационными трудностями, в большинстве случаев на одном электронном микроскопе работает много людей. Часто к электронным микроскопам прилагаются устройства для производства срезов, получения реплик методами напыления сколов и травления замороженных образцов и, возможно, для других видов

микроскопии, в том числе — сканирующей электронной микроскопии. Те, кто отвечает за бесперебойную работу микроскопов, устанавливают правила и нормы обращения с ними, обеспечивающие сохранность оборудования и непрерывность работы, и строго следят за соблюдением этих правил. Работающему с микроскопом следует с вниманием и заботой отнестись к прибору (некоторые его части устроены очень тонко, и имеет большое значение, какие ручки крутят при его настройке), а также к тому, кто будет работать после него («золотое правило»). Работающий на электронном микроскопе должен быть также предельно честным в отношении действий, которые он предпринимает (или не предпринимает), чтобы можно было быстро преодолеть затруднения, возникающие при эксплуатации и устранении неполадок. Необходимо придерживаться следующих правил.

1. На любом приборе и при выполнении любой манипуляции вас должны контролировать не только для того, чтобы вы лучше его освоили, но и для того, чтобы вы сами и отвечающий за микроскоп оператор знали слабые места в вашей подготовке.

2. Если микроскоп не работает, ведет себя странно или требует приложения необычных для нормальной работы усилий, остановите эксперимент на безопасной стадии, обдумайте все и обратитесь за помощью к специалистам.

3. Не поддавайтесь соблазну произвести самостоятельный ремонт, лучше честно признаться в совершенных ошибках и обратиться за помощью к специалистам.

4. Ведите записи, даже если на данном электронном микроскопе не заведен такой порядок, обязательно отмечайте время своей работы и регистрируйте все случаи отклонения от нормы.

5. Делайте собственные записи последовательных процедур и имейте их с собой во время работы. Используйте контрольный список, который должен включать, например, следующие пункты.

Положения ручек и выключателей при включении и налаживании прибора (а также при выключении) Пусковые манипуляции Требования по готовности прибора к работе Процедуры по настройке, выполняемые повседневно

Центрировка диафрагмы объективной линзы Настройка конденсора Компенсация астигматизма

Действия по переходу на широкопольное сканирование

Рабочие операции и о

страница 16
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 1" (4.60Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(27.05.2017)