Биологический каталог




Руководство к практическим занятиям по микробиологии

Автор М.Н.Пименова, Н.Н.Гречушкина, Л.Г.Азова, А.И.Нетрусов и др.

а — 1,0—4,0; вода дистиллированная — 1000 мл; рН — 6,8—7,0.

4. Крахмало-аммиачная среда (г): растворимый крахмал — 10,0; (NH4)2S04 —2,0; К2НР04—l,0;MgSO4-7H2O—1,0; NaCI—1,0; САСО3 — 3,0; агар — 15; вода водопроводная — 1000 мл.

5. Среда Чапека (г): сахароза — 30,0 или глюкоза — 20,0; NaN03—2,0; К2НРО4— 1,0; MgS04-7H20 — 0,5; КС1 — 0,5; FeS04-7H20 — 0,1; вода дистиллированная — 1000 мл.

6. Среда БСА (бульон—сусло—агар). Мясо-пептонный бульон смешивают с равным объемом 6 °Б сусла и добавляют 2 г/л агара.

Среды стерилизуют при 1,0 или 0,5 ати в зависимости от наличия в них витаминов или других термолабильных факторов. Сахара стерилизуют отдельно при 1,0 ати в виде концентрированных растворов (обычно 40%) и добавляют в среды при посеве.

Среды для сахаролитических клостридий

1. Картофельная среда с мелом (см. с. 50).

2. Среда состава (г): глюкоза — 10,0; пептои — 10,0; К2НРО4 — 1,0;

СаСОз — 3,0—5,0; вода водопроводная — 1000 мл.

Мел стерилизуют отдельно и добавляют к стерильной среде.

Среды для молочнокислых бактерий

1. 8—10 °Б сусло с дробиной. К стерильной среде добавляют в избытке стерильный мел.

2. Обезжиренное молоко (обрат). Часто его разбавляют водой в отношении

2:1.

3. Среда MRS состава (г): гидролизат казеина — 10,0; мясной экстракт —

10,0; дрожжевой экстракт — 5,0; глюкоза — 20,0; ацетат натрия — 5,0; цитрат

аммония (двузамещенный) — 2,0; твин-80 — 1,0; К2НРО* — 2,0; MgS04-7H20—

0,2; MnS04-4H20 — 0,05; вода дистиллированная — 1000 мл.

Среда для сапрофитных коринебактерий

Состав (г): гидролизат казеииа — 10,0; дрожжевой экстракт — 5,0; глюкоза — 5,0; NaCI — 5,0; дистиллированная вода — 1000 мл; рН — 7,2—7,4.

* Глюкозу и витамины стерилизуют отдельно и вносят в стерильную среду перед посевом.

При использовании глюкозы жирные кислоты, образуемые пропионовокис-лыми бактериями, необходимо ежедневно нейтрализовьтать стерильным раствором 10%-ного NaHC03.

Среда для сапрофитных микобактерий и нокардий

1. Овсяный агар (ISP — 3) (г): овсяная мука (или хлопья) — 20,0; агар — 3,0 г.

Среды для актиномицетов

1. Овсяный агар (ISP — 3) (г): овсяная мука (или хлопья) —20,0; агар —

20,0—25,0; вода дистиллированная — 1000 мл; следы солей — FeS04 — 0,1;

МпС13 — 0,1; ZnSO* — 0,1. Вместо дистиллированной воды и солей можно использовать водопроводную воду. Для приготовления среды овсяную муку (или

хлопья) варят в 1 л воды 20 мин, фильтруют и доводят объем до 1 л. Среду

применяют для хранения и определения культуральных, а также морфологических признаков.

2. Синтетические и полусиитетичеокие среды для актиномицетов

Компоненты, г/л водопроводной воды Красиль-никова № 1 № 6 № 71 Гаузе № 1 Вакс-мана

Глюкоза 20,0 _

Крахмал растворимый — 10,0 15,0 20,0 —

Глицерин ?—? — — — 3,0

Кукурузный экстракт — 10,0 10,0 — —

KNOs (NHO2SO4 1,0 — — 1,0 —

3,0 4,0 — ?—

КгНР04 0,5 — 2,0 0,5 1,0

NaN03 — ?— — — 2,0

MgS04-7H20 0,5 — 0,5 0,5

КС1 ?— — — — 0,5

NaCl 0,5 3,0 ?— 0,5 —

СаСОз 1,0 3,0 3,0 — —

FeS04-7H20 следы — — следы 0.01

РН 7,0-7,2 7,0—7,2 6,6—7,2 7,2-7,4 7,0

Указанные среды используют как с агаром, та|к и без него. Среды с кукурузным экстрактом применяют для определения антибиотических свойств. Часто для этой цели используют также среду Гаузе № 2 состава (г); триптон — 2,5 или бульон Хоттиигера — 30 мл; пептон — 5,0; NaCI — 5,0; глюкоза — 10,0; вода водопроводная — 1000 мл; рН — 7,0—7,4. Среду можно использовать и с агаром.

