Биологический каталог




Биомембраны - Молекулярная структура и функции

Автор Р.Геннис

в свою очередь отшнуровываются с образованием внутриклеточных везикул. Эти процессы составляют часть эндоцитозного и экзоцитозного путей.

Глава 10

БИОГЕНЕЗ МЕМБРАН

10.1. Введение

В этой главе мы рассмотрим процесс образования мембран. Этот процесс начинается с синтеза белковых и липидных компонентов, которые затем должны быть доставлены к месту назначения. Принимая во внимание все разнообразие мембран, существующих в типичной эукариотической клетке, можно сделать вывод, что для осуществления этого процесса необходимы необычайно точные механизмы.

В первой части этой главы мы обсудим вопросы биогенеза мембранных белков. В принципе имеются две главные проблемы, касающиеся сборки мембранных белков.

1. Все закодированные в ядре белки синтезируются общим пулом рибосом. В связи с этим возникает вопрос: как отдельные мембранные белки доставляются к месту назначения? Чем отличаются белки плазматической мембраны от белков внутренней митохондриальной мембраны или от белков мембран эндоплазматического ретикулума? Эту сложную проблему сортировки можно решить только при наличии определенных сигнальных последовательностей в каждом полипептиде, а также соответствующего аппарата узнавания.

2. Каков истинный механизм встраивания мембранных белков в мембрану и как при этом достигается правильная их ориентация относительно мембранного бислоя? Требуют ли механизмы встраивания и ориентации также наличия определенных сигнальных элементов и систем узнавания и если да, то каковы они? Какие свойства обеспечивают при встраивании мембранных белков формирование правильной третичной, а также червертичной структуры в случае мультисубъедииичных ансамблей?

За последнее десятилетие в поиске ответов на все эти вопросы достигнуты большие успехи, причем они становятся все более значительными. Это в большой мере обусловлено тем, что для выяснения роли специфических сигнальных полипептидных последовательностей в этих процессах стала использоваться рекомбинантная ДНК. Хотя не на все вопросы удалось найти ответы, полученные

456 Глава 10

результаты все больше убеждают в том, что совершенно разные на первый взгляд системы в действительности обладают фундаментальным сходством. Например, не так давно [1268] было показано, что механизм секреции белков имеет много общего с механизмом синтеза белков плазматической мембраны. Совсем недавно достигнут большой прогресс в понимании общих принципов переноса белков через мембраны митохондрий, эндоплазматического ретикулума и грамотрицательных бактерий [1576, 1136, 1288]. Эти экспериментальные системы изучались наиболее интенсивно. И хотя между соответствующими процессами есть значительные различия, они имеют ряд общих особенностей.

1. Существует идентифицируемая часть полипептидной последовательности, которая служит участком узнавания, или «сигналом», направляющим отдельный полипептид к мембране, в которую он встраивается. Эти сигнальные участки часто расположены на N-конце новосинтезированного полипептида и отщепляются специфическими сигнальными пептидазами после встраивания его в нужную мембрану или переноса через нее. Для обозначения N-концевого сигнала различными авторами использовались следующие термины: сигнальный пептид, сигнальная последовательность, транзитный пептид, лидирующий пептид, пре-последовательность.

2. Процессы трансляции и встраивания белков в мембрану можно разделить в эксперименте. Для сборки мембранных белков в большинстве случаев необходима энергия, отличающаяся по величине от той, которая требуется для их трансляции на рибосоме. Замечено, что in vivo трансляция и перенос часто бывают тесно сопряжены во времени.

3. Связавшийся с мембраной-мишенью полипептид должен, кроме того, находиться в конформации, в которой может осуществляться его перенос через мембрану или встраивание в нее. Во многих случаях перенос белков через мембраны происходит от N-конца к С-концу, при этом необходимо, чтобы белок был по крайней мере частично развернут или слабо свернут. Полипептид может трансло-цироваться в вытянутой форме в ходе энергозависимого процесса [1252].

Первая группа вопросов, которые мы рассмотрим, связана с сортировкой белков во время биогенеза и сборки. На рис. 10.1 представлена схема., иллюстрирующая всю сложность этой проблемы и суммирующая данные по эукариотическим клеткам и грамот-рицательным бактериям. Доставка каждого белка к месту назначения обеспечивается иерархией сигналов, закодированных в каждом полипептиде. Например, большинство белков, предназначенных для эндоплазматического ретикулума или митохондрий, синтезируется в виде предшественников большей молекулярной массы (пре-белков); на N-конце у них имеется дополнительная последователь-

Биогенез мембран 457

1 ЭУКАРИОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА

Наружная мембрана межмембранное пространство Внутренняя мембрана матрице

Межмембра иное простра не тво Стррма ~ -^<^^:^ s наружная мембрана внутренняя мембрана

мемврана тилакоида,

Зндоплазмати ческай ретикулум

Т^ланоидное простри не тво

базолатера льная область плазматической мембраны

Конститутивная

--

Зн-)Оцигпознь:и путь

лум {шероховатый или гла

7~-

О ни и)

т

/ скреторная гранула

Аппарат Гольджи

Апикальная область плазматической мемдраны

б. ГРАМОТРИЦА ТЕЛЬНЫЕ ВЛКТЕРИИ

Плазматическая мембрана

Периплазма гни лесное пространство

наружная мембрана

* Секреция во внеклеточное пространство

Рис. 10.1. Сортировка белков в клетках эукариот и грамотрицательных бактерий. Первичные сигналы сортировки направляют полипептид к нужной органенлле и необходимы для транслокации. Вторичные сигналы определяют их окончательную локализацию. Показан экзоцнтозный путь.

