Биологический каталог




Биотехнология. Проблемы и перспективы

Автор Н.С. Егоров, В.Д.Самуилов, А.В. Олескин

трансформированными собственными клетками (раковые опухоли). Моноклональные антитела успешно применяют в аналитических целях для изучения клеточных органелл, их структуры или отдельных биомолекул.

До недавнего времени для гибридизации использовали исключительно миеломные клетки и В-лимфоциты мыши и крысы. Продуцируемые ими моноклональные антитела имеют ограниченное терапевтическое применение, так как они сами представляют чужеродный белок для человеческого организма. Освоение технологии получения гибридом на основе иммунных клеток человека связано со значительными трудностями: человеческие гиб-ридомы растут медленно, сравнительно мало стабильны. Однако уже получены гибридомы человека — продуценты моноклональ-ных антител. Оказалось, что и человеческие моноклональные антитела в некоторых случаях вызывают иммунные реакции, и их клиническая эффективность зависит от правильного подбора класса антител, гибридомных линий, подходящих для данного больного. К достоинствам человеческих моноклональных антител относится способность распознавать тонкие различия в структуре антигена, которые не распознаются моноклональными антителами мыши или крысы. Предприняты попытки получения химерных гибридом, сочетающих мышиные миеломные клетки и человеческие В-лимфоциты; такие гибридомы находят пока лишь ограниченное применение (К- Нагоп, 1984).

Наряду с несомненными преимуществами моноклональные антитела имеют и недостатки, порождающие проблемы при их практическом использовании. Они не стабильны при хранении в высушенном состоянии, в то же время в смеси обычных (поли-клональных) антител всегда присутствует группа антител, устойчивая при избранных условиях хранения. Таким образом, неоднородность обычных антител дает им дополнительный резерв стабильности при изменении внешних условий, что соответствует одному из основных принципов повышения надежности систем. Моноклональные антитела нередко имеют слишком низкое сродство к антигену и чрезмерно узкую специфичность, что препятствует их применению против изменчивых антигенов, характерных для инфекционных агентов и опухолевых клеток. Необходи6-ТГ 8-АГ

гипоксантин + ФРПФ

ГТФРТ гшримидиновые

нуклеотиды

ОСНОВНЫЕ ПУТИ

БИОСИТЕЗА

ЗАПАСНЫЕ ПУТИ

ТК

тимидин + АТФ

пуриновые нуклеотиды

аминоптерин

Рис. 6. Схема получения мутантных опухолевых клеток, дефектных по ферментам запасных путей биосинтеза нуклеотидов, и последующей селекции гибридных клеток (по Б. Б. Фукс и др., 1983; J. F. Kearney,

1984)

мо отметить также очень высокую стоимость моноклональных антител на международном рынке.

Общая схема получения гибридом на основе миеломных клеток и иммунных лимфоцитов включает следующие этапы.

1. Получение мутантных опухолевых клеток, погибающих при последующей селекции гибридомных клеток. Стандартным подходом является выведение линий миеломных клеток, не способных к синтезу ферментов запасных путей биосинтеза пуринов и пиримидинов из гипоксантина и тимидина соответственно (рис.* 6). Отбор таких мутантов опухолевых клеток проводят с применением токсических аналогов гипоксантина и тимидина. В среде, содержащей эти аналоги, выживают только мутантные клетки, которые лишены ферментов гипоксантингуанинфосфори-бозилтрансферазы и тимидинкиназы, необходимых для запасных путей биосинтеза нуклеотидов.

* Существует основной и запасной пути биосинтеза нуклеотидов. На запасном пути предшественником для пуриновых нуклеотидов служит гипоксантин, для пиримидиновых — тимидин. Превращение этих предшественников в нуклеотиды в реакции с фосфорибозилпирофосфатом (ФРПФ) катализируется гипо-ксантингуанннфосфорибозилтрансферазой (ГТФРТ) и тимидинкиназой (ТК). Аналоги гипоксантина и тимидина 6-тиогуанин (6-ТГ) или 8-азагуанин (8-АГ) и бромдезоксиуридин под действием ГГФРТ и ТК превращаются в соеднинения, сходные по структуре с нуклеотидами пуриновой и пиримидиновой природы, но не выполняющие их функции в клетке и, более того, блокирующие биосинтез нуклеотидов. Это приводит к гибели клеток, поэтому на среде с 6-ТГ (8-АГ) и бромдезоксиуридином выживают только мутантные клетки, утратившие ферменты запасного пути биосинтеза нуклеотидов. После слияния полученных миеломных клеток, дефектных по ГГФРТ и ТК, с нормальными В-лимфоцитами клеточную популяцию, содержащую слившиеся и не слившиеся клетки, переносят на среду HAT, в состав которой входят гипоксантин, тимидин и ингибитор основного пути биосинтеза нуклеотидов аминоптерин. Миеломные клетки, не способные к использованию гипоксантина и тимидина для синтеза нуклеотидов, погибают. В-лимфоциты имеют ферменты, необходимые для запасного пути биосинтеза, но они нежизнеспособны вне организма. Таким образом, среда HAT позволяет отобрать только гибридомные клетки, совмещающие способность к неограниченному росту и размножению in vitro с наличием ферментов, необходимых для утилизации добавленных нуклеотидных предшественников.

2* 2. Получение лифмоцитов — продуцентов антител к заданным антигенам. Животное (мышь, реже

страница 16
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77

Скачать книгу "Биотехнология. Проблемы и перспективы" (4.22Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(26.09.2017)