Среды для бактерий, использующих целлюлозу

1. Среда Хетчинсона и Клейтона для аэробных бактерий (г), целлюлоза — кусочки фильтровальной бумаги; NaNC»3 — 2,5; К2НРО4 — 1,0; MgS04-7H20 — — 0,3; NaCI — 0,1; СаС12-4НЕ0 — 0,1; FeCl3-6H20 — 0,01; вода дистиллированная — 1000 мл.

2. Среда Имшенецкого для (анаэробных бактерий (г): фильтровальная бумага — .15,0; NaNH4HP04 — 1,5; К2НР04 — 0,5; КН2Р04 — 0,5. MgS04 7Н20 — 0,4; NaCI — 0,1; пептон — 5,0; MnSCy4H20 ~ следы; FeS04 ~ следы; СзСОз — 2,0; вода дистиллированная — 1000 мл; рН 7,0—7,4.

Среды для уксуснокислых бактерий

1. 4—6 °Б сусло — 100 мл; этанол (ректификат) — 4—5 мл

2. Среда состава (г): глюкоза —il00,0; дрожжевой экстракт — 10,0' СаС03— 20,0; агар — 15,0; вода дистиллированная — 1000 мл; рН 6,8.

3. Среда состава (г): дрожжевой экстракт — 5,0; пептон — 3,0; маинит — 25,0; агар —15,0; вода дистиллированная — 1000 мл.

3-ю среду используют для культивирования бактерий рода Giuconobacter.

Среды для бактерий рода Caulobacter

1. Картофельный агар.

2. Среда Красильиикова и Беляева состава (г): пептон — 1,0; дрожжевой

автолизат — 1,0 мл; MgSCy7H20 ~ 0,2; агар — 15,0; вода водопроводная —

1000 мл.

Среда Хирш и Коити для метилотрофов

Состав: (NH4)2S04 — 0,5 г; КН2Р04 — 1,36 г; Na2HP04-7H20 — 2,13 г; MgSCV7H20 — 0,2 г; CaCl^HjO — 10,0 мг; MnSO-4H20 — 2,5 мг; FeS04-•7Н20 —5,0 мг; Na2Mo04-2H20 — 2,5 мг; гидрохлорид метиламина — 6,75 мг; агар — 18,0 г.; вода дистиллированная — 1000 мл; рН — 7,2. Непосредственно в питательную среду добавляют 4 г/л метанола. В качестве источника азота в,место (NH4)2S04 можно использовать KNO3 или мочевину в концентрации 100 мМ.

Более простой средой является среда Мевиуса состава (г): NaNC»3 — il,0; К2НР04 — 1,0; NaCI — 0,5; MgS04-7H20 ~ 0,5; вода водопроводная — 1000 мл. К 20 мл стерильной среды добавляют несколько капель метанола или после посева колбы помещают в эксикатор, в который ставят открытую пробирку с метанолом.

Среды для азотфиксаторов

1. Среда Эшби для азотобактера и олигоиитрофилов (г): сахароза или маинит — 20,0; К2НР04 — 0,2; MgS04-7H20 — 0,2; NaCI — 0,2; FeS04 — 0,1; СаСОз — 5,0; вода дистиллированная — 1000 мл. В среду рекомендуется вносить смесь микроэлементов — 1 мл/л. Раствор микроэлементов (по Федорову) (г): НзВО, — 5,0; (NH4)2 Мо04-2Н20 — 5,0; ZnS04-7HeO — 0,2; KI и NaBr — по 0,5; Al2(S04)318H20 — 0,3; вода дистиллированная — 1000 мл.

2. Среда Виноградского для анаэробных озотфиксагоров рода Clostridium (г): глюкоза — 20,0; К2НР04 — 1,0; MgS04-7H20 — 0,5; СаСОз — 20,0; NaCl, MnS04, FeS04 — среды; вода дистиллированная — 1000 мл. В среду рекомендуется добавлять дрожжевой экстракт — 10 мг/л и раствор микроэлементов по Федорову (см. выше) — 1 мл/л.

3. Среда Федорова в модификации Калининской для выделения азотфикса-торов (г): глюкоза —10,0—15,0; К^НР04 — il,74; КН2Р04—0,91; MgSO^HzO — 0,3; СаС12-6Н20 — 0,1; NaCl — 0,5; FeCl3-6H20 — 0,01; дрожжевой экстракт — 0,015; смесь микроэлементов по Федорову — 1 мл; вода дистиллированная — 1000 мл.

4. Бобовый агар для клубеньковых бактерий. Состав среды (г): бобовый

отвар — 1000 мл; сахароза — 2,0; КН2Р04 — 1,0; MgSO^HsO i— 0,3; агар —

15; рН — 7,0—7,2.