ность, которая отщепляется особыми протеолитическими ферментами, имеющимися в этих органеллах. Такие первичные сигналы весьма разнообразны и необходимы для того, чтобы полипептиды были узианы при транслокации специфическими рецепторами в этих органеллах. Связывание с митохондриями происходит сразу после завершения трансляции. Однако для большинства белков, направляемых в эндоплазматический ретикулум в клетках млекопитающих, наблюдается иная картина. Как видно из рис. 10.1, после связывания белков с соответствующей органеллой должна произойти дальнейшая сортировка. Для этого нужна дополнительная информация, которая также должна быть закодирована в каждой полипептидной последовательности и может рассматриваться как вторичные сигналы. В нескольких случаях их удалось идентифицировать как сигнальные последовательности, физически отделенные от первичных, хотя, возможно, так бывает не всегда. Позже в этой

458 Глава 10

Рис. 10.2. Три общие модели возможной сборки белков в мембране. Две первые (А и Б) предполагают, что белок транспортируется в линейной форме через некий белковый канал. При наличии стоп-сигнала процесс останавливается, в противном случае через мембрану проходит весь белок. Модель В предполагает, что гидрофобные элементы полипептида самопроизвольно включаются в липидный бислой. Гидрофобный элемент может представить собой одиночную спираль или более сложную структуру. Процесс может быть опосредован белками.

главе мы рассмотрим характерные примеры использования этих сигналов при сортировке белков.

Особый интерес для нас представляет процесс сборки мембранных белков, который целесообразно рассмотреть в связи с их сортировкой. На рис. 10.2 схематически показаны три общих механизма проникновения пептидного предшественника в мембрану. Механизмы А и Б являются вариантами схемы линейного вытеснения, согласно которой сигнальная последовательность направляет полипептид к переносящему устройству, которое включает в себя заполненный водой канал. Сигнальная последовательность может проходить прямо сквозь канал (механизм А) или оставаться связанной с мембраной, образуя, как показано на рис. 10.2, петлю (механизм Б). В отсутствие какого-либо сигнала остановки процесса переноса полипептид будет транспортироваться через мембрану целиком. Однако, если внутри полипептида имеется второй сигнальный пептид, называемый стоп-сигналом переноса, то процесс останавливается и стоп-сигнал переноса становится трансмембранным сегментом зрелого мембранного белка. Фиксируя белок в мембране, стоп-сигнал переноса действует как сигнал сортировки [1491]. Если в белке имеются и другие сигналы начала и конца переноса, то будут образовываться следующие трансмембранные сегменты. Рис. 10.3 показывает, как сочетание нескольких видов сигналов может на-

Биогенет мембран 459

правлять последовательность реакций таким образом, чтобы создавалось широкое разнообразие типов упаковки встраиваемых в мембрану белков эндоплазматического ретикулума. Заметим, что сигнальные последовательности, которые не удаляются протеолитиче-ским путем, остаются в начале трансмембранных сегментов и могут использоваться для инициации транспорта фланкирующих полнпептидных доменов на N- или С-конце. К сожалению, эта простая схема не является исчерпывающей, известны примеры, когда сигналы изменяют свою функцию в зависимости от обстоятельств [51, 1000] или когда в правильном включении в мембрану существенную роль играют взаимодействия между предполагаемыми сигналами внутри полипептида [365, 275].

Схема В на рис. 10.2 иллюстрирует возможную роль самопроизвольного включения в мембрану гидрофобных элементов полипептидного предшественника. Этот механизм может реализовываться только тогда, когда включение в мембрану происходит после трансляции полипептида. Первым примером, подтверждающим существование этого механизма, является пробелок оболочки фага М13 (разд. 10.3.1). Модель самопроизвольного включения может использоваться для объяснения механизма встраивания поперек мембраны амфифильных а-спиралей или /З-структур. Этот процесс может также, конечно, быть белокзависимым.

В следующих двух разделах этой главы рассматривается экзоци-тозный путь (см. ниже) в эукариотических клетках и обсуждается, как и где собираются и транспортируются внутри клетки мембранные белки. О координации биосинтеза мембранных липидов и белков в прокариотических или эукариотических клетках известно немного. Установлено, впрочем, что в нескольких случаях сверхпро-цукция отдельных мембранных белков приводит к разрастанию внутриклеточных мембран, содержащих липиды и в преобладающем количестве — сверхпродуцированный белок [1588, 383, 768]. Последняя часть этой главы посвящена биогенезу липидов. То обстоятельство, что пипидный состав разнообразных мембран в эукариотической клетке существенно различается, позволяет задаться вопросом, как эти композиции липидов создаются и поддерживаются. Мы остановимся, в частности, на скорости обмена разных видов липидов между мембранами и возможных механизмах, облегчающих перенос липидов от места их синтеза к месту назначения. Наконец, известно, что липидный состав мембран многочисленных организмов варьирует при изменении внешних условий. Природа такого адаптивного ответа в связи с биогенезом мембранных липидов обсуждается в последнем разделе.

