ько при условии правильного освещения объекта. Лучший способ освещения основан на системе Кёлера. Установку света выполняют в такой последовательности.

1. Предварительная подготовка. Устанавливают микроскоп и осветитель на крестовину, что обеспечивает необходимое расстояние между источником света и зеркалом микроскопа. На предметный столик помещают препарат. Устанавливают объектив 8Х-Поднимают конденсор вверх до упора. Открывают полностью диафрагму конденсора. Отодвигают матовое стекло. Ставят плоское зеркало. Закрывают диафрагму осветителя, оставив только небольшое отверстие.

2. Включают осветитель. Пользуясь реостатом, регулируют яркость света таким образом, чтобы нить лампы давала слабый накал (иначе можно повредить глаза!). Корпусу осветителя придают такое положение, при котором свет падал бы в центр зеркала.

3. Закрывают зеркало микроскопа кружком белой бумаги и фокусируют на него изображение витка нити лампы осветителя. Это достигается передвижением патрона лампы осветителя.

4. Глядя в окуляр и слегка вращая зеркало, ловят в поле зрения изображение краев диафрагмы осветителя, которое будет иметь вид светлого пятна с нечеткими краями. Величина пятна зависит от степени раскрытия диафрагмы и положения объектива. Чем больше отверстие диафрагмы и чем выше объектив, тем больше пятно. Если оно занимает значительную часть поля зрения, его уменьшают, несколько опустив объектив |Или сузив отверстие диафрагмы осветителя, глядя при этом в окуляр. В тех случаях, когда пятно сдвинуто к краю поля зрения, его переводят в центр осторожным поворотом зеркала. По ряду причин (отсутствие идеального точечного источника света, аберрация) под микроскопом чаще всего видно не одно пятно, а несколько четких пятен. УстаУстановка света по Кёлеру. Хорошие результаты при работе новку света осуществляют по центральному пятну. В случае образования по краям диафрагмы осветителя цветной бахромы центрируют конденсор, смещая его регулировочными ручками в сторону красного цвета бахромы и корректируя при этом центровку зеркалом до момента симметричного распределения цвета бахромы.

5. Используя объектив 8Х» фокусируют объект в области светлого пятна.

6. Слегка опуская конденсор, фокусируют в плоскости препарата изображение краев диафрагмы осветителя, т. е. получают изображение светлого пятна с четко очерченными краями.

7. С помощью зеркала переводят полученное яркое пятно в центр поля зрения.

Если все сделано правильно, то это светлое пятно, видимое одновременно с препаратом, будет равномерно освещено. В противном случае нужно добиться его равномерного освещения, слегка поворачивая корпус осветителя.

8. Открывают диафрагму осветителя так, чтобы светлое пятно заняло все поле зрения.

9. Устанавливают объектив 40 X для препарата «раздавленная капля» или 90Х для фиксированного окрашенного препарата, на который предварительно наносят иммерсионное масло, и фокусируют объект.

Яркость освещения следует регулировать только изменением накала лампы осветителя или применением светофильтров. Положение зеркала, конденсора и диафрагмы осветителя больше не изменять! Никогда не следует поднимать и опускать конденсор или необоснованно использовать его ирисовую диафрагму для регулировки яркости поля зрения, так как это снижает разрешающую способность микроскопа, ухудшает изображение, может даже исказить его. Диафрагмой конденсора пользуются только для изменения контрастности изображения. Необходимость использования диафрагмы конденсора отпадает, если заранее привести в соответствие апертуру конденсора с апертурой используемого объектива. Как указывалось, апертура неиммергированного конденсора близка к 1, а числовая апертура объектива 40Х составляет 0,65. Практически можно воспользоваться следующим приемом: установив свет по Кёлеру и сфокусировав препарат с объективом 40 X, вынуть окуляр и, глядя в тубус, прикрывать диафрагму конденсора до тех пор, пока края диафрагмы не станут видны у границы равномерно освещенной задней линзы объектива. В этот момент числовая апертура конденсора будет примерно равна числовой апертуре объектива. Прн работе с объективом 90Х диафрагму конденсора оставляют открытой, поскольку числовая апертура этого объектива 1,25.

Правила работы с иммерсионным объективом. Сухо окрашенный препарат (приготовление см. ниже) помещают на столик микроскопа и, пользуясь объективом 8Х, устанавливают свет по Кёлеру. Затем в центр препарата на мазок наносят каплю иммерсионного масла и заменяют сухую систему иммерсионной. С помощью макрометрического винта опускают тубус микроскопа до погружения объектива в масло. Эту операцию нужно проводить очень осторожно, следя сбоку за тем, чтобы фронтальная линза не коснулась предметного стекла и не получила повреждения. После погружения объектива в масло осторожно, также пользуясь макровинтом, поднимают тубус и, наблюдая в окуляр, находят плоскость препарата. Точная фокусировка достигается с помощью микрометрического винта.