Бобовый отвар готовят следующим образом: 50 г бобов (белой фасоли или гороха) заливают 1 л водопроводной воды и варят до набухания и растрескивания кожуры, но ие до полного разваривания. Отвар фильтруют через вату или несколько слоев марли и доводят объем до 1 л.

5 Маниитно-дрожжевая среда для клубеньковых бактерий (г): маииит — 10,0; дрожжевой экстракт — 1,0; К2НР04 — 0,5; MgS04-7H20 — 0,2; NaCl — 0,1—0,2; FeCh-бНгО — 0,002; агар — 15,0; вода дистиллированная — 1000 мл; рН 6,8-7,0.

Среда Траутвейна для Thiobacillus denitrificans

Состав (г): Na2S203-5H50 — 2,0; NH4C1 — 0,1; Na2HP042H20 — 0,1; MgCl2-6H20 — 0,1; KN03 — ll,0; NaHC03 — 0,1; раствор микроэлементов по Древсу — 5 мл; рН — 7,0.

Раствор микроэлементов по Древсу (Drews, il976), мг: ЭДТА Na — 800; MnCl24H20 — 10; СоС12-6Н^О — 4; CuS04 — 1; N32Mo04-2H20 — 3; ZnCl2 —2, LiCl — 0,5; SnCl2-2H20 - 0,5; H3B03 — 1; KBr — 2; Кл — 2; BaCl2 — 0,5; вода дистиллированная — 1000 мл; рН 6,0. На I л среды добавляют от 5 до 10 мл этого раствора.

Среда Снльвермана и Люндгреиа 9К для Thiobacillus ferrooxidans

1-й раствор: в 700 мл дистиллированной воды растворяют (г): (NH4)2S04 — 3,0; К2НР04 — 0,5; КС1 — 0Л; MgS04-7H20 — 0,5; Ca(NO3)2-4H2O~0,0K 2-й раствор: в 300 мл дистиллированной воды растворяют 44,2 г FeS04-7H20 и добавляют 1 мл 10 и. серной кислоты. Растворы стерилизуют отдельно и смешивают перед посевом. рН среды 2,5.

Среда Казерера для воДОРОДОКИСЛЯЮЩНХ бЭКтерий

Состав (г): NH4Cl—

1,0; К2НР04 - 0,5;

MgS04-7H20 - 0,2;

NaHCOa — 0,5; раствор

микроэлементов по

Древсу — 10 мл; рН 7,0, вода дистиллированная — 1000 мл.

После посева колбы помещают в эксикатор, заполненный газовой смесью состава (%): СО* — 10; Ог — 5—30; Н2 — 60—85; все газовые смеси для водород ных бактерий взрывоопасны, поэтому при работе необходимо строго соблю дать правила техники безопасности!

Среды для сульфатвосстанавливающих бактерий

Компоненты, г/л Баар Постгейта

дистиллированной воды

В

Лактат Na 3,5 мл 3,5 мл

Дрожжевой экстракт — 1,0

NH4C1 1,0 1,0

CaS04-H20 1,0 1,0

КН2Р04 0,5 0,5

MgSCy7H20 2,0 2,0

FeS04-7H20* — 0,5

(NH4)2Fe(S04)2-6H20 (соль Мора) 0,5 —

Раствор ?ликроэлементов по Пфеннигу (состав см. 1 мл

с. 207)** —

1%-ный раствор Na2S 5—8 мл 0,5 мл

в 1%-ном растворе NaHC03** 7,0-7,5

рН 7,0-7,5

* Сернокислое железо растворяют в 1%-ной НС1, стерилизуют и добавляют в стерильную среду перед посевом.

** Стерилизуют отдельно и добавляют в стерильную среду перед посевом;»

Среды для тиоиовых бактерий

Компоненты, г/л дистиллированной воды Среда Вак-смана для Thiobacillus thiooxidans Среда Старки для Thiobacillus thioparus

Сера (серный цвет)* 10,0 или

Na2S2Cv5H20** 5,0 5,0

(NH4)2S04 0,3 0,2

КН2РО4 3,0 3,0

СаС12.6Н20 0,25 0,25

MgSCy7H20 0,5 0,5

FeS04-7H20 0,01 0,01

Раствор микроэлемен-

10 мл

тов по Древсу 10 мл

рН 4,0—5,0 7,5—8,0

* Серу стерилизуют текучим паром или спиртом 2 ч, затем спирт испаряют в сушильном шкафу при 50°.

** Стерилизуют отдельно и вносят в среду перед посевом.

К двум последним средам для обогащения их факторами роста добавляют иногда дрожжевой или мясной экстракты в количестве 2—6 г на 1 л среды.

Среды для мицелиальных грибов

1. 3—4 °В сусло.

2. Пептонио-декстрозный агар Ваксмана состава (г): глюкоза — 10,0; пептон — 5,0; КН2Р04

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46

Скачать книгу "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" (2.03Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(19.10.2019)