460 Глава 10

7 Сг-се"^с\е^ь'й "его

L

ЫРГ77,--С t

у N TTzffil N

C*apv- ¦ 1 с

\1ем?ра1->чоги белой с н-нонцевым якорем чеоп\^еллпемая сигнальная последовательность

NZ223-—-С рЯ

8. мемераннь.и. ослон 0^ил:-. wc^-^s сиена пь \-?нас\ ки

последов? тельнос^ь

макале конрц

Ft

N 2222 л с

№ 1МЕРЫ

Препро-паратиреоидньт гормон

Не'араминидаза, вируса Zpu nna

Гликофорин

0>нбелок вируса везикулярного

стоматита Гемагглютинин вируса

гриппа

г Мембранной белом : ьесчольними трачемемдраннь'^и сегмента Отщепляемая сигнальная последовательность

начале Начало хонец

Н 7ZZL{ n^n

Субъединица ацетил-линового рецептора

д. мембраннь/й. ослон с ы-^е-уцебо'м якорем .чсстшеллярмл.р с^гчальная последовательность ы-счарух~и Х'Внутпи

М ГхУлЧ-

ЦитоарОм Р^5>0 ч лет он печени нрысь!

\ мембранный белом с внутренними сигнальными сегментами Невтицерляемач сигнальная последовательность \-снаружа

Р СШ> СЩС впсиЦсы пранмхВ-г\«—' гШШ-^ ранных сегментов)

ж Мембранный белок с внутренней сигнальной последовательностью с несколькими .трансмембранными чеотщепляемоя сигнальная последовательность сегчен ¦

' белок полосы 3 [-12 транс -

мембранных сегментов) Переносчик глюкозы {-12 транс-мембранных сегментов)

¦¦1-Зн*7'Ои

з "еыбеа белок г внутренней сигнальной последовательностью и N концевым якорем лсотщепляемая сигнальная последовательность

N 5~г"?и,С-снаружи n^47777^ ^Jv777^|g) нсиалоглинопропеиновый

рецептор Три нсферриновый ре йен тор

Рис. 10.3. Модели, иллюстрирующие разнообразие типов укладки мембранных белков с отщепляемыми сигнальными последовательностями, а также неотщепляемыми N-концевыми и внутренними сигнальными последовательностями. Если сборка регулируется с помощью линейной последовательности сигналов, то используются сигналы трех типов: I) сигнал, инициирующий перенос С-концевого фланкирующего домена (а, б, в, г, ж, з); 2) сигнал, инициирующий перенос N-концевого фланкирующего домена (g, е)\ 3) стоп-сигналы переноса (б-з).

Биогенез мембран 461

10.2. Общие особенности экзоцитозного пути [966, 768, 552, 358, 1153, 634]

Экзоцитозным в эукариотических клетках называется путь, с помощью которого осуществляется транспорт белков, секретируемых клеткой или включаемых в наружную мембрану. Секретируемые белки синтезируются на связанных с мембранами рибосомах на цитоплазматической поверхности шероховатого эндоплазматического ретикулума и выводятся из клетки с помощью того же механизма, который используется для включения мембранных белков в эндоплазматический ретикулум (рис. 10.3). Если водорастворимый белок не имеет вторичных сигналов сортировки, то он транспортируется к клеточной поверхности и секретируется с помощью «конститутивного» пути [1580]. Этот путь экзоцитоза изучался с привлечением разных цитохимических методов, генетических подходов и биохимических исследований бесклеточных систем. Белки, транспортируемые этим путем, перемещаются из эндоплазматического ретикулума последовательно через различные компартменты комплекса Гольджи и в конце концов попадают на поверхность клетки (рис. 10.4). Они могут становиться компонентами цитоплазматической мембраны или, при наличии вторичных сигналов сортировки, оставаться в эидоплазматическом ретикулуме (рибофорин, цитохром Р450) или в комплексе Гольджи (различные гликозил-трансферазы). В комплексе Гольджи в ходе дальнейшей сортировки отделяются белки, секретируемые конститутивным путем (укороченный путь), от тех, которые направляются в лизосомы или концентрируются в секреторных гранулах, с помощью которых они затем секретируются при соответствующей стимуляции клетки (т. е. регулируемый секреторный путь). Кроме того, обнаружено, что в наружной мембране ядерной оболочки также могут синтезироваться мембранные гликопротеины, которые затем транспортируются с помощью экзоцитоза [1465].

Белки при транспортировке по экзоцитозному пути подвергаются посттрансляционным модификациям, в частности гликозилиро-ванию [358, 1245]. Хорошо изучена компартментация процессинга N-связанног

страница 65
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Биомембраны - Молекулярная структура и функции" (4.40Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(22.07.2017)