По окончании микроскопирования поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой хлопчатобумажной салфеткой, а затем той же салфеткой, но слегка смоченной бензином или бензолом. Оставлять масло на поверхности линзы ни в коем случае нельзя, так как оно способствует фиксированию пыли и может со временем привести к повреждению оптики микроскопа. Эффективен способ удаления масла, как жидкого, так и застывшего, свежеотломленным пенопластом. В отдельных случаях помогает протирка тканью, смоченной дистиллированной водой. Края линз с выступающей оправой очищают с помощью палочки, обернутой тканью.

6.1.2. Микроскопия в темном поле

Микроскопия в темном поле основана на освещении объекта косыми лучами света. Эти лучи не попадают в объектив, поэтому поле зрения выглядит темным. Если препарат содержит клетки микроорганизмов, то косые лучи, проходя через такой препарат, в значительной степени отражаются от поверхности клеток и настолько уклоняются от своего первоначального направления, что попадают в объектив. Тогда наблюдатель видит на черном фоне интенсивно светящиеся объекты, даже если их диаметр в 10 раз меньше, чем предел разрешения объектива. Такое освещение препарата достигается применением специального конденсора (рис. 47). Темнопольный конденсор имеет затемненную среднюю часть, поэтому центральные лучи света, идущие от зеркала, задерживаются, а в плоскость препарата попадают только боковые лучи, отраженные от зеркальных поверхностей, расположенных внутри конденсора (рис. 48).

При микроскопировании в темном поле можно увидеть объекты, величина которых измеряется сотыми долями микрометра, т. е. лежит за пределами видимости обычного микроскопа. Однако наблюдение объектов в темном поле позволяет различить только их контуры, но не дает возможности рассмотреть внутреннее строение.

Рис 47. Конденсор тем- Рис 48. Схема хода лучей в коиденного поля ОИ-13 соре темного поля:

/ — линза конденсора; 2 — черная пластинка, задерживающая центральные лучи, 3 — объектив

УСЛОВИЯ РАБОТЫ С ТЕМНОПОЛЬНЫМ КОНДЕНСОРОМ

Успешная работа с темнопольным конденсором возможна только при строгом соблюдении ряда условий.

1. Апертура темнопольного конденсора должна быть на 0,2-— 0,4 единицы больше апертуры объектива (см. схему хода лучей в темнопольном конденсоре, рис. 48). В противном случае часть боковых лучей попадет в объектив, что вызовет частичное освещение поля зрения и снижение контраста. Поэтому наблюдение в темном поле ведут обычно с иммергированным конденсором, имеющим апертуру около 1,2 и сухими системами с числовой апертурой 0,65—0,85. Когда используют объектив с большей апертурой, то для получения четкого изображения объектив обязательно диафрагмируют, т. е. снижают его апертуру. С этой целью в объектив, извлеченный из револьвера, вводят специальную вставную диафрагму, которая входит в комплект выпускаемых темнополь-ных конденсоров. Еще удобнее пользоваться объективами, снабженными ирисовой диафрагмой, расположенной между линзами. Вращением специального кольца, имеющегося на оправе, изменяют диаметр отверстия диафрагмы и тем самым снижают числовую апертуру объектива.

2. Накал лампы осветителя должен быть максимальным, так как темнопольный конденсор пропускает лишь незначительную часть поступающего светового потока. Поэтому особое значение приобретает правильная установка света, максимальное его использование и особенно тщательная центрировка.

3. Толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм* так как все конденсоры темного поля имеют очень маленькое рабочее расстояние. В противном случае фокус конденсора окажется в толще предметного стекла, а не в плоскости препарата, и наблюдатель ничего не увидит.

4. Следует обращать внимание на толщину и чистоту препарата. Чем толще препарат и чем больше в нем посторонних частиц, преломляющих свет (пыль, пузырьки воздуха и т. д.), тем менее контрастным получается изображение, так как каждая частица, отражая лучи, освещает поле зрения. Поэтому для приготовления препарата используют тщательно очищенные предметные и покровные стекла.

ПОРЯДОК РАБОТЫ С ТЕМНОПОЛЬНЫМ КОНДЕНСОРОМ

1. Препарат «раздавленная капля», приготовленный на тонком и тщательно очищенном предметном стекле, помещают на столик микроскопа и фокусируют с объективом 8Х- После этого положение тубуса не меняют до фокусировки препарата с объективом 40Х2. Вынимают светлопольный конденсор и окуляр, вывинчивают один из объективов. Револьвер микроскопа МБР-1 имеет одно свободное от объектива отверстие, закрытое специальной заглушкой, так что можно воспользоваться этим отверстием, вывинтив заглушку.

3. Закрыв диафрагму осветителя, фокусируют изображение нити лампы на зеркале, прикрытом кружком белой бумаги, как при установке света по Кёлеру. Предварительно необходимо с помощью реостата уменьшить яркость света.

4. Открывают диафрагму осветителя. Прикрывают верхний конец тубуса микроскопа матовым стеклом (вместо окуляра) и, слегка поворачивая зеркало, добиваются равномерного освещения поля. После этого зеркало перемещать не